Nuôi cấy và dung hợp tế bào trần

Sử dụng hỗn hợp enzym để phân giải thành tế bào giải phóng các tế bào trần, tạo môi trường mới có áp suất thẩm thấu thích hợp tránh nước vào làm vỡ tế bào
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Nuôi cấy và dung hợp tế bào trần Công nghệ tế bào thực vật Nuôi cấy và dung hợp tế bào trầnHÀ NỘI 03/2011 1TRƯỜNG ĐẠI HỌC THÀNH TÂYKhoa công nghệ nông – thực phẩm Thảo luận Nuôi cấy và dung hợp tế bào trần Gv hướng dẫn : ths. BÙI VĂN THẮNG Nhóm sinh viên thực hiện : 1. DƯƠNG TUẤN BẢO 6. LÊ VĂN LÂM 2. NGUYỄN VĂN SINH 7. PHẠM CÔNG HÀ 3. NGUYỄN ĐÌNH CÔNG 8.PHẠM THẾ TÙNG 4. HÀ HUY HUÂN 9.VŨ MẠNH TUẤN 5. QUẢN TRỌNG LÂN 10.TRẦN NGỌC THỊNH 2 Nội Dung1. Phương pháp tách protoplast2. Nuôi cấy protoplast3. Phương pháp Dung hợp protoplast4.Ứng dụng và các tồn tại của kỹ thuật protoplast 31.Phương pháp tách tế bào trần 1.1 nguyên tắc Sử dụng hỗn hợp enzym: xenlulolaza, emixelulolaza, pectinlaza để phân giải thành tế bào giải phóng các tế bào trần Tạo môi trường có áp suất thẩm thấu thích hợp tránh nước vào làm vỡ tế bào. 41. Phương pháp tách tế bào trần 1.2 các bước tiến hành Chọn nguyên liệu Xử lý gây co nguyên sinh chất Xử lý hỗn hợp enzym Tách và làm sạch protoplas Kiểm tra khả năng sống và tạo mật dọ thích hợp 562. Nuôi cấy protoplast 2.1 phát sinh hình thái • Có 2 con đường : phát sinh cơ quan (organogenesis) Phát sinh phôi soma (somatic embryogenesis) 72. Nuôi cấy protoplast 2.2 Môi trường nuôi cấy • Ammonium nitrate • Calcium • Chất hữu cơ • Các acid hưu cơ và vitamin • Chất điều tiết sinh trưởng • Đường 82. Nuôi cấy protoplast 2.3 Điều kiện nuôi cấy • Cường độ ánh sáng • Chất lượng ánh sáng • Nhiệt độ 93.Phương pháp dung hợp protoplast 3.1 Dùng hóa chất • Xử lý bằng NaNO3 • Xỷ lý bằng PEG 103.Phương pháp Dung hợp protoplast 3.1.1 xử lý bằng NaNO3 3.1.2 xử lý bằng PEG • Power và cs đã dùng • Tác nhân PEG NaNO3 (0,25 M) kích (polyethylen glycol) thích dung hợp hai • PEG có 2 tác dụng: protoplast. Hoạc cung cấp một cầu • phương pháp này cho nối Ca2+ có thể liên kết hiệu suất thấp vì NaNO3 các bề mặt màng với không thích hợp với tế nhau bào bị không bào hóa Hoạc dẫn đến sự rối loạn mạnh như protoplast từ tích diện bề mặt nhu mô lá. 113.Phương pháp Dung hợp protoplast 123.Phương pháp Dung hợp protoplast 3.2 Dùng xung điện • Nguyên t ắc : các protoplast tích điện nên dịch chuyển trong điện trường tạo chuỗi giữa hai thanh điện cực, xung điện làm thủng màng khiến protoplast hòa trộn vào nhau 133.Phương pháp Dung hợp protoplast 14153.Phương pháp Dung hợp protoplast 3.3 các khả năng xảy ra khi dung hợp 164.Ứng dụng và các tồn tại của kỹ thuật protoplast 4.1 ứng dụng : Dung hợp protoplast (lai soma) Chọn dòng tế bào Biến nạp, di truyền : chuyển cơ quan tử , AND ngoại lai vào protoplast 17 4.Ứng dụng và các tồn tại của kỹ thuật protoplast4.1.1 nuôi cấy tế bào protoplast thuốc lá Chuẩn bị môi trường : + Onozuka cellulase R10 0,5 % + Onozuka macerozyme R10 0,1 % + Mannitol 13,0 % + pHmôi trường ~ 5,8 Dung dịch này được khử trùng bằng màng lọc Millipore loại có đường kính lỗ lọc 0,2-0,25 µm. 184.Ứng dụng và các tồn tại của kỹ thuật protoplast 19 4.Ứng dụng và các tồn tại của kỹ thuật protoplast4.1.1 nuôi cấy tế bào protoplast thuốc lá• Tiến hành: Ngày tứ 5 : chuyển sang Ngày thứ 1: ngâm lá nuôi cấy ở ánh sáng có trong dung dịch enzym cường độ cao hơn (50-75 tách protoplast. µmol/sec/m2) Ngày thứ 2: lọc, tách tế bào protoplast, nuôi cấy Ngày thứ 7: kiểm tra số lượng tế bào phân chia, qua đêm ở 28oC kiểm tra xem có dấu hiệu Ngày thứ 3 : chuyển sang của sự nhiễm bẩn không. nuôi cấy ở ánh sáng yếu (10-20 µmol.sec/m2) 20