Bước đầu xây dựng bộ KIT LAMP phát hiện Promoter 35S ở ngô chuyển gen

Nước ta đã cho phép trồng ngô biến đổi gen, tuy nhiên vẫn còn nhiều tranh cãi về mức độ an toàn của loại sản phẩm này. Hiện nay, việc phát hiện ngô biến đổi gen chủ yếu sử dụng phản ứng PCR để phát hiện sự hiện diện của promoter 35S. Bài viết bước đầu đã phát triển được bộ bít KIT có khả năng thực hiện phát hiện bắp biến đổi gen mà không cần sử dụng các thiết bị phức tạp của phòng thí nghiệm.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Bước đầu xây dựng bộ KIT LAMP phát hiện Promoter 35S ở ngô chuyển genGiải thưởng Sinh viên nghiên cứu khoa học Euréka lần 20 năm 2018 Kỷ yếu khoa học BƯỚC ĐẦU XÂY DỰNG BỘ KIT LAMP PHÁT HIỆN PROMOTER 35S Ở NGÔ CHUYỂN GEN Lê Hữu Triết*, Kiều Xuân Hương, Huỳnh Thị Thu Hà Trường Đại học Công nghiệp Thực phẩm TP. Hồ Chí Minh *Tác giả liên lạc: lehuutriet.cntp@gmail.com TÓM TẮTNước ta đã cho phép trồng ngô biến đổi gen, tuy nhiên vẫn còn nhiều tranh cãivề mức độ an toàn của loại sản phẩm này. Hiện nay, việc phát hiện ngô biến đổigen chủ yếu sử dụng phản ứng PCR để phát hiện sự hiện diện của promoter 35S.Tuy nhiên, kỹ thuật này đòi hỏi thiết bị luân nhiệt đắt tiền, tốn thời gian, chỉ phântích được trong phòng thí nghiệm nên hiệu quả sử dụng còn nhiều hạn chế. Gầnđây, kỹ thuật LAMP (Loop Mediated Isothermal Amplification) đã được pháttriển để phát hiện đoạn DNA đặc hiệu một cách chính xác, nhanh chóng và sửdụng thiết bị đơn giản và không phụ thuộc nhiều vào thiết bị phòng thí nghiệm.Ngoài ra, sản phẩm của phản ứng LAMP có thể quan sát trực tiếp, điều này giúpviệc phát hiện bắp biển đổi gen trở nên đơn giản hơn. Do đó, chúng tôi thực hiệnđề tài “Bước đầu sản xuất thử nghiệm bộ KIT phát hiện promoter 35S trên bắpchuyển gen bằng phương pháp LAMP”. Trong nghiên cứu này, chúng tôi bướcđầu đã phát triển được bộ bít KIT có khả năng thực hiện phát hiện bắp biến đổigen mà không cần sử dụng các thiết bị phức tạp của phòng thí nghiệm.Từ khóa: Ngô, biến đổi gen, LAMP, PCR, Promoter 35S. BUILDING KIT LAMP DETECTION OF PROMOTER 35S IN GENERAL TRANSMISSION Le Huu Triet*, Kieu Xuan Huong, Huynh Thi Thu Ha Ho Chi Minh City University of Food Industry *Corresponding Author: lehuutriet.cntp@gmail.com ABSTRACTOur country has allowed growing genetically modified corn, but there are sevealdebate on the safety of this product. At present, the detection of geneticallymodified corn is mainly using a PCR reaction to detect the existence of thepromoter 35S. However, this technique requires expensive and time-consumingthermal cycler, which is only analyzed in the laboratory, so the efficiency islimited. Recently, the LAMP (Loop Mediated Isothermal Amplification) techniquehas been developed to identify a specific DNA fragments accurately and rapidlyby using simple equipment and not depend on laboratory equipment. In addition,the product of LAMP can be observed directly, which is easier to detecttransgenic corn. Therefore, we conducted the study Initial produced test kit KITdetects promoter 35S on corn by LAMP method. In this study, we have initiallydeveloped a KIT which is capableof detecting genetically modified corn withoutusing complex laboratory equipment. This result could create a great premise forthe development of genetically modified corn KIT and could be applied in themarket widely.Keywords: Corn, genetically modified, LAMP, PCR, Promoter 35S. 82Giải thưởng Sinh viên nghiên cứu khoa học Euréka lần 20 năm 2018 Kỷ yếu khoa họcTỔNG QUAN ngành công nghệ sinh học đặc biệt làNgô (Zea mays L.,) được đánh giá là các phương pháp dựa trên cơ sở DNAcây trồng có vai trò hết sức quan trọng như Kỹ thuật PCR, Realtime-PCR,trong cơ cấu cây trồng ở nước ta với Quantitative RT-PCR, Multiplex PCR,diện tích gieo trồng năm 2015 là 1179 Southern-Blot, LAMP,… Trong đó kỹnghìn ha, sản lượng đạt trên 4,6 triệu thuật LAMP (Loop mediatedtấn. Tuy nhiên sản xuất ngô trong nước isothermal amplification) là một trongvẫn chưa đáp ứng đủ nhu cầu, hàng những kỹ thuật nhân bản gen đangnăm nước ta phải nhập khẩu lượng lớn được sử dụng nhiều nhất để phân biệtngô từ nước ngoài. Đối với ngô chuyển thực phẩm GMO (Notomi và cs.,gen của Việt Nam, hiện nay chưa có số 2000).liệu cụ thể nào về tình hình nhập khẩu LAMP là kỹ thuật khuyết đại đẳngmặt hàng này, dù vậy, từ năm 2010 nhiệt đoạn gen mục tiêu trong thời giantheo giải trình của Bộ Nông nghiệp và ngắn, có độ nhạy, độ chính xác cao vàPhát triển nông thôn đã chính thức cho giá thành rẻ được ứng dụng thành côngphép trồng ngô biến biến đổi gen ở rộng rãi để phát hiện các loại sinh vậtViệt Nam và đây là 1 trong 59 nước gây bệnh ở nhiều nơi trên thế giới và ởchấp nhận sử dụng thực phẩm biến đổi Việt Nam (Nkouawa và cs., 2009).gen (Cao Đức Phát, 2011). Trong công nghệ gen thực vật, có thểBiến đổi gen (GMO - Genetic nói một trong những thành công sớmmodification) là kỹ thuật được dùng nhất và có giá trị nhất đối với lĩnh vựcphổ biến trong công nghệ DNA tái tổ protein thực vật chính là sử dụng cáchợp được thực hiện bằng cách đưa một promoter cơ định có nguồn gốc từ virusgen ngoại lai vào trong genome của và vi khuẩn Agrobacterium làm côngsinh vật đích hoặc làm thay đổi gen nội cụ biểu hiện gen ngoại lai hiệu quảtại trong sinh vật đó. Công nghệ biến trong cây trồng biến đổi gen. Rất nhiềuđổi gen đã đạt được nhiều thành tựu promoter như vậy đã được sử dụngtrong một trong số đó là cây trồng chứa rộng rãi trong công nghệ gen thực vậtgen Bt (ngô Bt, bông Bt, đậu tương và vẫn tiến tục là promoter được lựaBt,…) có thể kháng lại sâu hại lá vì chọn trong các nghiên cứu biểu hiệnchúng có chứa protein của một loại vi nhanh, đơn giản và rủi ro thấp (Lê Thịkhuẩn Bacillus thuringiensis (Chen và Thu Hiền và cs., 2007). Đây cũng là cơcs., 2008). Tuy ...