Luận văn: PHÂN LẬP PROMOTER CỦA GEN MÃ HÓA CHO ENZYME CINNAMYL ALCOHOL DEHYDROGENASE (CAD) VÀ THIẾT KẾ VECTOR CHUYỂN GEN MANG ĐOẠN GEN MÃ HÓA CHO ENZYME CINNAMOYL CoA REDUCTASE (CCR) TỪ CÂY BẠCH ĐÀN URO (EUCALYPTUS UROPHYLLA S.T. BLAKE)

Lignin là một trong hai loại polymer sinh học phổ biến trong cây, saucellulose. Nó chiếm khoảng 30% lượng cacbon hữu cơ trong sinh quyển vàgần 35% lượng vật chất khô trong gỗ của các loài thực vật. Quá trình tổnghợp lignin là một trong những cách thức thích nghi của thực vật trong quátrình tiến hóa khi thực vật thay đổi môi trường sống từ nước lên cạn. Ligningiữ vai trò quan trọng trong việc hình thành cấu trúc thành tế bào và thân.Thêm vào đó lignin tham gia vào quá trình vận chuyển nước, các chất dinhdưỡng thông...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Luận văn: PHÂN LẬP PROMOTER CỦA GEN MÃ HÓA CHO ENZYME CINNAMYL ALCOHOL DEHYDROGENASE (CAD) VÀ THIẾT KẾ VECTOR CHUYỂN GEN MANG ĐOẠN GEN MÃ HÓA CHO ENZYME CINNAMOYL CoA REDUCTASE (CCR) TỪ CÂY BẠCH ĐÀN URO (EUCALYPTUS UROPHYLLA S.T. BLAKE) ĐẠI HỌC THÁI NGUYÊN TRƢỜNG ĐẠI HỌC SƢ PHẠM LÊ PHƢƠNG DUNGPHÂN LẬP PROMOTER CỦA GEN MÃ HÓA CHO ENZYME CINNAMYLALCOHOL DEHYDROGENASE (CAD) VÀ THIẾT KẾ VECTOR CHUYỂN GEN MANG ĐOẠN GEN MÃ HÓA CHO ENZYME CINNAMOYL CoA REDUCTASE (CCR) TỪ CÂY BẠCH ĐÀN URO (EUCALYPTUS UROPHYLLA S.T. BLAKE) LUẬN VĂN THẠC SỸ SINH HỌC Thái Nguyên – 2009Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn THAI NGUYEN UNIVERSITY COLLEGE OF EDUCATION LE PHUONG DUNG CLONING PROMOTER REGION OF GENE ENCODING CINNAMYL ALCOHOL DEHYDROGENASE (CAD) AND CONSTRUCTING PLANT TRANSFORMATION VECTOR CARRYING CINNAMOYL CoA REDUCTASE GENE FROM EUCALYPTUS UROPHYLLA S.T. BLAKE Speciality: Genetics Code: 60.42.70 MASTER’S THESIS SUMMARY Supervisor: Dr. Nguyen Huu Cuong Thai Nguyen, 2009Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn LỜI CAM ĐOANTôi xin cam đoan đây là công trình nghiên cứu của tôi. Các số liệu và kết quảnghiên cứu trong luận văn là hoàn toàn trung thực và chưa có ai công bố trongmột công trình nào khác. Tác giả Lê Phương DungSố hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn MỤC LỤCMỞ ĐẦUCHƢƠNG 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU ...........................................................1.1. Tổng quan về cây bạch đàn .........................................................................1.2. Tình hình trồng bạch đàn ở Việt Nam........................................................1.3. Tình hình sinh trưởng của cây bạch đàn ở Việt Nam …………………….1.4. Lignin và chu trình sinh tổng hợp lignin ở thực vật .....................................1.4.1. Lignin .................................................................................................. Chu trình sinh tổng hợp lignin ở thực vật .............................................1.4.2. Giới thiệu về gen mã hóa cho enzyme cinnamyl alcohol dehydrogenase1.4.3.(CAD)1.5. Tổng quan về promoter ............................................................................... Mô hình điều hoà biểu hiện gen ở sinh vật nhân chuẩn. .......................1.5.1. Cấu trúc và chức năng của promoter ....................................................1.5.2. Các loại promoter sử dụng trong công nghệ sinh học ...........................1.5.3.1.5.4. Promoter điểu khiển hoạt động gen ở tầng xylem Error! Bookmarknot defined.1.5. Một số kỹ thuật sinh học phân tử ứng dụng trong nghiên cứuCHƢƠNG 2. VẬT LIỆU VÀ PHƢƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .....................2.1. Vật liệu nghiên cứu ..................................................................................... Vật liệu: ...............................................................................................2.1.1. Hoá chất:..............................................................................................2.1.2. Máy móc, thiết bị .................................................................................2.1.3.2.1.4. Địa điểm nghiên cứu2.2. Phương pháp nghiên c ứu .............................................................................Số hóa bởi Trung tâm Học liệu – Đại học Thái Nguyên http://www.Lrc-tnu.edu.vn Phương pháp tìm kiếm thông tin về trình tự gen mã hóa cho enzyme2.2.1.CAD trên ngân hàng gen quốc tế ....................................................................... Thiết kế mồi đặc hiệu tách dòng gen/promoter. ....................................2.2.2. Tách chiết và tinh sạch DNA – RNA từ mô gỗ ....................................2.2.3.2.3.4. Tổng hợp cDNA Khuếch đại đoạn promoter EuCAD và đo ạn gen CCR bằng phản ứng2.2.5.PCR ..... Phương pháp tách dòng .......................................................................2.2.6. Phương pháp PCR trực tiếp từ khuẩn lạc (colony -PCR) Error!2.2.7.Bookmark not defined. Phương pháp xác định trình tự của gen. ...............................................2.2.8. Phương pháp Gateway. ........................................................................2.2.9.CHƢƠNG 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN ....................................................3.1. Tách chiết DNA bạch đàn...........................................................................3.2. Khuếch đại promoter bằng PCR .................................................................3.3. Tách dòng và xác đ ịnh trình tự đoạn promoter EuCAD ..............................3.3.1. Tinh sạch sản phẩ m PCR và tạo vector tái tổ hợp ....................................3.3.2. Biến nạp sản phẩm ligation vào tế bào vi khuẩn E.coli DH5. ................3.3.3. Chọn dòng tế bào E.coli mang vector tái tổ hợp. .....................................3.3.4. Tách chiết plasmid tái tổ hợp ......... ...