Báo cáo Nghiên cứu tối ưu môi trường lên men chủng Steptomyces Orientalis 4912 sinh Vancomyxin

Nghiên cứu tối ưu môi trường lên men chủng Steptomyces Orientalis 4912 sinh Vancomyxin
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Báo cáo " Nghiên cứu tối ưu môi trường lên men chủng Steptomyces Orientalis 4912 sinh Vancomyxin"TAP CHi KHOA HOC VA C O N G NGHE Tap 47, s6 6, 2009 Tr. 25-34 NGHIEN CUU TOI UU MOI TRUaNG LEN MEN CHUNG STREPTOMYCES ORIENTALIS 4912 SINH VANCOMYXIN NGUYEN PHLfQNG NHUE, NGUYEN VAN H i e u , LE GIA HY l.DATVANDE Vancomyxin la chat khang sinh thu6c nhom glycopeptit, do xa khuan Streptomycesorientalis sinh ra, trong cau triic chtia mpt disacarit d vi tri axit amin thtr 4, la vj tri cho phep ginphan ttl ngoai lai de hinh thanh nen cac vancomyxin ban ting hgp co boat tinh cao va chpn Ipc.Vancomyxin co hieu qua cao khi dung phoi hgp hoac thay the khang sinh nhom P-lactam dlchua cac benh nhiem triing do cac loai vi khuan da nhdn vdi cac khang sinh th6ng dung gay nennhu: benh nhiem trting mau, viem xuang, viem dudng h6 hip... [7, 8]. Hien nay, vancomyxin tirxa khuan Streptomyces orientalis da dugc san xuat d qui mo c6ng nghiep nhung hieu suit conthap lam cho gia thanh ctia chat khang sinh nay kha cao. De giai quylt vin de nay, ngoai viecnghien C U tao chting san co boat tfnh vancomyxin cao thi quan trpng khac la tii uu dieu kien Unuoi cay bao g6m thanh phan m6i trudng, pH, nhiet dp... Viec lua chpn thanh phan moi truongt6i uu C the nang cao san lugng sinh kh6i va lam tang cuong tich luy chit khang sinh ctia chting Osan len nhieu lan [2, 9]. Bai bao nay trinh bay mot so ket qua nghien cuu toi uu thanh phin m6i trudng len men sanxuat vancomyxin bdi chting xa khuan Streptomyces orientalis 4912, nhim thu dugc lupngkhang sinh cao nhat. 2. NGUYEN LIEU VA PHU^ONG PHAP2.1. Nguyen lieu Chting Streptomyces orientalis 4912 va chting vi sinh vat kilm dinh Bacillus subtilis ATCC6633 nhan tir Bp suu tap gi6ng ctia Phong Cong nghe len men, Vien C6ng nghe sinh hpc. Moi trudng len men tii MTI den MT12 [3] va cac moi trudng nhan giing nhu Cause 1 [1],A 4, A-4H, TH4-47, A 12, A 9 [10] va 48 [12] la cac m6i trudng dae trung cho nghien ctru xakhuan.2.2. Phuong phap Xac dinh hoat tfnh khang sinh bing phuong phap due 16 thach [I]. Diing thiet bi due 16, duetren moi trudng thach da cay vi sinh vat kiem djnh, nho vao 16 dung dich len men cin thtr. Devao til lanh 4 - 6 gid cho chat khang sinh khulch tan vao moi trudng, sau do dem nuoi d tti Im37C trong 24 gid de vi sinh vat kiem dinh phat triln. Hoat tinh khang sinh dupc xac dinh bingdudng kfnh vong vo khuan (mm), vong cang ldn thi hoat tfnh khang sinh cang cao. 25 Dinh lupng chit khang sinh bing phuong phap vi sinh vat hpc theo Dmitreva [1]. N6ng dpdung dich chit khang sinh chuin va chit khang sinh nghien ctru dugc dinh lugng theo phuongphap due 16, vong vo khuIn cang gin 17 mm cang chfnh xac, chat khang sinh chuan dupc phaloang theo he sl 2. Tinh hieu s l vong vo khuan giua hai n i n g dp lien ke va tra bang ctiaDmitreva tim hieu s l chinh, sau do nhan vdi hieu sl pha loang va nong dp khang sinh chuan sedugc ning dp chat khang sinh nghien cuu (mcg/ml). Tii uu hoa thanh phin moi trudng theo phuong phap qui hoaeh thuc nghiem Box-Wilson[1]. Phuong phap nay cho phep nghien cuu ding thdi tac dpng ciia cac nguon dinh duong lenqua trinh sinh ting hpp chit khang sinh. ngoai ra con cho phep danh gia mot each dinh lupng vemtic dp ctia nhting anh hudng nay. D I chuin bj giing cho len men sinh ting hpp khang sinh, nuoi cay chting S. orientalis4912 trong binh tam giac tren may lie vdi toe dp 220 vong/phut, d nhiet dp 28°C, trong thdi gian3 6 - 4 8 gid, sinh khli dat 3 - 4 mg/inl. Qua trinh len men, vdi m6i trudng da toi uu, dupc thuchien tren thilt bj Bioflo 110 dung tich 5 lit, pH ban diu 7,0; ti le giing b6 sung 4%, tu6i gi6ng36 - 48 gid, nhiet dp nuoi 28°C, dp th6ng khf 15% (v/V) [6]. Xac dinh dudng khu bing phuang phap DNS A [4]. Dua tren phan ung tao mau gitra lupngdudng khti con lai trong dich len men vdi thulc thti dinitrosalicylic acid (DNSA). Tii do thj ]apdugc dii vdi glucoza tinh khiet se tinh dugc ham lupng dudng khti qui ve glucoza co trong mau. Xac djnh sinh khli bing each sly d nhiet dp 105°C din khi khoi lupng khong doi [1]. 3. KET QUA VA THAO LUAN3.1. Lua chon moi truong nhan giong va moi trirdng len men De lua chpn moi tindng nhan gi6ng thich hgp, chting S. orientalis 4912 dupc nu6i caytren mpt s l moi trudng nhu Gause 1, A 4, A- 4H, TH4- 47, A 12, A 9 va 48 trong 120 gid, d28°C [5]. Ket qua cho thiy, chting xa khuan nay phat trien tot, ngoai ra con tao thanh chat khangsinh lie chl vi sinh vat kiem djnh d mtre dp khac nhau (bang 1 va hinh 1). Tren m6i trudng 48,chting 4912 sinh trud ...