Nghiên cứu trình tự các Gen tiêu biểu và phát triển kỹ thuật Multilplex PCR mới chẩn đoán Bacillus Anthracis gây bệnh ở Việt Nam

Nghiên cứu phát triển các kỹ thuật dựa trên PCR xác định nhanh tác nhân khủng bố sinh học, đặc biệt là Bacillus anthracis đang được quan tâm. Trong bài viết này, gen vrrA trên nhiễm sầc thể, gen độc lực pagA,cya, lef (plasmid pX01), capA, capB, capC (plasmid pX02) từ các chủng B. anthracis Việt Nam được tách dòng và giải trình tự hoàn chỉnh.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Nghiên cứu trình tự các Gen tiêu biểu và phát triển kỹ thuật Multilplex PCR mới chẩn đoán Bacillus Anthracis gây bệnh ở Việt Nam NGHIÊN CỨU TRÌNH Tự CÁC GEN TIÊU BIỂU VÀ PHÁT TRIÉN KỸ THUẬT MULTIPLEX PCR MỚI CHẦN ĐOÁN BACILLUS ANTHRACIS GÂY BỆNH Ở VIỆT NAM ThS. Đinh Thị Thu Hằng, ThS. Nguyên Thanh Việt T - , í ~ *1^* IP A V n . ỉ Ị Ị M A w . jS m , / ì t u n y ta m A rt* i f is ờ ỉiiti r Lsurvx* risjK* V /C Í I W u c m y ThS. Nguyễn Văn An (B M K V isinh y học, Bệnh viện Q uâtiy 1Ó3, Học viện Quân ý) Hướng dẫn: PGS. TS. Nguyễn Thái sớ n BMK Vi sinh y học, Bệnh viện Quân y 103, Học viện Quân y TÓM TẮT Nghiên cứu phát triển các kỹ thuật dựa trên PCR xác định nhanh tác nhân khủng bố sinh học, đặc biệt làBacillus anthracis đang được quan tẩm. Trong công trình này, gen vrrA trên nhiễm sầc thể, gen độc lực pagA,cya, lef (plasmid pX01), capA, capB, capC (plasmid pX02) từ các chủng B. anthracis Việt Nam được tách dòngvà giải trình tự hoàn chỉnh. Đã xác đính được 1 đột biến thêm nucleotide A trên gen vrrA, 1 đột biến đồng nghĩa, 2đột biến sai nghĩa trên gen pagA và 1 đột biến đồng nghĩa trên gen cya. Đặc biệt, 1 đột biến sai nghĩa lần đấu tiênđược phát hiện trên gen capA chủng B. anthracis Ba1. Cốc gen còn lại tương đồng 100% so với chủng thamchiếu B. anthracis Vollum-USA. Đồng thời, một phản ứng PCR đa mồi chứa chứng nội tại được thiết kế để pháthiện chính xác B. anthracis. Đày là công bố đấy đủ chi tiết đầu tiên trong nước về trình tự các gen tiêu biểu của B.anthracis cũng như phát triển một cõng cụ hữu Ịch cho phép chẩn đoán nhanh B. anthracis gây bệnh. Từ khóa: Chứng nội tại, độc lực, PCR đa mồi, vi khuẩn than, Việt Nam, SUMMARY COMPLETE SEQUENCE ANALYSIS OF THE TYPICAL GENES OF BACILLUS ANTHRACIS ANDDEVELOPMENT OF A NOVEL MULTIPLEX PCR FOR VIRULENT BACILLUS ANTHRACIS DETECTION INVIETNAM Dinh Thi Thu Hang, Nguyen Thanh Viet Bio-medical and Pharmaceutical Applied Research Centre, Vietnam Military Medical University Nguyen Van An, 103 Hospital, Vietnam Military Medical University Development o f PCR-based techniques for rapid and accurate identification o f bioterrorism agents, especiallyBacillus anthracis is interest in recent years. In this study, the entire sequences o f the vrrA gene (chromosome),pagA, cya, lef genes (virulence plasmid pX01) and capA, capB, capC genes (virulence plasmid pX02) o f ten B.anthracis strains Ba1-10 isolated in Northern Vietnam were cloned and analyzed. One insertion mutation atnucleotide position 346 A in the vrrA gene (10 strains), one synonymous and two missense mutations in the pagAgene and one synonymous mutation in the cya gene (Ba3, 4). Interestingly, one missense mutation was firstidentified in the capA gene o f B. anthracis strain Ba1. The remaining genes had 100% similarity in comparison tothe B. anthracis references. In addition, a multiplex PCR assay with primer pairs vrrAF1/R1, pagAF1/R1,capAF1/R1, including recombinant internal amplification control was developed for detection o f virulent B.anthracis strains. This is the first report in Vietnam that investigates the full-length o f the vrrA gene and sometypical genes on virvlence plasmids pX 01 and pX 02 as well as develops a useful molecular tool for rapiddetection o f virvlent B. anthracis in Vietnam. Keywords: Bacillus anthracis, internal amplification control, multiplex PCR, virulent, Vietnam. ĐẶT VÁN ĐỀ VÀ MỤC TIÊU Bởi tính chất cếp tính, khả năng gây chết người Bacillus anthracỉs, tác nhân gây bệnh than được qua đường hô hấp kết hợp vởi khả năng phục hồi củatim thấy ờ nhiều quốc gia trên thế giới. Khả năng gây bào tử sau khi tiếp xúc với nhiệt và phóng xạ khiến B.bệnh của B, anthracis chủ yếu nhờ sự có mặt của các anthracis được sử dụng là vũ khí sinh học. ở Việtgẽn nằm trên hai plasmid !ớn là pX01 (182 kb) và Nam, bệnh than vẫn còn xuất hiện rải rác ở các tĩnhpX02 {95 kb) - được gọi íà các plasmid độc lực. miền núi phía Bắc như Sơn La, Điện Biên, Lai Châu,...Plasmid pX01 chứa các gen sảrì xuất độc tố, trong khi [1]. Gần đây (10/2014) ờ Mèo Vạc, Hà Giang đã ghipX02 chứa các gen liên quan đển quá trình tổng hợp nhận 9 ca nhiêm bệnh than do ăn thịt gia súc chết vìvò poiy-D-g!utamic acid [9]. Chì những chùng có đầy bệnh than. Sự xuất hiện trở lại cùa B. anthracỉs mộ ...