Luận văn Thạc sĩ Sinh học thực nghiệm: Nghiên cứu tạo dòng tế bào DR CALUX hướng tới ứng dụng sàng lọc dioxin hoặc các chất dẫn xuất dioxin

Luận văn "Nghiên cứu tạo dòng tế bào DR CALUX hướng tới ứng dụng sàng lọc dioxin hoặc các chất dẫn xuất dioxin" được hoàn thành với mục tiêu nhằm tạo được dòng tế bào DR CALUX mang cấu trúc DREs và gen phát quang đảm bảo độ nhạy cho việc sàng lọc/ phát hiện dioxin hoặc các dẫn xuất dioxin.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Luận văn Thạc sĩ Sinh học thực nghiệm: Nghiên cứu tạo dòng tế bào DR CALUX hướng tới ứng dụng sàng lọc dioxin hoặc các chất dẫn xuất dioxin BỘ GIÁO DỤC VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ ĐÀO TẠO VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ Nguyễn Thu TrangNGHIÊN CỨU TẠO DÒNG TẾ BÀO DR CALUX HƯỚNG TỚI ỨNGDỤNG SÀNG LỌC DIOXIN HOẶC CÁC CHẤT DẪN XUẤT DIOXIN LUẬN VĂN THẠC SĨ SINH HỌC THỰC NGHIỆM Hà Nội - 2023 iii MỤC LỤCLỜI CAM ĐOAN ............................................................................................. iLỜI CẢM ƠN .................................................................................................. iiDANH MỤC CÁC KÝ HIỆU, CHỮ VIẾT TẮT ......................................... vDANH MỤC CÁC BẢNG ............................................................................. viDANH MỤC CÁC HÌNH ............................................................................. viiMỞ ĐẦU .......................................................................................................... 1CHƯƠNG 1. TỔNG QUAN ........................................................................... 3 1.1. Dioxin và độc tính của dioxin .............................................................. 3 1.1.1. Dioxin và các chất dẫn xuất ............................................................. 3 1.1.2. Ảnh hưởng của dioxin và các chất dẫn xuất đến sức khỏe và môi trường ......................................................................................................... 5 1.1.3. Các hợp chất của dioxin trong chuỗi thực phẩm ............................. 8 1.1.4. Tình hình ô nhiễm và phơi nhiễm dioxin ở Việt Nam .................. 10 1.2. Các phương pháp phân tích và phát hiện dioxin và các chất dẫn xuất ………………………………………………………………………13 1.2.1. Phương pháp sắc ký khối phổ ........................................................ 13 1.2.2. Phương pháp miễn dịch ELISA..................................................... 14 1.2.3. Phương pháp khối phổ sử dụng lazer ............................................ 14 1.2.4. Phương pháp sử dụng tế bào sinh học ........................................... 15 1.3. Thụ thể AhR ....................................................................................... 17 1.4. Tình hình nghiên cứu ứng dụng CALUX trong phân tích dioxin và các chất dẫn xuất trên thế giới ..................................................................... 19 1.5. Tình hình nghiên cứu dioxin và CALUX ở Việt Nam ....................... 20CHƯƠNG 2. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU ......... 22 2.1. Đối tượng nghiên cứu ......................................................................... 22 2.1.1. Nguyên vật liệu: ............................................................................. 22 2.1.2. Thiết bị ........................................................................................... 22 2.2. Phương pháp nghiên cứu .................................................................... 23 2.2.1. Thiết kế tạo vector biểu hiện tạm thời mang cấu trúc DRE và gen phát quang GFP ....................................................................................... 23 2.2.2. Biến nạp vector tái tổ hợp pDRE-cDNA3.1(+) eGFP vào tế bào khả biến E. coli DH5α bằng phương pháp sốc nhiệt ............................... 24 2.2.3. Tách plasmid lượng lớn ................................................................. 24 iv 2.2.4. Chuyển plasmid tái tổ hợp vào dòng tế bào sử dụng Lipofectamin 3000 ......................................................................................................... 25 2.2.5. Xác định hiệu quả chuyển gen bằng phương pháp PCR và real- time PCR cho dòng tế bào biểu hiện luciferase. ...................................... 25 2.2.6. Chọn lọc dòng tế bào chuyển gen .................................................. 26 2.2.7. Đánh giá dòng tế bào chuyển gen với chất chuẩn dioxin/ chất dẫn xuất........................................................................................................... 27 2.2.8. Xác định ngưỡng phát hiện trong chất chuẩn ................................ 28 2.2.9. Xử lý số liệu ................................................................................... 28CHƯƠNG 3. KẾT QUẢ VÀ THẢO LUẬN ............................................... 29 3.1. Tạo dòng tế bào chuyển gen HepG2-Luc........................................... 29 3.1.1. Kết quả tách và tạo lượng lớn plasmid p4xDRE-Luc ................... 29 3.1.2. Kết quả đồng chuyển plasmi ...