Luận văn:Tách và xác định β-Lactam trong đối tượng sinh học bằng phương pháp điện di mao quản

β-Lactam là thuốc kháng sinh tổng hợp quan trọng chữa bệnh cho con người,từ khi chúng được giới thiệu trên thị trường vào năm 1938 và là loại kháng sinhdùng nhiều nhất hiện nay. Liều lượng và cách dùng kháng sinh không đúng sẽ dễkhuẩn nhờn thuốc, kháng thuốc, từ đó việc chữa trị bệnh càng khó khăn. Ngoài ragây lãng phí cho người bệnh vì có các bệnh do virut không chữa được bằng kháng...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Luận văn:Tách và xác định β-Lactam trong đối tượng sinh học bằng phương pháp điện di mao quản TRƯỜNG…………………. KHOA……………………… LUẬN VĂN TỐT NGHIỆPTách và xác định β-Lactam trong đối tượng sinh học bằng phương pháp điện di mao quản 1 MỤC LỤCMỞ ĐẦU………………………………………………………………... 4CHƯƠNG 1 - TỔNG QUAN…………………………………………...51.1. Giới thiệu về chất kháng sinh β-lactam…………………………………………51.2. Tình hình lạm dụng kháng sinh ở Việt Nam và trên thế giới hiện nay ……... 91.3. Các phương pháp phân tích định lượng β-lactam…………………………….11 1.3.1. Phương pháp quang học ………………………………………………...11 1.3.2. Phương pháp điện hóa …………………………………………………..12 1.3.3. Sắc ký lỏng hiệu năng cao (HPLC) ……………………………………..12 1.3.4.Phương pháp điện di mao quản (Capillary electrophoresis-CE) ……..14CHƯƠNG 2 - ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ………172.1. Đối tượng và nội dung nghiên cứu …………………………………………….17 2.1.1. Đối tượng ……………………………………………………………….. 17 2.1.2. Nội dung nghiên cứu ……………………………………………………172.2. Giới thiệu chung về phương pháp Điện di mao quản ………………………. 17 2.2.1. Nguyên tắc của phương pháp điện di mao quản……………………… 17 2.2.2. Thiết bị của phương pháp điện di mao quản………………………….. 18 2.2.3 . Các quá trình xẩy ra trong mao quản………………………………… 19 2.2.4. Sự phân loại hay các kiểu (mode) của phương pháp điện di mao quản……………………………………………………………………………... 29 2.2.5. Phương pháp điện di mao quản điện động học kiểu Mixen (MEKC).. 20 2.2.6. Phân tích định lượng trong phương pháp điện di mao quản………….262.3. Thực nghiệm…………………………………………………………………… .27 2.3.1. Máy móc và dụng cụ …………………………………………………….27 2.3.2. Hóa chất ………………………………………………………………….27 2CHƯƠNG 3 - KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN ………………………….293.1. Nghiên cứu khảo sát tối ưu điều kiện tách β - Lactam ……………………..29 3.1.1. Chọn bước sóng phát hiện chất …………………………………………29 3.1.2. Mao quản và xử lý mao quản trước khi tách………………………… 30 3.1.3. Chọn phương pháp bơm mẫu …………………………………………..31 3.1.4. Độ điện di và độ điện di hiệu dụng ……………………………………..32 3.1.5. Ảnh hưởng pH của dung dịch đệm điện di …………………………….33 3.1.6. Ảnh hưởng của thành phần dung dịch đệm …………………………...36 3.1.7. Khảo sát ảnh hưởng của nồng độ chất tạo mixen SDS ……………….37 3.1.8. Khảo sát ảnh hưởng của nồng độ đệm…………………………………40 3.1.9. Khảo sát ảnh hưởng thời gian bơm mẫu ………………………………43 3.1.10. Khảo sát ảnh hưởng thế điện di ……………………………………….45 3.1.11. Khảo sát ảnh hưởng nhiệt độ của mao quản …………………………47 3.1.12.Tổng kết điều kiện tối ưu ……………………………………………….503.2. Đánh giá phương pháp phân tích ……………………………………………...51 3.2.1. Khảo sát khoảng tuyến tính và lập đường chuẩn ……………………..51 3.2.2 Giới hạn phát hiện (LOD) và giới hạn định lượng của đường chuẩ n (LOQ)…………………………………………………………………………... 