Đồ án tốt nghiệp: Hoàn thiện quy trình phát hiện nhanh Bacillus cereus và Escherichia coli, trong sữa tiệt trùng với sự hỗ trợ của kỹ thuật Real Time PCR

Lựa chon thời gian ly tâm thu sinh khối tế bào vi sinh vật; lựa chọn một môi trường tăng sinh cho vi sinh vật; lựa chọn thời gian tăng sinh thích hợp cho vi sinh vật;... là những nội dung chính mà "Đồ án tốt nghiệp: Hoàn thiện quy trình phát hiện nhanh Bacillus cereus và Escherichia coli, trong sữa tiệt trùng với sự hỗ trợ của kỹ thuật Real Time PCR" hướng đến trình bày.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Đồ án tốt nghiệp: Hoàn thiện quy trình phát hiện nhanh Bacillus cereus và Escherichia coli, trong sữa tiệt trùng với sự hỗ trợ của kỹ thuật Real Time PCR Đồ án tốt nghiệp                                                                        Trương Thị Thu Hiền   LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành được luận văn tốt nghiệp này, trước hết em xin bầy tỏ  lòng biết ơn chân thành và sâu sắc đến PGS.TS Nguyễn Thị Xuân Sâm, TS.  Lê Quang Hòa người đã tận tình giảng dạy và hướng dẫn em trong suốt quá  trình học tập và nghiên cứu để hoàn thành bản luận văn này. Em cũng xin bày  tỏ  lòng biết  ơn đến đã toàn bộ  cán bộ  Viện CNSH và CNTP trường ĐHBK  HN đã giúp đỡ và hướng dẫn em tận tình trong quá trình nghiên cứu tại phòng  thí nghiệm :”công nghệ  Protein enzyme và  kỹ  thuật  gen“. Qua đây, em cũng xin chân thành cảm ơn đến gia đình, bạn bè và những  người thân đã đọng viên, giúp đỡ  và tạo điều kiện cho em hoàn thành bản  luận văn này.                                                                                                                                                       Hà Nội, ngày 28 tháng 5 năm 2007                                                                                     Sinh viên                                                                            Trương Thị Thu Hiền Trang  1  Đồ án tốt nghiệp                                                                        Trương Thị Thu Hiền   MỘT SỐ TỪ VIẾT TẮT    Chữ viết tắt:                                                      Nghĩa tương ứng:        VSV                                                             Vi sinh vật UHT(Ultra heat treatment)                           Xử lý tiệt trùng sữa PCR(Polymerase Chain Reaction)               Phản ứng chuỗi trùng hợp dNTP                                                            Deoxynucleotide­triphosphate   DNA                                                             Deoxyribonucleic acid EDTA                                                           Ethylendiamin etetraacetic acid  TE                                                                 TRIS­EDTA CFU( colony forming units)                         Đơn vị hình thành khuẩn lạc Trang  2  Đồ án tốt nghiệp                                                                        Trương Thị Thu Hiền                                            DANH MỤC CÁC BẢNG VÀ HÌNH VẼ Bảng 1. Tiêu chuẩn vi sinh vật cho một số sản phẩm sữa            Bảng 2. Kết quả ly tâm với E.Coli           Bảng 3. Kết quả ly tâm với Bacillus           Bảng 4. Kết quả lựa chọn môi trường tăng sinh           Bảng 5. Kết quả lựa chọn thời gian tăng sinh với E.coli. Bảng 6. Kết quả lựa chọn thời gian tăng sinh với Bacillus. Hình 1 Hình thái Escherichia coli Hình 2. Hình thái Bacillus cereus. Hình 3. Sơ đồ một số phương pháp của kỹ thuật Real Time PCR Hình 4. Đồ thị chuẩn hóa của phản ứng Real­time PCR  Hình 5. Quy trình phát hiện Bacillus và E.coli trên sữa tiệt trùng không  đường ở mật độ nhiễm ban đầu 1CFU/1ml  Hình 6. Quy trình phát hiện Bacillus trên sữa tiệt trùng không đường ở  mật độ nhiễm ban đầu 1CFU/25ml Hình 7. Đường quan hệ tuyến tính giữa giá trị mật độ quang và mật độ  tế bào của Bacillus           Hình 8. Đường quan hệ tuyến tính giữa giá trị mật độ quang và mật độ  tế           bào của E.coli Trang  3  Đồ án tốt nghiệp                                                                        Trương Thị Thu Hiền             Hình 9. Kết quả lựa chọn thời gian ly tâm thích hợp thu sinh khối tế  bào            vi sinh vật.                                       MỞ ĐẦU Sản lượng sữa và nhu cầu tiêu thụ  sữa trên thị  trường Việt Nam đang   tăng một cách đáng kể, trong 10 năm qua mức độ tiêu thụ là 15 lần. Ước tính   đến năm 2010, nhu cầu về các sản phẩm sữa  ở nước ta sẽ  gia tăng khoảng  10­15% mỗi năm để đạt mức khoảng 10kg/đầu người /năm. Vốn là một thực   phẩm bổ  dưỡng, sữa cũng là môi trường thích hợp cho các vi sinh vật gây  bệnh. Do vậy, công tác kiểm tra, và đảm bảo vệ  sinh cho sản phẩm sữa là  mối quan tâm hàng đầu của các nhà sản xuất sữa và người tiêu dùng. Tuy  nhiên với các phương pháp phân tích hiện nay, một số hiện tượng nhiễm tạp   vi sinh vật gây bệnh thường được phát hiện muộn, kết quả là các biện pháp   xử lý kỹ thuật ít có hiệu quả và ảnh hưởng nhiều đến quá trình sản xuất Việc xác định các vi sinh vật có khả  năng nhiễm tạp trong các sản   phẩm sữa bằng các phương pháp truyền thống thường ít chính xác, độ  nhạy   không cao và thời gian dài. Các kết quả phân tích hầu như không có tính ngăn  ngừa chỉ  là căn cứ  để  giải quyết hậu quả  của sự  nhiễm tạp. Sự  chậm trễ  của phương pháp này sẽ  làm tổn thất lớn cho các nhà máy khi có sự  cố  nhiễm VSV Đề  tài  ”Hoàn thiện quy trình phát hiện nhanh  Bacillus cereus  và  Escherichia coli,  trong sữa tiệt trùng với sự  hỗ  trợ  của   kỹ  thuật Real   Trang  4  Đồ án tốt nghiệp                                                                        Trương Thị Thu Hiền   Time PCR” được lựa chọn cũng nhằm góp phần giảm bớt những hạn chế  trên của việc phát hiện những vi sinh vật nhiễm tạp. Để  đạt mục tiêu trên, nội dung nghiên cứu của đề  tài gồm các phần  sau: Lựa chon thời gian ly tâm thu sinh khối tế bào vi sinh vật Lựa chọn một môi trường tăng sinh cho vi sinh vật. Lựa chọn thời gian tăng sinh thích hợp cho vi sinh vật Ứng dụng kỹ  thuậ ...