Luận án tiến sĩ: Tuyển chọn chủng Bacillus subtilis ứng dụng trong phòng bệnh nhiễm khuẩn đường tiêu hóa trên gà

Đề tài “Tuyển chọn chủng Bacillus subtilis ứng dụng trong phòng bệnh nhiễm khuẩn đường tiêu hóa trên gà” được thực hiện nhằm nghiên cứu tìm giải pháp mới thay thế sử dụng kháng sinh trong chăn nuôi, nâng cao năng suất, hiệu quả trong chăn nuôi gà công nghiệp và giảm bớt nguy cơ lan rộng các dòng vi khuẩn đề kháng kháng sinh trong tự nhiên.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Luận án tiến sĩ: Tuyển chọn chủng Bacillus subtilis ứng dụng trong phòng bệnh nhiễm khuẩn đường tiêu hóa trên gà BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƯỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ LÊ THỊ HẢI YẾN TUYỂN CHỌN CHỦNG BACILLUS SUBTILIS ỨNG DỤNG TRONG PHÕNG BỆNH NHIỄM KHUẨN ĐƯỜNG TIÊU HÓA TRÊN GÀ LUẬN ÁN TIẾN SĨCHUYÊN NGÀNH BỆNH LÝ HỌC VÀ CHỮA BỆNH VẬT NUÔI MÃ SỐ: 62 64 01 02 CẦN THƠ, 2018 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC CẦN THƠ LÊ THỊ HẢI YẾN TUYỂN CHỌN CHỦNG BACILLUS SUBTILIS ỨNG DỤNG TRONG PHÕNG BỆNH NHIỄM KHUẨN ĐƢỜNG TIÊU HÓA TRÊN GÀ LUẬN ÁN TIẾN SĨCHUYÊN NGÀNH BỆNH LÝ HỌC VÀ CHỮA BỆNH VẬT NUÔI MÃ SỐ: 62 64 01 02 HƢỚNG DẪN KHOA HỌC PGS.TS. NGUYỄN ĐỨC HIỀN Cần Thơ, 2018 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành các nội dung trong luận văn tốt nghiệp, ngoài sự cố gắnghọc hỏi của bản thân, tôi đã nhận được sự giúp đỡ rất nhiều từ quý thầy cô, bạnbè. Tôi xin gởi lời cảm ơn chân thành đến: PGS. TS Nguyễn Đức Hiền đã động viên, giúp đỡ, tạo điều kiện thuận lợicho tôi học tập, nghiên cứu và hoàn thành luận án. Quí thầy cô Bộ môn Thú y, khoa Nông nghiêp và Sinh học Ứng dụng,trường Đại học Cần Thơ đã dạy dỗ, truyền đạt kiến thức và kinh nghiệm quý báucho tôi trong suốt thời gian học tập tại trường. Ban lãnh đạo Vemedim Corporation, Trung tâm nghiên cứu và phát triểnVemedim đã tạo điều kiện thuận lợi để tôi học tập, nghiên cứu và nâng cao trìnhđộ trong thời gian qua. Cty TNHH chăn nuôi một thành viên Vemedim đã tạo điều kiện thuận lợicho tôi được thực hiện các thí nghiệm. Xin chân thành cảm ơn tất cả bạn bè, các bạn đồng nghiệp, các anh, chị,em phòng Sản phẩm sinh học, Trung Tâm nghiên cứu và phát triển Vemedim đãhỗ trợ, chia sẻ và cung cấp thông tin giúp tôi hoàn thành luận án. Cảm ơn gia đình và những người thân đã động viên, chia sẻ và luôn sátcánh bên tôi trong suốt quá trình học tập cũng như thực hiện đề tài. ii TÓM LƢỢC Đề tài “Tuyển chọn chủng Bacillus subtilis ứng dụng trong phòng bệnhnhiễm khuẩn đường tiêu hóa trên gà” được thực hiện với mục đích phân lậpchủng vi khuẩn B. subtilis có tiềm năng probiotic thích hợp cho gia cầm từ đất vàphân của trại gà. Nghiên cứu này nhằm tìm biện pháp mới thay thế kháng sinhtrong phòng và trị bệnh, nâng cao năng suất, hiệu quả trong chăn nuôi gà côngnghiệp, giảm bớt nguy cơ lan rộng các dòng vi khuẩn kháng kháng sinh trong tựnhiên. Đề tài đã phân lập được 296 chủng vi khuẩn từ 70 mẫu đất và 70 mẫu phângà thu thập tại các trại gà thuộc 7 tỉnh, thành vùng ĐBSCL. Các chủng vi khuẩnnày được chọn lọc qua kiểm định sinh lý, sinh hóa với các chỉ tiêu như: âm tínhvới lecithinase, dương tính với catalase, amylase, cellulase, VP (Voges-Proskauer), và chịu nhiệt cao (phát triển được ở 50oC); và được định danh bằngbộ kít API CH50B (Biomerieux-France) kết hợp với kỹ thuật sinh học phân tửgiải trình tự gen 16S rRNA (sử dụng phần mềm BLAST so sánh trình tự gen trêncơ sở dữ liệu NCBI). Kết quả phân tích cho thấy đã chọn ra được 21 chủng vikhuẩn đạt chỉ tiêu về mặt sinh lý, sinh hóa theo yêu cầu và về mặt định danh cómức độ tương đồng của gene 16S rRNA cao (≥ 99%) với B. subtilis. Nhằm tuyểnchọn chủng vi khuẩn có tiềm năng probiotic, 21 chủng B. subtilis tuyển chọn đãđược khảo sát các đặc điểm đặc trưng cho vi khuẩn probiotic như: tính nhạy cảmkháng sinh (erythromycin, gentamycin, neomycin, oxytetracyclin, doxycyclin,colistin, sulfadimidin - trimethoprim, norfloxacin, enrofloxacin), tính chịu nhiệt(phát triển ở nhiệt độ từ 50-60oC), khả năng sinh enzyme ngoại bào (amylase,protease, lipase), khả năng ức chế vi khuẩn gây bệnh (E. coli, S. enterica,Staphylococcus spp., Streptococcus spp.), khả năng chịu pH acid dạ dày (pH 2,0),khả năng chịu muối mật 0,3%, khả năng bám dính (tự bám dính, bám dính với vikhuẩn gây bệnh, bám dính tế bào biểu mô ruột) và khả năng sống được trongđường tiêu hóa gà. Kết quả cho thấy trong 21 chủng vi khuẩn khảo sát,B. subtilis VL28 thể hiện tốt nhất các đặc tính probiotic, do vậy chủng này đượcchọn để sử dụng trong thử nghiệm thức ăn bổ sung probiotic cho gà. Vi khuẩnB. subtilis VL28 mật độ 107 CFU/g với liều lượng 5 g/kg thức ăn được bổ sungvào thức ăn cho gà ở độ tuổi 1-56 ngày cho thấy hiệu quả tăng trọng của gà đạt11,7%, đồng thời lượng thức ăn sử dụng giảm 16,8% so với đối chứng nuôi bằngthức ăn không bổ sung vi khuẩn. Bên cạnh đó, gà 18 ngày tuổi lây nhiễm vớiS. enterica (liều 7,5x104 CFU/mL/gà) và E. coli (liều 5,0x106 CFU/mL/gà), đượcnuôi với thức ăn có bổ sung B. subtilis VL28 với liều như trên có khả năng tăngtrọng và tỉ lệ sống tương đương với điều trị bằng kháng sinh enr ...