54 3.2.5. Độ chính xác của phép đo ………………………………………………55 3.2.6. Độ lặp lại của phép đo …………………………………………………..573.3. Phân tích mẫu thực ……………………………………………………………..59 3.3.1. Phân tích mẫu thuốc …………………………………………………….59 3.3.2 Phân tích mẫu máu …………………………………………………….. .633.4. Ưu nhược điểm của phương pháp điện di mao quản điện động học kiểuMixen (MEKC) ……………………………………………………………………...643.5. Hướng phát triển của đề tài. …………………………………………………...65PHỤ LỤC ………………………………………………………………..71 3 MỞ ĐẦU Ngày nay, khi xã hội ngày càng phát triển thì vấn đề sức khỏe của con ngườingày càng được chú trọng đặc biệt là các sản phẩm liên quan trực tiếp đến sức khỏe β-Lactam là thuốc kháng sinh tổng hợp quan trọng chữa bệnh cho con người,thú y từ khi chúng được giới thiệu trên thị trường vào năm 1938 và là loại kháng sinhđược dùng nhiều nhất hiện nay. Liều lượng và cách dùng kháng sinh không đúng sẽ dễbị vi khuẩn nhờn thuốc, kháng thuốc, từ đó việc chữa trị bệnh càng khó khăn. Ngoài racòn gây lãng phí cho người bệnh vì có các bệnh do virut không chữa được bằng khángsinh nhưng vẫn dùng kháng sinh, gây khó khăn cho việc chuẩn đoán các bệnh và ảnhhưởng sức khỏe của người bệnh. Hàm lượng lớn kháng sinh trong máu gây ra các bệnhvề thận, đặc biệt ở người cao tuổi. Vì vậy kiểm soát và phân tích thuốc kháng sinh đốivới người bệnh là biện pháp cần thiết để nâng cao hiệu quả sử dụng chúng. Ở Việt Nam đã có rất nhiều công trình nghiên cứu tách và xác định đồng thờicác kháng sinh β-Lactam trong các mẫu dược phẩm, sinh học, thực phẩm và môitrường chủ yếu là các công trình phân tích bằng sắc ký lỏng hiệu năng cao HPLC.Phương pháp HPLC là phương pháp tách chọn lọc, độ nhạy cao, lượng mẫu bơm ít thờigian phân tích ngắn. Tuy nhiên phương pháp cũng có một số nhược điểm là phải sửdụng một lượng lớn dung môi để rửa cột, giá thành phân tích cao. Ngược lại, phươngpháp điện di mao quản điện động học kiểu Mixen (MEKC) lại sử dụng một lượng hóachất không đáng kể, tiết kiệm chi phí từ 3 – 4 lần, lượng mẫu bơm nhỏ hơn trongHPLC hàng trăm lần, cỡ nl, cho độ tin cậy cao. Tách và xác định đồng thời kháng sinh β-Lactam bằng phương pháp điện dimao quản điện động học kiểu Mixen (MEKC) trong mẫu dược phẩm và sinh học làmột hướng nghiên cứu mới, song với ưu điểm của nó thì phương pháp sẽ ngày càngthông dụng được áp dụng nhiều trong phòng thí nghiệm và phân tích mẫu dịch vụ. Vìvậy chúng tôi quyết định chọn đề tài là “ Tách và xác định β-Lactam trong đốitượng sinh học bằng phương pháp điện di mao quản” 4 CHƯƠNG 1 - TỔNG QUAN1.1. Giới thiệu về chất kháng sinh β-lactam [1,2,10,25] Là các kháng sinh mà phân tử chứa vòng β-Lactam. Gồm các nhóm: penicillin,cephalosporin, monobactam, cacbapenem trong đó hai nhóm s ử dụng phổ biến và lớnnhất là penicillin và cephalosporin. Các penicillin thu được từ môi trường nu ...