Khóa luận tốt nghiệp đại học ngành Kỹ thuật xét nghiệm y học: Ứng dụng kỹ thuật Realtime - PCR để phát hiện đột biến JAK2-V617F trong hội chứng tăng sinh tủy

Mục tiêu của đề tài "Ứng dụng kỹ thuật Realtime - PCR để phát hiện đột biến JAK2-V617F trong hội chứng tăng sinh tủy" bao gồm: Hoàn thiện được quy trình xét nghiệm đột biến JAK2-V617F bằng kỹ thuật Realtime-PCR; ứng dụng được quy trình xét nghiệm gen JAK2-V617F xác định đột biến gen ở bệnh nhân tăng sinh tủy mạn tính bằng kỹ thuật Realtime-PCR.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Khóa luận tốt nghiệp đại học ngành Kỹ thuật xét nghiệm y học: Ứng dụng kỹ thuật Realtime - PCR để phát hiện đột biến JAK2-V617F trong hội chứng tăng sinh tủy ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC BÙI QUANG CÔNG ỨNG DỤNG KĨ THUẬT REALTIME PCR ĐỂPHÁT HIỆN ĐỘT BIẾN JAK2-V617F TRONG HỘI CHỨNG TĂNG SINH TỦY KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH KĨ THUẬT XÉT NGHIỆM Y HỌC Hà Nội – 2023 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC Y DƯỢC BÙI QUANG CÔNG ỨNG DỤNG KĨ THUẬT REALTIME PCR ĐỂPHÁT HIỆN ĐỘT BIẾN JAK2-V617F TRONG HỘI CHỨNG TĂNG SINH TỦY KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP ĐẠI HỌC NGÀNH KĨ THUẬT XÉT NGHIỆM Y HỌC Khóa: QH.2019.Y Người hướng dẫn: 1. TS. Dương Quốc Chính 2. ThS. Trần Tuấn Anh Hà Nội – 2023 LỜI CẢM ƠN Trước tiên, tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành và sâu sắc tới TS. DươngQuốc Chính - Giảng viên Trường Đại học Y Dược - Đại học Quốc gia HàNội, ThS. Trần Tuấn Anh - Giảng viên thỉnh giảng Trường Đại học Y Dược- Đại học Quốc gia Hà Nội, những người thầy đã luôn hướng dẫn chỉ bảo tậntình, cho tôi nhiều ý kiến nhận xét quý báu cũng như truyền đạt cho tôi tinhthần học hỏi, làm việc nghiêm túc trong quá trình tôi thực hiện khóa luận này. Tôi xin chân thành cảm ơn TS. Phạm Thị Hồng Nhung - Giảng viênTrường Đại học Y Dược - Đại học Quốc gia Hà Nội, người thầy luôn tận tâmgiúp đỡ tôi trong quá trình học tập nghiên cứu, tạo điều kiện thuận lợi cũngnhư luôn sẵn sàng giải đáp mọi thắc mắc để tôi có thể hoàn thành khóa luậnnày. Để thực hiện tốt khóa luận này, tôi trân trọng cảm ơn sự tài trợ củaViện Huyết học Truyền máu - Trung ương cho đề tài. Trong quá trình học tập,làm việc và thực hiện khóa luận, tôi đã nhận được sự giúp đỡ của các thầy cô,anh chị và các bạn sinh viên làm việc tại thực tập tại Khoa Di truyền - Sinhhọc phân tử. Tôi xin chân thành cảm ơn. Tôi xin gửi lời cảm ơn tới Ban chủ nhiệm khoa, cùng toàn thể các thầycô giáo trong Trường Đại học Y dược - Đại học Quốc gia Hà Nội đã cho tôinhững kiến thức quý báu trong quá trình học tập tại trường. Cuối cùng, tôi xin gửi lời cảm ơn sâu sắc tới gia đình và bạn bè đã luônbên cạnh, động viên, khích lệ tôi trong lúc khó khăn cũng như trong quá trìnhthực hiện khóa luận này. Hà Nội, ngày tháng năm DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮT : Allele specific PCR (Phản ứng khuếch đại chuỗi allen đặcAS-PCR hiệu)BCR : Breakpoint cluster regionCALR : CalreticulinADN : Acid deoxyribonucleicTTCNP : Bệnh tăng tiểu cầu nguyên phátĐHC : Bệnh đa hồng cầuHCXT : Hội chứng xơ tủyJAK2 : Janus kinase 2 (Gen JAK2)JAK2-V617F : Janus Kinase Valin 617 PhenylalaminMastermix : Hỗn hợp các thành phần (Enyme, MgCl2, dNTPs) tạo hệcho phản ứng đệmMPNs : Myeloproliferative neoplasm (Hội chứng tăng sinh tủy)MPL : Myeloproliferative leukemia virus oncogen (Gen MPL)NC : Normal Control (Mẫu chứng âm)PCR : Polymerase chain reaction (Phản ứng khuếch đại chuỗi)RT-PCR : Realtime - PCRPOS : Positive (Mẫu chứng dương)WHO : World Health Organization (Tổ chức Y tế thế giới) MỤC LỤCĐẶT VẤN ĐỀ ............................................................................................... 1CHƯƠNG 1 - TỔNG QUAN TÀI LIỆU .................................................... 3 1.1 Tổng quan về hội chứng tăng sinh tủy ................................................... 3 1.1.1 Khái niệm và đặc điểm dịch tễ học của hội chứng tăng sinh tủy ...... 3 1.1.2. Tổng quan và cơ chế bệnh về gen liên quan đến hội chứng tăng sinh tủy ................................................................................................................. 5 1.2. Tổng quan về gen JAK2-V617F............................................................ 7 1.2.1. Gen JAK2....................................................................................... 7 1.2.2. Đột biến gen JAK2 ......................................................................... 8 1.3. Một số kỹ thuật phát hiện các đột biến gen trong hội chứng tăng sinh tủy .. 9 1.3.1. Polymerase chain reaction (PCR) và AS - PCR ............................. 9 1.3.2. Realtime – PCR ........................................................................... 10 1.3.2.1. Nguyên lý kỹ thuật Real - time PCR....................................... 10 1.3.2.2. Taqman probe (Đầu dò) sử dụng trong Realtime - PCR.......... 11CHƯƠNG 2 – ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ...... 13 2.1. Vật liệu, hóa chất và thiết bị nghiên cứu ............................................. 13 2.1.1. Đối tượng nghiên cứu ................................................................... 13 2.1.2. Hóa chất và thiết bị nghiên cứu .................................................... 13 2.2. Thời gian địa điểm nghiên cứu ........................................................... 14 2.3. Phương pháp nghiên cứu .................................................................... 14 2.3.1. Thiết kế nghiên cứu. ..................................................................... 14 2.3.2. Phương pháp nghiên cứu .............................................................. 14 2.3.3. Đánh giá nồng độ và chất lượng ADN trên máy quang phổ Nano Drop ....................................................................................................... 15 2.3.4. Xét nghiệm phát hiện đột biến gen JAK2-V617F ....... ...