Bài giảng Kỹ thuật cấy chuyền và tạo dòng tế bào động vật

Bài giảng Kỹ thuật cấy chuyền và tạo dòng tế bào động vật nêu lên một số kỹ thuật nuôi cấy tế bào, cấy chuyền, tạo dòng tế bào. Mời các bạn tham khảo bài giảng để bổ sung thêm kiến thức về lĩnh vực này, với các bạn chuyên ngành Sinh học thì đây là tài liệu hữu ích.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Bài giảng Kỹ thuật cấy chuyền và tạo dòng tế bào động vật ThS. Phan Lữ Chính NhânKỹ thuật cấy chuyền và tạo dòng tế bào động vật Nội dung Tạo dòng tếNhắc lại bào Kỹ thuật Các ứng cấy dụng chuyền THU NHẬN MẪU MÔ CẮT NHỎ (chọn lọc mẫu mô quan tâm, cắt bỏ phần mô chết) Tách tế Cắt nhỏ Tách tế bào bào bằng(mảnh nhỏ bằng cơ học (nghiền, ép) enzym để nuôi) (ủ…)Nuôi mẫu NUÔI SƠ Trypsin Collagenas Trypsin ấmmô sơ cấp CẤP lạnh e Tái huyền Thu nhận Ly tâm Cấy chuyền phùtế bào mớiThu mảnh DÒNG TẾ mô thứ BÀO cấp Nuôi sơ cấp Nuôi môThu nhậncơ quan Cắt nhỏ Thành Cấy chuyền tế bào đơn Cấy chuyền Cell line 4 Nuôi sơ cấp5 Tách rời tế bào Tách bằng tác Tách bằng nhân khác enzym (EDTA)Trypsin Collagenase Papain Elastas Trypsin ấm Trypsin lạnh Tách bằng enzymeTrypsin: Chymotrypsin Collagenase Papain Elastase• pH6-9, tối ưu 8-9 • pH 7-9, thích • Hoạt động • pH • Phân huỷ• Nồng độ dùng: hợp 8-9 tốt: pH7-8, 4,5-8,5 elastin 0,01%-0,5% • Cắt liên kết < 450C • Bị kìm • Sử dụng• Ca2+ được xem như peptide tạo bởi • Cắt liên kết hãm kết hợp chất bảo vệ Trypsin –COOH acid peptide bởi với• Bị kìm hãm bởi FBS amin thơm với – dạng poly-L chất enzyme hoặc Di-Isopropyl- NH2 prolin; gồm oxy khác Fluorophosphat(DFP) • Tính đặc hiệu 4 loại đặc hoá• Không đặc hiệu cho kém hơn trypsin trưng tắt loại protein: Cắt liên • Bị ức chế bởi từng loại kết –COOH của DFB mô chuyên lysin/arginin và –NH2 • biệt ít  có thể gây hư hai làm hư hại cho tế bào tế bàoMỘT SỐ ENZYME PHÂN CẮT THƯỜNG DÙNG Tế bào bám dính Tế bào không bám dính Cụm tế bào nuôi sơ cấp 1. Huyền phù để tách rời cụmSau nuôi sơ cấp, tế Sau 1 thời gian, tế bào tế bào thành tếbào bám vào bề mặt tăng sinh, bao phủ đầyđĩa nuôi bề mặt đĩa nuôi bào đơnTế bào tách khỏi bề Thêm enzym (trypsin, 2. Pha loãng mậtmặt đĩa nuôi, chuyển collagenase…) độ tế bào,qua các đĩa nuôi khác 1 chuyển sang các đĩa nuôi mới 3 2 3. Tế bào đơn với Sau cấy chuyền, tế bào tiếp tục tăng sinh mật độ thưa trong đĩa nuôi mới 8 Puck và Marcus (1955) Lưu ý• Hạn chế tối đa thời gian tiếp xúc của enzyme phân tách với tế bào• Chọn nồng độ tối thiểu enzyme phân tách tuỳ loại tế bào• Sử dụng các chất ức chế hoạt tính enzym ngay sau khi phân tách (FBS, protease inhibitor) TẠO DÒNG TẾ BÀO ...