ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP GLUCOSE OXIDASE NGOẠI BÀO CỦA CÁC CHỦNG NẤM MỐC PHÂN LẬP TỪ MÔI TRƯỜNG TỰ NHIÊN

Hoạt tính của enzyme glucose oxidase sinh tổng hợp từ 22 chủng nấm mốc phân lập từ các nguồn tự nhiên khác nhau đã được đánh giá. Trong đó, chọn ra chủng nấm mốc M12 phân lập từ chanh có khả năng sinh enzyme GOD ngoại bào hoạt tính cao nhất.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP GLUCOSE OXIDASE NGOẠI BÀO CỦA CÁC CHỦNG NẤM MỐC PHÂN LẬP TỪ MÔI TRƯỜNG TỰ NHIÊN Tuyển tập Báo cáo Hội nghị Sinh viên Nghiên cứu Khoa học lần thứ 7 Đại học Đà Nẵng năm 2010 ĐÁNH GIÁ KHẢ NĂNG SINH TỔNG HỢP GLUCOSE OXIDASE NGOẠI BÀO CỦA CÁC CHỦNG NẤM MỐC PHÂN LẬP TỪ MÔI TRƯỜNG TỰ NHIÊNEVALUATING THE ABILITY OF MOLDS ISOLATED FROM NATURAL SOURCES TO PRODUCE EXTRACELLULAR GLUCOSE OXIDASE SVTH: Nguyễn Phan Ái Nhi, Nguyễn Thị Hồng Thu Lớp 05H2B, Khoa Hoá, Trường Đại học Bách Khoa GVHD: TS. Đặng Minh Nhật Khoa Hóa, Trường Đại học Bách Khoa TÓM TẮT Hoạt tính của enzyme glucose oxidase sinh tổng hợp từ 22 chủng nấm mốc phân lập từcác nguồn tự nhiên khác nhau đã được đánh giá. Tro ng đó, chọn ra chủng nấm mốc M12 phân lậptừ chanh có khả năng sinh enzyme GOD ngoại bào hoạt tính cao nhất. Nghiên cứu này sử dụngchủng nấm mốc đó khảo sát ảnh hưởng của nồng độ các thành phần môi trường nuôi cấy đếnhoạt tính enzym. Các thí nghiệm được thực hiện với sự thay đổi nồng độ saccharose; peptone. Kếtquả xác định hàm lượng saccharose biến thiên nhiều trong khoảng 40-100g/l, peptone là 10-20g/l. ABSTRACT Glucose oxidase activity of 22 molds isolated from various natural sources wasdetermined. W e chose one mold (M21 from lemon) which produces the highest extracellularglucose oxidase activity. The research uses this mold to investigate concentrations of culturemedia components to enzyme activity. Experiments were done with different concentratio ns ofsucrose; peptone. The result reveals concentration of sucrose fluctuates much in 40 -100g/l;peptone 10-20g/l; respectively.1. Mở đầu Glucose oxidase (GOD, β-D-glucose: oxygen, 1-oxidoreductase, EC 1.1.3.4) làenzyme xúc tác quá trình oxi hóa β-D-glucose thành acid gluconic với sự tham gia củaphân tử oxi như chất nhận điện tử, đồng thời giải phóng ra hydro peroxide (H2O2) [1]. GOD được sử dụng rộng rãi trong công nghiệp sản xuất bột trứng sấy để loại bỏglucose và trong bộ cảm biến glucose dùng cho bệnh nhân tiểu đường để kiểm tra lượngđường trong máu [2]. Nhiều ứng dụng của nó đã được phát triển như: loại bỏ oxi trong nướcép trái cây, thức uống đóng hộp, trong xốt mayonnaise để ngăn sự trở mùi; cải thiện màu sắc,mùi vị, thời hạn sử dụng của nhiều nguyên liệu thực phẩm; giảm độ cồn của rượu; ứng dụngtrong công nghiệp dệt như để tẩy trắng [1]; sử dụng như một thành phần của kem đánh răng[2], trong quá trình sản xuất acid gluconic, và như chất bảo quản thực phẩm [3]. Trong nghiên cứu này chúng tôi phân lập nấm mốc từ các nguồn tự nhiên khácnhau và đánh giá khả năng sinh tổng hợp enzyme GOD ngoại bào từ các chủng đó, đồngthời cũng khảo sát ảnh hường của thành phần môi trường đến sự sinh tổng hợp này.2. Nguyên liệu và phương pháp nghiên cứu2.1. Nguyên liệu Các chủng vi sinh vật (VSV) từ phòng thí nghiệm và VSV phân lập từ những nguồn 366 Tuyển tập Báo cáo Hội nghị Sinh viên Nghiên cứu Khoa học lần thứ 7 Đại học Đà Nẵng năm 2010tự nhiên như: bánh tổ, bắp, bí đỏ, cam, chanh, chuối, cơm, đậu tương, mận, nho, lạc, xoài.2.2. Phương pháp nghiên cứu2.2.1. Phân lập vi sinh vật bằng phương pháp cấy trên môi trường đặc Đem vật phẩm (mẫu vật đã để lên mốc) giã nhỏ, hòa vào trong 200ml nước cất vôtrùng, hút 0.1 ml dịch cho vào đĩa petri có môi trường Czapek. Dùng que trang trải đều khắpmặt thạch. Ủ ở nhiệt độ 300C trong 3-7 ngày. Chọn khuẩn lạc đứng tách biệt dùng que cấylấy một ít VSV cấy lên các đĩa petri khác, làm tương tự cho đến khi thu được khuẩn lạcthuần chủng, dùng que cấy lấy một ít bào tử khuẩn lạc đó cấy vào ống thạch nghiêng.2.2.2. Lên men sinh tổng hợp enzyme GOD Tiến hành lên men trong môi trường lỏng với thành phần (g/l): (NH4)2SO4 0.4;KH2PO4 0.4; MgSO4.7H2O 0,1; saccharose 100; peptone 15; CaCO3 40. Đun sôi môi trườngcho tan hết, điều chỉnh pH 6.5 – 6.9. Lấy 70 ml môi trường vào mỗi bình nón 250 ml, hấptiệt trùng ở 1210C trong 20 phút, làm nguội xuống nhiệt độ môi trường và cấy với 3 vòngque cấy VSV. Bình nón được nuôi 70h trên máy lắc với tốc độ 175 vòng/phút. Sau lên men,canh trường VSV được ly tâm 15 phút (5200 vòng/phút) để tách riêng phần lỏng và sinhkhối VSV, phần lỏng dùng để xác định hoạt tính enzyme tiết ra ngoài môi trường [1].2.2.3. Xác định hoạt tính enzyme GOD bằng phương pháp chuẩn độ [4] Đây là được sử dụng phương pháp phổ biến để xác định hoạt tính của GOD. Trongphương pháp này, 1 ml dung dịch enzyme được thêm vào 25 ml đệm CH3COONa 60 mMpH 5.6 chứa 2% β-D-glucose. Hỗn hợp được lắc 1h trong không khí ở 300C trên máy lắc,tốc độ 200 vòng/phút. Phản ứng dừng lại bởi thêm vào 20ml dung dịch NaOH 0.1N. Hỗnhợp đó đem chuẩn ...