Luận văn Thạc sĩ Khoa học: Tạo dòng tế bào lai sản xuất kháng thể đơn dòng kháng kháng nguyên B trên màng tế bào hồng cầu người

Kết cấu nội dung của luận văn gồm có phần mở đầu, nội dung, phần kết thúc và danh mục tài liệu tham khảo. Luận văn gồm 3 chương. Chương 1: Tổng quan tài liệu. Chương 2: Vật liệu và phương pháp. Chương 3: Kết quả và thảo luận.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Luận văn Thạc sĩ Khoa học: Tạo dòng tế bào lai sản xuất kháng thể đơn dòng kháng kháng nguyên B trên màng tế bào hồng cầu ngườiĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘITRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN-----------------------------TRẦN QUỐC KHÁNHTẠO DÒNG TẾ BÀO LAI SẢN XUẤTKHÁNG THỂ ĐƠN DÒNG KHÁNG KHÁNG NGUYÊN BTRÊN MÀNG TẾ BÀO HỒNG CẦU NGƯỜILUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌCHà Nội - 2016ĐẠI HỌC QUỐC GIA HÀ NỘITRƯỜNG ĐẠI HỌC KHOA HỌC TỰ NHIÊN-----------------------------TRẦN QUỐC KHÁNHTẠO DÒNG TẾ BÀO LAI SẢN XUẤTKHÁNG THỂ ĐƠN DÒNG KHÁNG KHÁNG NGUYÊN BTRÊN MÀNG TẾ BÀO HỒNG CẦU NGƯỜIChuyên ngành: Sinh học thực nghiệmMã số: 60420114LUẬN VĂN THẠC SĨ KHOA HỌCNGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: TS. NGUYỄN THỊ TRUNGTS. NGUYỄN ĐÌNH THẮNGHà Nội – 2016LỜI CẢM ƠNTôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc tới TS. Nguyễn Thị Trung, Viện Hàn lâmKhoa học và Công nghệ Việt Nam, người thầy đã tận tình chỉ bảo, hướng dẫn tôitrong suốt thời gian học tập và thực hiện luận văn này.Tôi cũng xin trân trọng cảm ơn TS. Nguyễn Đình Thắng (Bộ môn sinh lý thựcvật và hóa sinh, Trường Đại học Khoa học Tự nhiên) cùng các thầy giáo, cô giáotrong khoa Sinh học, đặc biệt là các thầy giáo, cô giáo trong bộ môn Sinh lý Thựcvật và Hóa sinh học đã tận tình hướng dẫn, giúp đỡ, giảng dạy và dìu dắt tôi trongthời gian thực hiện luận văn cũng như trong suốt thời gian học tập tại trường.Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành tới các anh chị, các bạn làm việc tạiPhòng Kỹ thuật di truyền, Viện Công nghệ Sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học vàCông nghệ Việt Nam đã tận tình giúp đỡ và chỉ bảo tôi trong suốt quá trình học tậpvà thực hiện luận văn tại phòng.Cuối cùng, tôi vô cùng biết ơn gia đình và bạn bè đã luôn khích lệ động viêntôi trong suốt thời gian qua.Hà Nội, ngày 9 tháng 12 năm 2016Học viênTrần Quốc KhánhiiiMỤC LỤCMỞ ĐẦU1CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN TÀI LIỆU31.1. Máu và hệ thống nhóm máu ở người31.2. Truyền máu và nguyên tắc truyền máu71.3. Kháng thể đơn dòng101.3.1. Khái niệm101.3.2. Vai trò và ứng dụng của kháng thể đơn dòng111.3.3. Công nghệ sản xuất kháng thể đơn dòng141.3.4. Tình hình nghiên cứu, sản xuất kháng thể đơn dòng tại Việt Nam17CHƯƠNG 2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP192.1. Vật liệu192.1.1. Mẫu nghiên cứu192.1.2. Sinh phẩm192.1.3. Máy móc và thiết bị202.2. Phương pháp nghiên cứu202.2.1. Gây miễn dịch và đánh giá khả năng đáp ứng miễn dịch202.2.1.2. Đánh giá khả năng đáp ứng miễn dịch232.2.2. Chuẩn bị tế bào nền232.2.3. Nuôi cấy tế bào myeloma242.2.4. Dung hợp và tạo dòng tế bào lai242.2.5. Sàng lọc tế bào lai262.2.6. Tách dòng tế bào lai đơn sản xuất kháng thể đơn dòng kháng kháng nguyênB272.2.7. Đánh giá tốc độ sinh trưởng và sản xuất kháng thể của tế bào lai282.2.8. Phương pháp đếm tế bào lai (xác định số lượng tế bào sống)292.2.9. Xác định loại globulin miễn dịch và kiểm tra tính đơn dòng của tế bào lai 29iv2.2.10. Đánh giá kháng thể do tế bào lai sản xuất312.2.11. Cô đặc kháng thể bằng ammonium sulfate322.2.12. Tạo sinh phẩm xác định nhóm máu B33CHƯƠNG 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN353.1. Lựa chọn nguyên liệu và gây miễn dịch cho chuột353.1.1. Lựa chọn nguyên liệu gây miễn dịch cho chuột353.1.2. Cách thức gây miễn dịch cho chuột353.2. Nghiên cứu tạo tế bào lai giữa myeloma và tế bào lympho B chuột373.2.1. Nuôi cấy tế bào đại thực bào để tạo lớp tế bào nền373.2.2. Nghiên cứu tạo tế bào lai sinh kháng thể đơn dòng gây ngưng kết đặc hiệuhồng cầu mang kháng nguyên B383.2.2.1. Tách hỗn hợp tế bào giàu tế bào lympho B từ hạch bẹn và lách của chuộtđã gây miễn dịch bằng hồng cầu B383.2.2.2. Dung hợp giữa tế bào myeloma sp2/0 và hỗn hợp tế bào giàu tế bàolympho B tách từ chuột gây miễn dịch bởi hồng cầu mẫu B393.2.2.3. Nghiên cứu sàng lọc tế bào lai tiết kháng thể kháng kháng nguyên B413.2.2.4. Khả năng sinh trưởng của tế bào B4D10C9423.2.2.5. Khả năng sản xuất mAb kháng kháng nguyên B của dòng tế bào laiB4D10C9433.2.2.6. Xác định độ đặc hiệu mAb do B4D10C9 sản xuất443.2.2.7. Cường độ và ái tính mAb do B4D10C9 sản xuất với hồng cầu mẫu B443.2.2.8. Xác định phân lớp mAb do dòng tế bào B4D10C9 sinh ra453.2.2.9. Cô đặc dung dịch kháng thể đơn dòng kháng lại kháng nguyên B473.2.2.10. Tạo sinh phẩm kháng thể đơn dòng kháng lại kháng nguyên B49KẾT LUẬN VÀ KIẾN NGHỊ51TÀI LIỆU THAM KHẢO52v