NGHIÊN CỨU BIỂU HIỆN GEN MÃ HÓA P24 CỦA HIV-1 PHÂN TYPE AE CỦA BỆNH NHÂN Ở HÀ NỘI EXPRESSION OF GENE ENCODING P24

HIV-1 CRF01_AE là phân type chiếm tỷ lệ lây nhiễm cao tại Việt Nam và các nước Đông Nam Á. Sự xuất hiện của các chủng kháng thuốc, văcxin chưa thực sự có hiệu lực và các tệ nạn xã hội đang góp phần làm cho đại dịch HIV lan tràn với tốc độ chóng mặt.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
NGHIÊN CỨU BIỂU HIỆN GEN MÃ HÓA P24 CỦA HIV-1 PHÂN TYPE AE CỦA BỆNH NHÂN Ở HÀ NỘI EXPRESSION OF GENE ENCODING P24 Tuyển tập Báo cáo Hội nghị Sinh viên Nghiên cứu Khoa học lần thứ 7 Đại học Đà Nẵng năm 2010 NGHIÊN CỨU BIỂU HIỆN GEN MÃ HÓA P24 CỦA HIV-1 PHÂN TYPE AE CỦA BỆNH NHÂN Ở HÀ NỘI EXPRESSION OF GENE ENCODING P24 PROTEIN FROM HIV-1 SUBTYPE CRF_01AE OF PATIEN IN HANOI SVTH: Phạm Thị Kim Thảo Lớp 05SH, Khoa Hoá, Trường Đại học Bách Khoa GVHD: PGS.TS. Đinh Duy Kháng Phòng Vi sinh vật phân tử, Viện công nghệ sinh học, Viện khoa học Việt Nam TÓM TẮT HIV-1 CRF01_AE là phân type chiếm tỷ lệ lây nhiễm cao tại Việt Nam và các nước ĐôngNam Á. Sự xuất hiện của các chủng kháng thuốc, văcxin chưa thực sự có hiệu lực và các tệ nạnxã hội đang góp phần làm cho đại dịch HIV lan tràn với tốc độ chóng mặt. Vì vậy việc chẩn đoánsớm nhiễm HIV là biện pháp tốt nhất để ngăn chặn sự lây nhiễm trong cộng đồng và đảm bảo antoàn trong công tác truyền máu. Hiện nay trên thị trường có nhiều kit chẩn đoán HIV dựa trên cơsở các protein tái tổ hợp gp120, gp41 và p24 nhưng giá thành rất cao và chưa phù hợp với các phântýp HIV đang lưu hành ở Việt Nam. Sự phát hiện protein p24 của HIV-1 giúp chẩn đoán sớm nhiễmHIV, theo dõi diễn tiến của bệnh và đánh giá hiệu quả của liệu pháp kháng retrovirus. Trong nghiên cứu này, chúng tôi đã biểu hiện thành công protein tái tổ hợp p24 trong tế TM 2+bào E.coli BL21 star DE3, tối ưu hóa các điều kiện biểu hiện và tinh sạch bằng cột Ni -Resin đểtạo kit chẩn đoán. Protein tái tổ hợp thu được phản ứng đặc hiệu với huyết thanh của bệnh nhânnhiễm HIV bằng phương pháp Western Blot. ABSTRACT HIV-1 CRF01_AE appears to be the cause of high proportion of infections in Viet Nam andSoutheast Asia. Emergence of multidrug resistant strains, non-availability of an effective vaccineand inappropriate social behaviors of populations have caused the HIV pandemic cross astoundingproportions. So early diagnosis of HIV infection is perhaps the best way to stop its spr ead amongpopulations and ensuring safety of blood obtained from donors. Now Diagnostic kit is verymultiform but they are high cost and may be not suitable for HIV-1 strain circulating in Vietnam. Fordevelopment of the kits, the three recombinant proteins gp120, gp41 and p24 have been used.HIV-1 p24 detection provides a means to aid the early diagnosis of HIV -1 infection, track theprogression of disease and assess the efficacy of antiretroviral therapy. In the present study, we successfully