GIÁO TRÌNH CÔNG NGHỆ GEN TRONG NÔNG NGHIỆP part 8

Trong quá trình này vật chủ biểu hiện bệnh đậu mùa và kháng nguyên tái tổ hợp và hy vọng tăng phản ứng miễn dịch bảo vệ cơ thể với chúng. Ðây là phương pháp sản xuất vaccine đa trị (polyvalent vaccine). Trong ví dụ mang tính chất lý thuyết nêu trên, sự tiêm chủng một vaccine tái tổ hợp chứa các epitope tạo dòng này có thể làm cho vật chủ miễn dịch với bệnh đậu mùa, viêm gan B, cúm và Plasmodium...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
GIÁO TRÌNH CÔNG NGHỆ GEN TRONG NÔNG NGHIỆP part 8 genome tái tổ hợp. Trong quá trình này vật chủ biểu hiện bệnh đậu mùa và kháng nguyên tái tổ hợp và hy vọng tăng phản ứng miễn dịch bảo vệ cơ thể với chúng. Ðây là phương pháp sản xuất vaccine đa trị (polyvalent v accine). Trong ví dụ mang tính chất lý thuyết nêu trên, sự tiêm chủng một vaccine tái tổ hợp chứa các epitope tạo dòng này có thể làm cho vật chủ miễn dịch với bệnh đậu mùa, viêm gan B, cúm và Plasmodium. 3.4. Sản xuất kháng thể đơn dòng Phản ứng của hệ thống miễn dịch với bất cứ kháng thể nào, ngay cả kháng thể đơn giản nhất, là đa dòng (polyclonal antibody). Cho dù chúng ta tách chiết một tế bào tiết kháng thể riêng lẻ và đưa vào trong môi trường nuôi cấy, nó sẽ chết sau một vài thế hệ do khả năng sinh trưởng giới hạn của tất cả các tế bào soma bình thường. Vấn đề này đã được giải quyết khi Kohler và Milstein phát minh ra kỹ thuật sản xuất kháng thể đơn dòng vào năm 1975 và công trình này đã được trao giải thưởng Nobel vào năm 1984. Tế bào B có khả năng tổng hợp kháng thể nhưng không có khả năng phân chia. Ngược lại tế bào u tủy có khả năng tăng sinh không kiểm soát nhưng không tạo thành kháng thể. Kohler và Milstein đã tìm ra cách kết hợp khả năng sinh trưởng không giới hạn của tế bào u tủy với tính đặc t rưng của kháng thể xác định trước của các tế bào lách miễn dịch bình thường. Họ đã tiến hành dung hợp các tế bào u tủy với các tế bào B đã hoạt hóa để tạo ra các tế bào lai. Trộn các tế bào lách của chuột đã gây miễn dịch bằng kháng nguyên mong muốn với các tế bào u tủy. Sử dụng một tác nhân để các màng sinh chất kề sát dễ dàng dung hợp. Tuy nhiên tỷ lệ thành công là quá thấp. Vì vậy, người ta sử dụng các tế bào u tủy đã mất khả năng tổng hợp hypoxanthine-guanine-phosphoribosyltransferase (HGPRT) và mất khả năng tổng hợp kháng thể. Enzyme HGPRT giúp tế bào tổng hợp purine bằng cách sử dụng nguồn hypoxanthine ngoại bào. Bình thường sự vắng mặt HGPRT là không có vấn đề gì đối với tế bào u tủy bởi vì chúng có một con đường thứ hai có thể sử dụng để tổng hợp purine. Tuy nhiên, khi tế bào có mặt aminopterin, chúng không thể sử dụng con đường thứ hai này và lúc này phụ thuộc hoàn toàn vào HGPRT để tồn tại. - Chuyển hỗn hợp các tế bào dung hợp vào môi trường nuôi cấy nhân tạo HAT (chứa hypoxanthine, aminopterin và thymidine). Các tế bào u tủy Công nghệ gen trong nông nghiệp 96 không thể sinh trưởng được vì thiếu HGPRT. Các tế bào lách bình thường không thể sinh trưởng vô hạn bởi vì thời gian sống giới hạn của chúng. Các tế bào lai có thể sinh trưởng vô hạn do tế bào lách cung cấp HGPRT và tế bào u tủy là bất tử. - Kiểm tra dịch nổi mỗi môi trường nuôi cấy để tìm môi trường đã tạo ra kháng thể mong muốn. - Bởi vì môi trường nuôi cấy gốc có thể được bắt đầu với hai hoặc nhiều tế bào lai nên phải tách các tế bào riêng lẻ từ mỗi môi trường có kháng thể dương tính và nuôi cấy lại chúng. - Lại tiến hành kiểm tra mỗi dịch nổi đối với kháng thể mong muốn. Mỗi môi trường nuôi cấy lại dương tính đã được bắt đầu từ một tế bào riêng lẻ tương ứng với một dòng và kháng thể của chúng là kháng thể đơn dòng. Ðiều này có nghĩa là mỗi môi trường nuôi cấy tạo ra một loại kháng thể riêng biệt chống lại trực tiếp một yếu tố xác định riêng lẻ với một kháng nguyên chọn trước. - Tăng lượng nuôi cấy đối với các dòng đã thành công. Kháng nguyên Tế bào u tủy Tế bào lách Dung hợp 1. Nuôi cấy trong môi trường HAT 3. Tạo dòng các tế 2. Kiểm tra kháng bào dương tính thể ở bề mặt 4. Kiểm tra kháng thể ở bề mặt 5. Phát triển các dòng dương tính Nhân lên hoặc In vitro In vivo Thu nhận kháng thể đơn dòng Công nghệ gen trong nông nghiệp 97 Hình 3.10. Mô hình sản xuất kháng thể đơn dòng. Nuôi cấy tế bào lai có thể được được tiến hành bằng hai con đường: + In vitro: nuôi cấy trong các bình. Sản lượng tăng từ 10-60 g/ml. + In vivo: nuôi cấy trong cơ thể chuột. Nồng độ kháng thể trong huyết thanh và trong các dịch khác của cơ thể có thể đạt tới 1-10 mg/ml. Kháng thể đơn dòng được sử dụng một cách rộng rãi như là thuốc thử trong chữa bệnh và nghiên cứu. Hiện nay, kháng thể ...