Hệ thống protein dung hợp với GST (HỌ VECTOR pGEX) (tt)

Protein dung hợp được phát hiện bằng kháng thể đặc hiệu kháng nguyên đã được đánh dấu. Sau khi protein dung hợp được phân đoạn bằng điện di trên gel polyacrylamid, các vạch protein được chuyển thẩm lên màng lai. Sau đó màng lai đựơc ủ với kháng thể thứ nhất (kháng thể kháng GST-anti GST IgG), bắt đặc hiệu với protein dung hợp. Kháng thể kháng GST là một kháng thể đa dòng được tinh sạch từ huyết thanh của dê mà được gây miễn dịch với GST của Schistosoma japonicum...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Hệ thống protein dung hợp với GST (HỌ VECTOR pGEX) (tt) HỆ THỐNG PROTEIN DUNG HỢP VỚI GST (HỌ VECTOR pGEX) (tt)III. Phương pháp phát hiện protein dung hợp với GST: III.1. Phát hiện protein dung hợp với GST nhờ hoạt tính enzyme: Sản phẩm protein dung hợp với GST từ vector pGEX được phát hiện dựa vào hoạt tính của GST trên cơ chất không màu CDNB (1-chloro-2,4-dinitrobenzen) và tạo rasản phẩm có màu, có phổ hấp thucực đại ở bước sóng 340 nm (1). Hình 2: Phương pháp phát hiện protein dung hợp với GST bằng hoạt tính enzyme (1).III.2. Phương pháp lai miễn dịch:Protein dung hợp được phát hiệnbằng kháng thể đặc hiệu khángnguyên đã được đánh dấu. Sau khiprotein dung hợp được phân đoạnbằng điện di trên gelpolyacrylamid, các vạch proteinđược chuyển thẩm lên màng lai.Sau đó màng lai đựơc ủ với khángthể thứ nhất (kháng thể khángGST-anti GST IgG), bắt đặc hiệuvới protein dung hợp. Kháng thểkháng GST là một kháng thể đadòng được tinh sạch từ huyết thanhcủa dê mà được gây miễn dịch vớiGST của Schistosoma japonicum.Sau đó màng lai được ủ với khángthể thứ hai đã được đánh dấu(kháng thể thứ hai gắn đặc hiệu vớiđoạn Fc của kháng thể thứ nhất).Tùy thuộc vào kháng thể thứ haiđược đánh dấu mà cách phát hiệncó khác nhau, dựa vào sự biến đổimàu hoặc tín hiệu phát huỳnhquang.Hình 3: Phương pháp lai miễn dịch (1).