Nuôi cấy tăng sinh tế bào TCD8 ở bệnh nhân ung thư phổi

Mục đích của nghiên cứu là hoàn thiện quy trình tách chiết, nuôi cấy và hoạt hóa tế bào TCD8 từ bệnh nhân ung thư phổi. 10 bệnh nhân ung thư phổi được lựa chọn vào nghiên cứu, mỗi bệnh nhân được thu thập 10 ml máu chống đông trong heparin, tiến hành tách chiết, nuôi cấy, hoạt hóa và đánh giá.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Nuôi cấy tăng sinh tế bào TCD8 ở bệnh nhân ung thư phổiTẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌCNUÔI CẤY TĂNG SINH TẾ BÀO TCD8Ở BỆNH NHÂN UNG THƯ PHỔIVũ Văn Quý, Trần Huy Thịnh, Nguyễn Quý Linh,Nguyễn Thanh Bình, Trần Vân Khánh, Tạ Thành VănTrường Đại học Y Hà NộiLiệu pháp miễn dịch sử dụng tế bào lympho tự thân là một trong những liệu pháp điều trị kết hợp an toànvà khá hiệu quả cho nhiều loại ung thư hiện nay, trong đó có ung thư phổi. Mục đích của nghiên cứu là hoànthiện quy trình tách chiết, nuôi cấy và hoạt hóa tế bào TCD8 từ bệnh nhân ung thư phổi. 10 bệnh nhân ungthư phổi được lựa chọn vào nghiên cứu, mỗi bệnh nhân được thu thập 10 ml máu chống đông trong heparin,tiến hành tách chiết, nuôi cấy, hoạt hóa và đánh giá. Kết quả nghiên cứu cho thấy số lượng tế bào bạch cầuđơn nhân tách được từ 10ml máu ngoại vi của bệnh nhân ung thư phổi trung bình là (5,13 ± 2,97) x 106 tếbào. Số lượng tế bào trung bình thu được sau nuôi cấy là (3,9 ± 1,45) x 109 tế bào, tỷ lệ sống trung bình đạt90,37% ± 1,88%. Trong đó, tỷ lệ tế bào TCD4 chiếm 22,1% ± 9,59 %, TCD8 chiếm 66,11% ± 11,02%.Không phát hiện thấy sự có mặt của vi khuẩn, mycoplasma và nội độc tố trong môi trường sau nuôi cấy.Từ khóa: Liệu pháp tế bào miễn dịch, tế bào TCD8, ung thư phổiI. ĐẶT VẤN ĐỀđặc biệt rồi truyền trở lại các tế bào này vàoUng thư phổi là một trong những bệnh ungcơ thể của chính bệnh nhân. Có nhiều dòng tếthư phổ biến nhất về tỷ lệ mắc là nguyên nhânbào được phân tách và sử dụng trong liệutử vong hàng đầu do ung thư trên thế giới vàpháp này như tế bào lympho T hỗ trợ (TCD4)ở Việt Nam [1]. Tuy đã có nhiều tiến bộ trongvà tế bào lympho T gây độc (TCD8), tế bàochẩn đoán và điều trị, song ung thư phổi vẫntua (Dendritic cells- DC), tế bào diệt tự nhiênlà một trong những ung thư có tiên lượng xấu(Natural killer cells-NK) [5; 6]. Các tế bàohiện nay với tỷ lệ sống thêm sau 5 năm củaTCD8 được cho là đóng vai trò trung tâmbệnh nhân ung thư phổi nói chung chỉ ở mứctrong đáp ứng miễn dịch chống ung thư còn18% [2]. Do đó, việc phát triển các phươngcác tế bào TCD4 đóng vai trò quan trọng trongpháp điều trị hiệu quả mới là điều hết sức cầnviệc duy trì chức năng của các tế bào T gâythiết. Trên thế giới hiện nay, liệu