Nghiên cứu đánh dấu kháng thể đơn dòng bevacizumab với đồng vị phóng xạ Tc-99m dùng trong chụp hình các khối ung thư

Bài viết Nghiên cứu đánh dấu kháng thể đơn dòng bevacizumab với đồng vị phóng xạ Tc-99m dùng trong chụp hình các khối ung thư mô tả quy trình đánh dấu đồng vị phóng xạ với kháng thể đơn dòng bevacizumab để điều chế dược chất phóng xạ 99mTc-bevacizumab sử dụng trong chụp xạ hình các khối ung thư.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Nghiên cứu đánh dấu kháng thể đơn dòng bevacizumab với đồng vị phóng xạ Tc-99m dùng trong chụp hình các khối ung thưTuyển tập báo cáo Hội nghị Khoa học và Công nghệ hạt nhân toàn quốc lần thứ 14Proceedings of Vietnam conference on nuclear science and technology VINANST-14 NGHIÊN CỨU ĐÁNH DẤU KHÁNG THỂ ĐƠN DÒNG BEVACIZUMAB VỚI ĐỒNG VỊ PHÓNG XẠ Tc-99m DÙNG TRONG CHỤP HÌNH CÁC KHỐI UNG THƯ STUDY ON LABELLING OF BEVACIZUMAB ANTIBODY WITH 99MTC FOR THE RADIOIMMUNOSCINTIGRAPHY OF CANCERS GIANG NGUYEN THI KHANH, THU NGUYEN THI, NGOC NGUYEN THI, CUONG BUI VAN, BINH NGUYEN THANH, QUANG DANG HO HONG, NHAN NGUYEN THANH Nuclear Research of Institute, 01 Nguyen Tu Luc Street, 8 district, Da Lat City Email: khanhgiang55@yahoo.comTóm tắt: Báo cáo này mô tả quy trình đánh dấu đồng vị phóng xạ với kháng thể đơn dòng bevacizumab để điều chế dượcchất phóng xạ 99mTc-bevacizumab sử dụng trong chụp xạ hình các khối ung thư. Bevacizumab là kháng thể đơn dòng nhânhóa tái tổ hợp kháng yếu tố tăng sinh mạch (VEGF) nhờ có tác dụng trong việc ngăn chặn quá trình tăng sinh mạch. Khángthể bevacizumab được gắn với đồng vị phóng xạ 99mTc bằng phương pháp đánh dấu trực tiếp dùng thiếc (II) clorua làm chấtkhử. Các khảo sát tối ưu hóa được tiến hành như pH, nhiệt độ, thời gian, tỷ lệ các chất tham gia phản ứng. Phức miễn dịchphóng xạ được kiểm tra hiệu suất đánh dấu, độ tinh khiết hoá phóng xạ, độ ổn định. Kết quả cho thấy hiệu suất đánh dấuđiều chế 99mTc-bevacizumab đạt hơn 95%, độ tinh khiết hóa phóng xạ trên 98%. Thuốc đạt các chỉ tiêu về độ ổn định trong24 giờ nghiên cứu. Phức hợp 99mTc-bevacizumab bước đầu đạt các yêu cầu dược chất phóng xạ có thể dùng cho các nghiêncứu tiền lâm sàng.Từ khoá: Kháng thể đơn dòng bevacizumab, đồng vị phóng xạ Tc-99m, chụp hình miễn dịch phóng xạ.Abstract: This paper describes a method for the radiolabeling of monoclonal antibody bevacizumab in the productionof 99mTc-bevacizumab radiopharmaceutical addresses in the radioimmunoscintigraphy of cancer. Bevacizumab isa humanized monoclonal and recombinant antibody that is an anti-vascular endothelial growth factor (VEGF) and iseffective in block the angiogenesis. Bevacizumab was labeled with radioisotope 99mTc by direct method using stannouschloride as reductant. The labeling optimization was conducted such as pH, temperature, time, molar ratio. Theradioimmunoconjugates were tested for radiolabeling yield, radiochemical purity and stability. The results of the studyshowed that radiolabeling yields were more than 95%, radiochemical purity reached 98% and stability for 24 hours. Theconjugation of 