Luận văn Thạc sĩ Sinh học thực nghiệm: Sử dụng phương pháp chuyển gene làm tăng khả năng tổng hợp nhựa sinh học ở chủng vi khuẩn Bacillus megaterium

Luận văn Thạc sĩ Sinh học thực nghiệm "Sử dụng phương pháp chuyển gene làm tăng khả năng tổng hợp nhựa sinh học ở chủng vi khuẩn Bacillus megaterium" với mục tiêu tạo được chủng vi khuẩn Bacillus megaterium có khả năng tổng hợp PHA cao bằng phương pháp chuyển gen. Mời các bạn cùng tham khảo!
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Luận văn Thạc sĩ Sinh học thực nghiệm: Sử dụng phương pháp chuyển gene làm tăng khả năng tổng hợp nhựa sinh học ở chủng vi khuẩn Bacillus megateriumBỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ ----------------------------- Nguyễn Trọng LinhSỬ DỤNG PHƯƠNG PHÁP CHUYỂN GENE LÀM TĂNG KHẢ NĂNG TỔNG HỢP NHỰA SINH HỌC Ở CHỦNG VI KHUẨN Bacillus megaterium LUẬN VĂN THẠC SĨ: SINH HỌC THỰC NGHIỆM Hà Nội - 2022BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO VIỆN HÀN LÂM KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ VIỆT NAM HỌC VIỆN KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ ----------------------------- Nguyễn Trọng Linh SỬ DỤNG PHƯƠNG PHÁP CHUYỂN GENE LÀMTĂNG KHẢ NĂNG TỔNG HỢP NHỰA SINH HỌC Ở CHỦNG VI KHUẨN Bacillus megaterium Chuyên ngành: Sinh học thực nghiệm Mã số: 8420114 LUẬN VĂN THẠC SĨ NGÀNH SINH HỌC THỰC NGHIỆM NGƯỜI HƯỚNG DẪN KHOA HỌC: 1. TS. Lã Thị Huyền 2. TS. Nguyễn Thị Đà Hà Nội – 2022 i LỜI CAM ĐOAN Tôi xin cam đoan đề tài: “Sử dụng phương pháp chuyển gene làmtăng khả năng tổng hợp nhựa sinh học ở chủng vi khuẩn Bacillusmegaterium” là do tôi trực tiếp thực hiện dưới sự hướng dẫn của TS. Lã ThịHuyền và TS. Nguyễn Thị Đà. Số liệu và kết quả nghiên cứu trong luận vănhoàn toàn trung thực, chính xác. Mọi thông tin nội dung tham khảo trong luậnvăn đều được trích dẫn rõ ràng tên công trình, tên tác giả, địa điểm, thời gianvà nguồn gốc. Tôi xin hoàn toàn chịu trách nhiệm về lời cam đoan này! Hà Nội, ngày tháng năm 2022 Học viên Nguyễn Trọng Linh ii LỜI CẢM ƠN Sau quá trình học tập và nghiên cứu, để hoàn thành luận văn này, trướchết tôi xin gửi lời cảm ơn chân thành và sâu sắc nhất tới TS. Lã Thị Huyền –trưởng phòng Công nghệ Tế bào Động vật và TS. Nguyễn Thị Đà – cán bộphòng Công nghệ Tế bào Động vật, Viện Công nghệ sinh học, Viện Hàn lâmKhoa học và Công nghệ Việt Nam, là những người thầy đã hướng dẫn, tận tìnhchỉ bảo và truyền đạt những kinh nghiệm quý báu cho tôi trong suốt thời gianthực hiện luận văn này. Tôi cũng xin bày tỏ lòng biết ơn chân thành đến các cán bộ Phòng Côngnghệ Tế bào Động vật, Viện Công nghệ sinh học, Viện Hàn lâm Khoa học vàCông nghệ Việt Nam đã hướng dẫn, nhiệt thành giúp đỡ tôi trong các thí nghiệmvà cũng cho tôi những kinh nghiệm quý báu trong công tác nghiên cứu Sinhhọc. Luận văn được thực hiện bằng kinh phí của Đề tài “Nghiên cứu tạo chếphẩm sinh học tái tổ hợp sinh tổng hợp bioplastic từ phụ phẩm chế biến thủysản” do TS. Nguyễn Thị Đà làm chủ nhiệm thuộc Đề án phát triển và ứng dụngcông nghệ sinh học trong lĩnh vực công nghiệp chế biến của Bộ Công thương,năm 2018-2020. Tôi xin gửi lời cảm ơn tới Ban giám đốc, các thầy, cô giáo thuộc KhoaCông nghệ sinh học và Phòng Đào tạo, Quản lý Khoa học và Hợp tác quốc tếcủa Học viện Khoa học và Công nghệ - Viện Hàn lâm Khoa học và công nghệViệt Nam đã tạo mọi điều kiện, hướng dẫn cho tôi rất nhiều kiến thức trong quátrình học tập tại Học viện. Xin cảm ơn gia đình và bạn bè đã cổ vũ khích lệ tôi trong học tập. Tôi xin chân thành cảm ơn! Học viên Nguyễn Trọng Linh iii DANH MỤC CHỮ VIẾT TẮTB. megaterium Bacillus megateriumDNA Deoxyribonucleic acid Axit Deoxyribonucleicg/l Gam/lítMcl Medium chain length Chuỗi có độ dài trung bìnhOD Optical density Mật độ quangPCR Polymerase chain reaction Phản ứng kéo dài chuỗiPHA Polyhydroxyalkanoate PolyhydroxyalkanoatPHB Polyhydroxybutylrate PolyhydroxybutylratRNA Ribonucleic acid Axit ribonucleicScl Short chain length Chuỗi có độ dài ngắnTAE Tris- acetate-EDTALcl long-chain-length chiều dài chuỗi dàic-PHB complex PHB[P(3HB-co- poly(3-hydroxybutyrate-co-3HHx) 3-hydroxyhexanoate)[P(3HB-co- poly(3-hydroxybutyrate-co-4HB) 4-hydroxybutyrate)MCL medium chain length chiều dài trung bìnhTCA axit tricarboxylic iv DANH MỤC BẢNG Bảng 1.1. Nhóm chức R và một số loại PHA ............................................... 7 Bảng 1. 2. Các dưới đơn vị synthase tham gia tổng hợp PHA ở các loài khácnhau ................................................................................................................. 10 Bảng 2.1: Các chủng nghiên cứu ................................................................ 19 Bảng 2. 2: Các chất bổ sung sử dụng cho môi trường chọn lọc ................. 21 Bảng 2. 3: Các primer sử dụng ................................................................... 23 Bảng 2.4. Các phản ứng cắt và gắn bằng enzyme giới hạn……………….23 Bảng 3. 1. Bảng ký hiệu và đặc điểm của các chủng tải tổ hợp tạo thành . 36 Bảng 3. 2. Ảnh hưởng của việc tăng cường biểu hiện phaC lên khả năng sinhtrưởng và sinh tổng hợp PHA của chủng B. megaterium DV01 .................... 36 Bảng 3. 3. Ảnh hưởng của n ...