Luận văn Thạc sĩ Sinh học thực nghiệm: Nghiên cứu sử dụng chỉ thị ITS để đánh giá quan hệ di truyền và nhận dạng một số mẫu giống cây Óc chó thu thập tại các tỉnh miền núi phía Bắc

Đề tài nghiên cứu xác định được quan hệ di truyền, mức độ đa dạng của cây Óc chó thu thập tại các tỉnh miền núi phía Bắc; xác định được các đặc trưng trình tự ITS của một số mẫu cây Óc chó phục vụ công tác tuyển chọn và lai tạo giống.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Luận văn Thạc sĩ Sinh học thực nghiệm: Nghiên cứu sử dụng chỉ thị ITS để đánh giá quan hệ di truyền và nhận dạng một số mẫu giống cây Óc chó thu thập tại các tỉnh miền núi phía Bắc BỘ GIÁO DỤC VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ ĐÀO TẠO VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ ----------------------------- Nguyễn Thị Thu ThủyNGHIÊN CỨU SỬ DỤNG CHỈ THỊ ITS ĐỂ ĐÁNH GIÁ QUAN HỆ DI TRUYỀN VÀ NHẬN DẠNG MỘT SỐ MẪU GIỐNG CÂY ÓC CHÓ THU THẬP TẠI CÁC TỈNH MIỀN NÚI PHÍA BẮC LUẬ N VĂ N THẠ C SĨ SINH HỌC THỰC NGHIỆM Hà Nội – 2019 BỘ GIÁO DỤC VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ ĐÀO TẠO VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ ----------------------------- Nguyễn Thị Thu ThủyNGHIÊN CỨU SỬ DỤNG CHỈ THỊ ITS ĐỂ ĐÁNH GIÁ QUAN HỆ DI TRUYỀN VÀ NHẬN DẠNG MỘT SỐ MẪU GIỐNG CÂY ÓC CHÓ THU THẬP TẠI CÁC TỈNH MIỀN NÚI PHÍA BẮC Chuyên ngành : Sinh học thực nghiệm Mã số : 8420114 LUẬ N VĂ N THẠ C SĨ SINH HỌC THỰC NGHIỆM NGƯỜI HƯỚNG DẪ N KHOA HỌC Hướng dẫn 1: PGS.TS. Khuất Hữu Trung Hướng dẫn 2: PGS.TS. Đồng Văn Quyền Hà Nội - 2019 LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan bản luận văn này là kết quả nghiên cứu của cá nhântôi dưới sự hướng dẫn của PGS.TS. Khuất Hữu Trung và PGS.TS. ĐồngVăn Quyền. Các số liệu và tài liệu được trích dẫn trong luận văn là trungthực. Kết quả nghiên cứu này không trùng với bất cứ công trình nào đã đượccông bố trước đó. Tôi xin chịu trách nhiệm với lời cam đoan của mình. Hà Nội, tháng năm 2019 Tác giả Nguyễn Thị Thu Thủy LỜI CẢM ƠN Tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành đến Học viện Khoa học và Côngnghệ, Viện Di truyền Nông nghiêp, các thầy giáo, cô giáo đã tạo điều kiệnthuận lợi cho tôi được học tập và hoàn thành khóa học này. Tôi xin bày tỏ lòng biết ơn sâu sắc đến PGS.TS Khuất Hữu Trung –Phó viện trưởng – Viện Di truyền Nông nghiệp và PGS.TS Đồng Văn Quyền– Phó viện trưởng – Viện Công nghệ Sinh học, người đã tận tình giúp đỡ,hướng dẫn tôi hoàn thành luận văn này. Tôi xin được cảm ơn tập thể cán bộ Bộ môn Kĩ thuật Di truyền - ViệnDi truyền Nông nghiệp luôn động viên, giúp đỡ và tạo điều kiện thuận lợi vềcơ sở vật chất - trang thiết bị để tôi có thể hoàn thành luận văn này. Luận văn được sử dụng một phần số liệu và kết quả thuộc đề tài: “Khaithác và Phát triển nguồn gen cây Óc chó (Juglans regia Linn) tại Lai Châu vàmột số tỉnh miền núi phía Bắc”, mã số NVQG-2016/15 do TS. Nguyễn ToànThắng làm chủ nhiệm. Tôi xin chân thành cám ơn. Cuối cùng, tôi xin bày tỏ lòng biết ơn vô cùng sâu sắc tới gia đình, bạnbè, đồng nghiệp những người đã luôn bên cạnh, động viên, góp ý cho tôitrong suốt quá trình học tập. Hà Nội, tháng năm 2019 Tác giả Nguyễn Thị Thu Thủy DANH MỤC CÁC TỪ VIẾT TẮTAFLP Amplified Fragments Length PolymorphismcDNA Complementary deoxyribonucleic acidCTAB Cetyl trimethyl ammonium bromideDNA Deoxyribonucleic aciddNTPs Deoxynucleoside triphosphatesDMSO Dimethyl sulfoxide (CH3 ) 2 SOEDTA Ethylendiamin Tetraacetic AcidEtBr Ethidium BromideISSR Inter simple sequence repeatITS Internal Transcribed SpacerPCR Phản ứng nhân theo chuỗiRAPD Random Amplified Polymorphic DNArDNA Ribosomal deoxyribonucleic acidRFLP Restriction Fragment Length PolymorphismRNA Ribonucleic acidSSR Simple sequence repeatsSCAR Sequence Characterised Amplification Regions DANH MỤC HÌNH ẢNHHình 1.1: Sơ đồ vùng ITS của các gen rDNA vùng nhân và vị trí của các mồiITS........................................................................................................... 20Hình 3.1:DNA tổng số của 26 mẫu Óc chó ................................................ 29Hình 3.2: Phổ điện di sản phẩm PCR với cặp mồi ITS1/ITS8 trên 26 mẫu Ócchó (M1KB: Marker ladder 1Kb; H2O: Đ/c âm) ........................................ 30Hình 3.3: Một đoạn giản đồ có các đỉnh với 4 màu sắc khác nhau tương ứngvới 4 loại nucleotid của mẫu Óc chó HG02, HG05 và HG18 ...................... 32Hình 3.4: Kết quả gióng hàng, gióng cột 26 trình tự ITS1-5,8SrRNA-ITS2của 26 mẫu Óc chó và mẫu tham chiếu AF399876.1 .................................. 42Hình 3.5: Sơ đồ hình cây về mối quan hệ di truyền giữa 26 mẫu nghiên cứu vàmẫu tham chiếu AF399876.1..................................................................... 46 DANH MỤC BẢNGBảng 1.1: Các hợp chất của cây Óc chó Anh (Juglans regia) ........................ 9Bảng 2. 1: Danh sách 26 mẫu Óc chó ........................................................ 23Bảng 2. 2: Danh sách các mồi ITS (White và cộng sự, 1990) ...................... 25Bảng 2. 3: Thành phần phản ứng PCR ....................................................... 26Bảng 2. 4: Chu trình phản ứng PCR........................................................... 27Bảng 3. 1: Độ dài các trình tự thuộc 26 mẫu Óc chó nghiên cứu và mẫu thamchiếu AF399876.1 .................................................................................... 33Bảng 3. 2: Thành phần bốn loại nucleotide của 26 mẫu nghiên cứu và mẫutham chiếu AF399876.1 .......................................................................... ...