Luận văn Thạc sĩ Khoa học: Nghiên cứu thiết lập quy trình đẳng nhiệt Recombinase polymerase amplification phát hiện tác nhân gây bệnh sốt mò

Luận văn Thạc sĩ Khoa học: Nghiên cứu thiết lập quy trình đẳng nhiệt Recombinase polymerase amplification phát hiện tác nhân gây bệnh sốt mò được thực hiện với mục tiêu nhằm Nghiên cứu thiết lập quy trình đẳng nhiệt RPA cho phép phát hiện nhanh và chính xác O. tsutsugamushi với độ nhạy, độ đặc hiệu cao; đánh giá độ nhạy và độ đặc hiệu của quy trình RPA được thiết lập. Mời các bạn cùng tham khảo.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Luận văn Thạc sĩ Khoa học: Nghiên cứu thiết lập quy trình đẳng nhiệt Recombinase polymerase amplification phát hiện tác nhân gây bệnh sốt mò ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN ------------------------------ Lê Thị Thúy NGHIÊN CỨU THIẾT LẬP QUY TRÌNH ĐẲNG NHIỆTRECOMBINASE POLYMERASE AMPLIFICATION PHÁT HIỆN TÁC NHÂN GÂY BỆNH SỐT MÒ LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC Hà Nội - 2019 ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘI TRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN ---------------------------- Lê Thị Thúy NGHIÊN CỨU THIẾT LẬP QUY TRÌNH ĐẲNG NHIỆTRECOMBINASE POLYMERASE AMPLIFICATION PHÁT HIỆN TÁC NHÂN GÂY BỆNH SỐT MÒ Chuyên ngành : Vi sinh vật học Mã số : 8420101.07 LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌC NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS.BS HỒ HỮU THỌ TS. MAI THỊ ĐÀM LINH Hà Nội - 2019 LỜI CẢM ƠN Để hoàn thành bản luận văn này, tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới TS. HồHữu Thọ - Viện Nghiên cứu Y Dược học Quân sự, Học Viện Quân Y người thầy đãtạo điều kiện, trực tiếp hướng dẫn, và truyền đạt những kinh nghiệm quý báu trongsuốt thời gian tôi thực hiện đề tài. Tôi xin bày tỏ lòng kính trọng, biết ơn sâu sắc tới TS. Mai Thị Đàm Linh –Trường ĐHKHTN, ĐHQGHN người đã hướng dẫn, chỉ bảo tận tình, truyền đạt kiếnthức và luôn giúp đỡ tôi trong suốt thời gian tôi học tập và thực hiện đề tài. Xin gửi lời cảm ơn các anh chị, bạn đồng nghiệp tại Phòng Công nghệ gen vàDi truyền tế bào đã giúp đỡ và động viên tôi trong suốt thời gian qua. Tôi xin trân trọng cảm ơn toàn thể các thầy, cô giáo trong Khoa Sinh học vàTrường Đại học Khoa học Tự Nhiên đã giảng dạy và tạo điều kiện thuận lợi cho tôihọc tập và nghiên cứu. Tôi cũng xin gửi lời cảm ơn tới gia đình, người thân và bạn bè đã ủng hộ, giúpđỡ tạo điều kiện để tôi có thể hoàn thành được luận văn này. Hà Nội, 29 tháng 11 năm 2019 Học viên Lê Thị Thúy MỤC LỤCMỤC LỤC ...................................................................................................................4DANH MỤC HÌNH ....................................................................................................7DANH MỤC BẢNG ...................................................................................................9DANH MỤC CHỮ, KÝ HIỆU VIẾT TẮT ..............................................................10ĐẶT VẤN ĐỀ.............................................................................................................1CHƯƠNG 1 : TỔNG QUAN TÀI LIỆU ..............................................................3 1.1 Bệnh sốt mò ................................................................................................3 1.1.1 Dịch tễ học ...........................................................................................3 1.1.2 Đặc điểm lâm sàng ..............................................................................7 1.1.3 Điều trị .................................................................................................9 1.1.4 Phòng bệnh sốt mò ............................................................................10 1.2. Tác nhân gây bệnh sốt mò: Orientia tsutsugamushi .............................10 1.2.1. Đặc điểm sinh học .............................................................................10 1.2.2. Cơ chế lây truyền bệnh sốt mò ..........................................................14 1.2.3. Cơ chế gây bệnh sốt mò ....................................................................18 1.3. Các phương pháp chẩn đoán bệnh sốt mò ............................................22 1.3.1. Phương pháp huyết thanh học .................................................................22 1.3.2. Phương pháp PCR, realtime PCR, Nested PCR ................................24 1.3.3. Phương pháp khuếch đại đẳng nhiệt Recombinase polymerase amplification (RPA) ..........................................................................................24CHƯƠNG 2 : VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU .....................34 2.1. Sơ đồ nghiên cứu ............................................................................................34 2.2. Thiết kế mồi và probe cho phản ứng RPA .....................................................34 2.2. Tổng hợp chứng dương nhân tạo ...................................................................35 2.3. Kiểm tra khả năng khuếch đại mồi/ probe đặc hiệu gen đích 47-kDa do nhóm nghiên cứu thiết kế ................................................................................................35 2.4. Tối ưu quy trình RPA đã thiết lập ..................................................................37 2.4.1. Tối ưu điều kiện phản ứng ......................................................................37 2.4.2. Tối ưu thành phần phản ứng ...................................................................38 2.5. Kỹ thuật Realtime PCR (kit thương mại) ......................................................39 2.6. Đánh giá ngưỡng phát hiện .......................................................... ...