expressed recombinant p24 protein in E.coli BL21 TM 2+star DE3, optimized expressing conditions and purified by Ni -Resin column to produce HIV-1diagnotic kit. Purified recombinant p24 protein specifically responded with the serum of HIV-1infected patients by Western Blot analysis.1. Mở đầu Sự gia tăng nhanh chóng về số người nhiễm HIV trên toàn thế giới với khoảng 20triệu người chết vì AIDS mỗi năm, 33 triệu người mang HIV và hàng triệu ca nhiễm mớimỗi ngày (UNAIDS, 2009) vẫn đang là mối hiểm họa đối với toàn nhân loại. Dịch bệnhlàm gia tăng sự nghèo đói, tác động không nhỏ đến tình hình kinh tế, xã hội và chính trị đốivới nhiều quốc gia trên thế giới trong đó có Việt Nam. Việc nghiên cứu thuốc và văcxinphòng chống HIV là vấn đề được cả thế giới quan tâm, tuy nhiên hiện vẫn chưa nhận được 371 Tuyển tập Báo cáo Hội nghị Sinh viên Nghiên cứu Khoa học lần thứ 7 Đại học Đà Nẵng năm 2010các kết quả như mong đợi. Do vậy việc chẩn đoán sớm các trường hợp nhiễm HIV là hếtsức quan trọng, góp phần ngăn chặn các hành vi nguy cơ làm lan truyền HIV/AIDS trongcộng đồng. Các kit chẩn đoán HIV rất đa dạng và phong phú, được nhiều hãng nghiên cứuvà sản xuất. Tuy nhiên, giá thành vẫn còn cao và chưa hẳn đã phù hợp với các phân týpHIV đang lưu hành ở Việt Nam. HIV-1 là type lưu hành chủ yếu và gây đại dịch trên toàn cầu. HIV-1 gồm bốn phânnhóm chính M, N, O, P, trong đó Nhóm M chiếm 90% các trường hợp nhiễm HIV-1. Có ítnhất là 9 phân type di truyền, gồm A, B, C, D, F, G, H, J, K và các thể tái tổ hợp (CRFs).Có khoảng 30 thể tái tổ hợp đã được phát hiện mới. Các phân type này phân bố theo từngvùng địa lý khác nhau. Hiện nay, type CRF01_AE (tái tổ hợp vật chất di truyền giữa typ Avà E) là phân typ gây đại dịch ở các nước Đông Nam Á và cũng là phân nhóm chiếm đến97% phân typ HIV-1 lưu hành tại Việt Nam. Việc chế tạo các kit chẩn đoán đòi hỏi phải dựa trên sự lưu hành phân typ trongnước thì mới đảm bảo được tính chính xác và độ nhạy cao, đồng thời hạ giá thành sảnphẩm. Các bộ Kit này dựa trên cơ sở các protein gp120, gp41 và p24 tái tổ hợp. Đáng lưu ýlà p24, là protein nucleocapsit hay còn gọi là protein lõi, có vai trò quan trọng ở các giaiđoạn khác nhau trong chu trình sống của HIV. Trước tiên p24 tham gia vào quá trình cởiáo sau khi virus xâm nhập, nó ảnh hưởng đến mối liên kết giữa RNA và DNA trong giaiđoạn đầu của quá trình nhiễm, hoạt động như là yếu tố hỗ trợ (cofactor) cho enzym phiênmã ngược, làm nhiệm vụ nhận biết các dấu hiệu đóng gói, trung gian cho sự kết hợp giữahai phân tử RNA khác nhau để hình thành genom của hạt virion HIV-1 mới. Trong chẩn đoán, p24 là kháng nguyên đặc hiệu của HIV. P24 xuất hiện sớm nhất,2 – 3 tuần sau nhiễm HIV và duy trì trong suốt giai đoạn cấp tính của nhiễm trùng HIV.Sau đó, kháng nguyên p24 giảm dần đồng thời có sự xuất hiện kháng thể p24. Điều nàybáo hiệu giai đoạn không triệu chứng của nhiễm HIV. Vài tháng cho tới vài năm sau nhiễmtr ...