99mTc-bevacizumab met the required criteria of radiopharmaceutical for continuing preclinical evaluations.Keywords: Monoclonal antibody bevacizumab, radioisotope 99mTc, radioimmunoscintigraphy.1. MỞ ĐẦU Sự tăng sinh mạch là quá trình tạo mạch mới từ những mạch đã có trước đó, đây là một cơ chế đảmbảo cho sự tồn tại, phát triển và làm lành vết thương, tuy nhiên trong trường hợp bất thường, sự tăng sinhmạch lại là yếu tố có liên quan đến một loạt các rối loạn bao gồm viêm, ung thư. Yếu tố tăng trưởng nội mômạch máu (VEGF) được nghiên cứu rộng rãi nhất trong các họ liên quan tới quá trình tăng sinh mạch. Đâyđược xem là mục tiêu quan trọng trong các nghiên cứu thuốc điều trị ung thư [1, 2]. Kháng thể đơn dòngbevacizumab là một trong số thuốc kháng thể được FDA cấp phép sớm nhất cho sử dụng trong điều trị ungthư do cơ chế gắn với yếu tố tăng sinh mạch, ức chế sự di căn khối u [3]. Bevacizumab là kháng thể tái tổhợp ở người (đuôi -umab) được sản xuất dựa trên công nghệ DNA sử dụng dòng tế bào CHO, bao gồm 214amino acid và trọng lượng phân tử khoảng 149.000 dalton. Ngoài việc sử dụng điều trị điều trị các bệnhung thư như ung thư đại tràng, ung thư phổi, u nguyên bào thần kinh và ung thư biểu mô tế bào thận,bevacizumab còn được ứng dụng nhiều trong các nghiên cứu y, sinh học, trong đó nổi trội là nghiên cứuđánh dấu với đồng vị phóng xạ Tc-99m để chụp hình miễn dịch phóng xạ chẩn đoán các khối ung thư do cóbiểu hiện yếu tố VEGF [1, 3]. 99mTc là đồng vị phóng xạ với nhiều yếu tố ưu việt đã được sử dụng nhiềunăm tại các khoa y học hạt nhân do phát bức xạ các tia gama có năng lượng 140 keV và chu kỳ bán rã là6,01 giờ, thích hợp để xạ hình chẩn đoán [4]. Do vậy, nghiên cứu điều chế dược chất phóng xạbevacizumab đánh dấu 99mTc là hướng đi có tiềm năng được sử dụng để chẩn đoán sớm các ung thư đặcbằng kỹ thuật ghi hình miễn dịch phóng xạ thông qua chụp xạ hình SPECT.2. NỘI DUNG2.1. Đối tượng và phương phápa/ Đối tượng nghiên cứu 325Tiểu ban D1: Ứng dụng kỹ thuật hạt nhân trong y tếSection D1: Application of nuclear techniques in healthcare Kháng thể đơn dòng bevacizumab (rhuMAb- VEGF, Avastin, Genen-tech, San Franciso, Calif.,USA) nồng độ 25 mg/ml. Đồng vị phóng xạ 99mTc chiết tách từ máy phát 99Mo/99mTc, dạng Na99mTcO4-,nồng độ phóng xạ 150-200 mCi/ml, Polatom. Giấy sắc ký bản mỏng TLC-SG silicaL gel 60 F254 25x25.Các hoá chất SnCl2.2H2O, NaH2PO4.2H2O, Na2HPO4.H2O hãng Merck. Thiết bị sử dụng là máy phóng xạtự chụp Cyclone PlusPhosphor Scanner, B431200, PerkinElmer, máy quét phóng xạ Bioscan.b/ Phương pháp nghiên cứu Phương pháp đánh dấu kháng thể bevacizumab với đồng vị phóng xạ 99mTc: Kháng thể được đánhdấu với 99mTc bằng phương pháp đánh dấu trực tiếp dùng thiếc (Sn, II) clorua làm chất khử, khử cầudisulfide (S-S) trên phân tử kháng thể về dạng sulfhidryl (SH), để dễ dàng tạo phức với 99mTc trong môitrường đệm phosphat 0,5M, pH 7,4 [5]. Để tối ưu hoá qui trình đánh dấu, các nghiên cứu khảo sát đượctiến hành bao gồm: Khảo sát hàm lượng clorua thiếc:Cho vào các ống đánh dấu 100 g kháng thể bevacizumab, hoạt độ99m ...