Nghiên cứu phương pháp động học huỳnh quang xác định đồng thời tyrosin và tryptophan dựa trên phản ứng với phức Rutheni(II) polypyridin

Bài viết nghiên cứu phương pháp động học huỳnh quang để định lượng đồng thời amino axit tyrosin và tryptophan dựa trên phản ứng với phức rutheni(II) polypyridin. Phương pháp phân tích này có ưu điểm là đơn giản, chính xác và tiết kiệm thời gian. Phức chất nhạy sáng rutheni(II) polypyridin được dùng làm đầu dò huỳnh quang xác định tyrosin và tryptophan do khả năng tương tác chọn lọc của nó với amino axit thông qua phản ứng cho – nhận electron (phản ứng quang oxi hóa – khử) [4,12,13].
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Nghiên cứu phương pháp động học huỳnh quang xác định đồng thời tyrosin và tryptophan dựa trên phản ứng với phức Rutheni(II) polypyridin Tạp chí phân tích Hóa, Lý và Sinh học - Tập 22, Số 3/2017 NGHIÊN CỨU PHƯƠNG PHÁP ĐỘNG HỌC HUỲNH QUANG XÁC ĐỊNH ĐỒNG THỜI TYROSIN VÀ TRYPTOPHAN DỰA TRÊN PHẢN ỨNG VỚI PHỨC RUTHENI(II) POLYPYRIDIN Đến tòa soạn 21-3-2017 Nguyễn Xuân Trường Viện Kỹ thuật Hóa học, Trường Đại học Bách khoa Hà Nội Phạm Thị Thủy, Nguyễn Thị Ánh Hường Khoa Hóa học, Trường Đại học Khoa học tự nhiên, ĐHQG Hà Nội SUMMARY SIMULTANEOUS DETERMINATION OF TYROSINE AND TRYPTOPHAN BY FLUORESCENCE KINETICS OF RUTHENIUM(II) POLYPYRIDYL COMPLEX A fluorescence-kinetic method has been developed and validated for simultaneous dertemination of tyrosine (Tyr) and tryptophan (Trp) in protein based on their photoredox reactions with rutheni(II) polypyridine complexes. The proposed method is simple and accurate with a recovery of 99 – 104 %. The detection limit is 2.91  10- 5 M with a RSD < 3 % (n=6). The results of Tyr and Trp analyses in protein samples using the proposed method and HPLC are identical. Therefore, the fluorescence- kinetic method is applicable to determine Tyr and Trp. 1. MỞ ĐẦU Tyrosin là một trong 12 amino axit Tryptophan là một trong 8 amino axit không thiết yếu nhưng rất cần thiết cho thiết yếu. Nó là tiền chất của serotonin, cơ thể. Nó là nguyên liệu cho quá trình một chất dẫn truyền thần kinh trong tổng hợp một số chất dẫn truyền thần não, giúp xử lý thông tin khi ngủ, có vai kinh (adrenalin, dopamin,…) trong não trò điều hòa giấc ngủ, giúp cơ thể có bộ, giúp cho quá trình truyền thông tin cảm giác thư giãn. Đồng thời, liên lạc giữa các tế bào thần kinh tác tryptophan được gan chuyển hóa thành động đến tâm trạng của con người niacin (vitamin B3) để tạo thành các [1,2,6,7]. Đồng thời Tyrosin ảnh hưởng coenzym tham gia vào quá trình giải đến các hoạt động của tuyến thượng phóng năng lượng từ thực phẩm [1,2]. thận, tuyến giáp và tuyến yên, giữ 106 nhiệm vụ sản xuất và điều chỉnh các nội albumin từ huyết thành bò (BSA), tiết tố. Tryptophan và tyrosin thường NaOH, NaCl (Sigma-Aldrich). Phức được bổ sung vào cơ thể từ những loại rutheni(II) polypyridin gồm: thực phẩm như sữa, phô mai, trứng, đậu Ru[(bpy)3]Cl2 (Sigma-Aldrich) và nành [2]… [Ru(dpq)2bxbg]Cl2 [4]; với bpy = Định lượng axit amin rất quan trọng bipyridin, dpq = dipyrido[3,2-d:2,3- trong các nghiên cứu phân tích đánh giá f]quinoxalin, bxbg = thành phần dinh dưỡng của thực phẩm. bis(oxylene)bipyridin glycoluril. Định lượng một số axit amin như Thiết bị: Máy quang phổ UV-Vis Tyrosin, Tryptophan,… cũng rất quan Agilent 8453. Hệ thiết bị huỳnh quang trọng trong y sinh học khi nghiên cứu phân tử phân giải thời gian – Trường ảnh hưởng của hàm lượng các tiền chất Đại học Bách Khoa Hà Nội. tham gia trong quá trình sinh tổng hợp và trong quá trình trao đổi chất ở cơ thể sống. Tryptophan và tyrosin có thể được xác định bằng phương pháp quang phổ đo quang [8,9] và phổ biến hơn là phương pháp sắc ký lỏng hiệu năng cao với detectơ huỳnh quang (HPLC/FLD) [3,10,11]. Tuy nhiên, mỗi phương pháp đều có những hạn chế riêng. Chẳng hạn như với HPLC/FLD, thường phải tạo dẫn xuất axit amin để tăng độ nhạy của phép phân tích. Việc tạo dẫn xuất phải trải qua nhiều bước để cho hợp chất huỳnh quang ổn định, tách tốt và có độ [Ru(bpy)3]2+ lặp lại cao. Nói chung, phương pháp truyền thống trên có nhược điểm là tốn thời gian để chuẩn bị mẫu và đòi hỏi trang thiết bị đắt tiền. Trong bài báo này, chúng tôi nghiên cứu phương pháp động học huỳnh quang để định lượng đồng thời amino axit tyrosin và tryptophan dựa trên phản ứng với phức rutheni(II) polypyridin. Phương pháp phân tích này có ưu điểm là đơn giản, chính xác và tiết kiệm thời gian. Phức chất nhạy sáng rutheni(II) polypyridin được dùng làm đầu dò huỳnh quang xác định tyrosin và [Ru(dpq)2(bxbg)]2+ tryptophan do khả năng tương tác chọn lọc của nó với amino axit thông qua phản ứng cho – nhận electron (phản ứng quang oxi hóa – khử) [4,12,13]. 2. THỰC NGHIỆM 2.1. Hóa chất và thiết bị Hóa chất: tyrosin, tryptophan, casein, Tyrosin 107  Hằng số tốc độ phản ứng quang oxi ...