Bài giảng Chuyển gene - Nguyễn Thái Thủy

Bài giảng "Chuyển gene" này cung cấp cho người học các nội dung như: Giới thiệu kỹ thuật chuyển gene, các phương pháp chuyển gene đang được sử dụng, Lipofection, Electroporation, Biolistics, Microinjection,... Mời các bạn cùng tham khảo.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Bài giảng Chuyển gene - Nguyễn Thái ThủyCHUYEÅN GENE Nguyeãn Thaùi Thuûy, MSc. National Sales Manager Bio-Rad Laboratories VN Email: thai_thuy@bio-rad.com NOÄI DUNGGiôùi thieäu kyõ thuaät chuyeån geneCaùc phöông phaùp chuyeån gene ñang ñöôïc söû duïng.LipofectionElectroporationBiolisticsMicroinjectionGIÔÙI THIEÄU KYÕ THUAÄT CHUYEÅN GENE 1928 – Baùo caùo ñaàu tieân veà chuyeån gene: vi khuaån coù theå thu nhaän sinh chaát naøo ñoù töø moâi tröôøng soáng laøm chuùng thay ñoåi. Chuyeån gene = chuyeån gene/genome töø sinh vaät naøy vaøo genome sinh vaät khaùc.GIÔÙI THIEÄU KYÕ THUAÄT CHUYEÅN GENE Chuyeån toaøn boä nuclear TAÏI SAO PHAÛI CHUYEÅN GENENghieân cöùu: Bieåu hieän gene trong teá baøo soáng Ñieàu hoøa bieåu hieän gene Taàm soaùt caùc höôùng trò lieäu Sinh hoïc ung thö TAÏI SAO PHAÛI CHUYEÅN GENEÖÙng duïng: duøng teá baøo soáng ñeå saûn xuaát caùcvector di truyeàn, protein taùi toå hôïp phuïc vuïcho caùc muïc ñích chuyeân bieät: heo saûn xuaát noäi taïng ngöôøi phuï vuï caáy gheùp, protein trò lieäu taùi toå hôïp theá heä thöù ba ñöôïc taïo ra vaø söû duïng ngay trong teá baøo chuû, thöïc vaät khaùng coân truøng, choáng chòu nhieät ñoä cao, choáng chòu laïnh, choáng chòu haïn vaccine DNA trò lieäu gene Taïi sao phaûi chuyeån gene Cloning:Cöøu vôùi genome xaùc ñònhCAÙC PHÖÔNG PHAÙP CHUYEÅN GENEKhueách taùn thuï ñoäng: vi khuaån thu nhaänDNA khoâng caàn baát kyø xöû lyù ñaëc bieät naøo.Khueách taùn ñöôïc hoå trôï: ví duï teá baøo vi khuaånxöû lyù CaCl2 keøm soác nhieät ôû 420C.Vector vi khuaån/virus: ví duï Agrobacteriumtumefaciens hay CaMV chuyeån DNA vaøo thöïcvaätLipofectionElectroporationBiolisticsMicroinjection LIPOFECTIONSöû duïng hoùa chaát höõu cô toång hôïp lipid-polyaminesthieát keá ñaëc bieät ñeå chuyeån nucleic acid vaøo teá baøoñoäng vaät höõu nhuõ. Caáu taïo bao goàm ñaàu öa nöùôc (+) vaø ñuoâi kî nöôùc (-). Ñaàu (+) baùm vôùi nucleic acid (-) Lipid micelle phaûn öùng vôùi maøng teá baøo ñeå chuyeån nucleic acid vaøo beân trong teá baøo. Söû duïng ñeå chuyeån DNA/RNA vaøo trong raát nhieàu loaïi teá baøo. Ñoäc tính ñoái vôùi teá baøo thaápLIPOFECTION ELECTROPORATIONElectroporation ( chuyeån gene xung ñieän) söû duïngñieän tröôøng maïnh trong thôøi gian ngaén laøm taïmthôøi maát tính oån ñònh cuûa maøng teá baøo. Trong thôøigian naøy, maøng teá baøo coù khaû naêng thaám cao ñoáivôùi caùc phaân töû hieän dieän trong moâi tröôøng xungquanh.Nhôø ñoù, DNA/ RNA coù theå ñöôïc chuyeån vaøo teábaøo. ELECTROPORATIONElectroporationCAÙC ÖU ÑIEÅM CUÛA ELECTROPORATIONKhoâng söû duïng hoùa chaát, khoâng laøm thay ñoåi caáutruùc, chöùc naêng cuûa teá baøo ñíchDeã thöïc hieänThôøi gian ngaénKhoâng ñoäc haïiHieäu quaû caoCoù theå aùp duïng cho nhieàu loaïi teá baøoÖÙNG DUÏNG CUÛA ELECTROPORATIONChuyeån caùc gene markerSaùt nhaäp caùc gene chöùc naêngChuyeån thuoác, protein, moài phaân töû, caùc chaátchuyeån hoùa, khaùng theå … ñeå khaûo saùt chöùc naêng vaøcaáu truùc cuûa teá baøo. CÔ CHEÁ• Teá baøo ñöôïc cho vaøo cuvette cuøng vôùi DNA• Cho xung ñieän qua cuvette vaø ñieän tröôøng taïo caùc loã treân maøng teá baøo.• DNA ñi vaøo trong teá baøo qua caùc loã• Khi xung ñieän taét, caùc loã treân maøng teá baøo ñoùng laïi, giöõ laïi caùc DNA beân.HEÄ THOÁNG GENE PULSER Xcell PC module (Pulse Controller) CE module (Capacitance Extender) Main unit ShockPod CHÖÙC NAÊNGTaïo hai loaïi xung: daïng haøm muõ giaûm, daïng soùngvuoâng. Ñaùp öùng toái öu vôùi nhieàu loaïi teá baøo,eukaryote hay prokaryote.