pháp sửđộc [7]. Các tế bào Lympho T có thể đượcdụng tế bào miễn dịch đã được phát triển đểnuôi cấy, hoạt hóa trong môi trường được bổđiều trị nhiều loại ung thư, bao gồm cả ungsung huyết thanh, các cytokine và một số yếuthư phổi với những kết quả ban đầu đầy hứatố kích thích khác như kháng thể kháng CD3/hẹn [3; 4]. Trong liệu pháp này, các tế bàoCD28 để tăng số lượng cũng như khả năngmiễn dịch được tách từ máu ngoại vi củanhận diện và tiêu diệt tế bào ung thư. Kể từngười bệnh, nuôi cấy tăng sinh và hoạt hóakhi được công bố lần đầu tiên vào năm 1982một hoặc nhiều loại tế bào trong môi trườngđến nay đã có nhiều quy trình nuôi cấy hoạthóa tế bào lympho tách từ bệnh nhân ung thưĐịa chỉ liên hệ: Tạ Thành Văn, Trung tâm nghiên cứu Gen-Protein, Trường Đại học Y Hà NộiEmail: tathanhvan@hmu.edu.vnNgày nhận: 18/9/2018Ngày được chấp thuận: 11/10/20188phổi được xây dựng, các tác giả đã đi xa hơnvà đánh giá hiệu quả điều trị của liệu pháp sửdụng tế bào lympho T thẩm quyền miễn dịchtrên bệnh nhân. Nhiều thử nghiệm lâm sàngTCNCYH 115 (6) - 2018TẠP CHÍ NGHIÊN CỨU Y HỌCsử dụng tế bào lympho kết hợp với hóa chất,Kỹ thuật nuôi cấy hoạt hóa tế bào lympho:xạ trị ở bệnh nhân ung thư phổi cho thấy hiệuSau khi tách chiết, các tế bào được nuôi cấyquả đáng kể trong việc kéo dài thời gian sốngtrong môi trường RPMI 1640 chứa 10% huyếtthêm của bệnh nhân đồng thời chất lượngthanh người có bổ sung thêm các cytokin IL-2cuộc sống của bệnh nhân được cải thiện rõ(nồng độ 10 U/L). Khi các tế bào ổn định, đạtrệt [8 - 10]. Hiện tại, Việt Nam vẫn đang trongmật độ nuôi cấy cần thiết (70 - 80%), sẽ đượcgiai đoạn tiếp cận với liệu pháp tế bào miễnchuyển sang các điều kiện nuôi cấy hoạt hóadịch trong điều trị ung thư và chưa có nhiềuvà biệt hóa có bổ sung kháng thể kháng CD3công trình nghiên cứu được công bố trong lĩnhvà CD28. Tổng thời gian nuôi cấy và hoạt hóavực này. Do đó, nghiên cứu được tiến hànhtế bào lympho là 14 ngày.với mục tiêu áp dụng và hoàn thiện quy trìnhtách chiết, nuôi cấy hoạt hóa tế bào TCD8 trênbệnh nhân ung thư phổi.Kỹ thuật phân loại tế bào nuôi cấy bằngFlow-CytometryDựa trên sự biểu hiện của các marker đặcII. ĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁP1. Đối tượnghiệu trên bề mặt tế bào tương ứng với mỗigiai đoạn hoạt hóa và biệt hóa của mỗi loại tếbào lympho. Các marker được sử dụng là:10 bệnh nhân (6 nam, 4 nữ) ung thư phổiCD3, CD4, CD8, CD19, CD56. Các tế bàokhông tế bào nhỏ nguyên phát, giai đoạn III (5lympho được nhuộm với kháng thể khángbệnh nhân), IV (5 bệnh nhân) được lựa chọnmarker đặc hiệu tế bào cho từng giai đoạnvào nghiên cứu. Bệnh nhân ≥ 18 tuổi, toànhoạt hóa và biệt hó ...