Phân lập vi khuẩn pseudomonas stutzeri trong đất đồng bằng sông Cửu Long và ứng dụng xử lý amonium trong nước ở điều kiện phòng thí nghiệm

Thu thập 36 mẫu đất ở ĐBSCL để phân lập vi khuẩn (VK) Pseudomonas stutzeri và nhận diện chúng bằng kỹ thuật PCR. Kết quả cho thấy dòng P8 xác định là P. stutzeri bằng cặp mồi đặc trưng 16S-rDNA và một dòng P2a được xác định có mang gen cd1-nirD. Sử dụng riêng rẻ dòng P8, P2a, P10, dòng đối chứng dương ATCC 14405 và hỗn hợp 2 dòng phối trộn P8-P2a, P10-P8 để khử ammonia và nitrat dưới mức an toàn từ 2 đến 4 ngày sau khi cho các dòng VK này vào trong môi trường nước...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Phân lập vi khuẩn pseudomonas stutzeri trong đất đồng bằng sông Cửu Long và ứng dụng xử lý amonium trong nước ở điều kiện phòng thí nghiệm PHÂN L P VI KHU N PSEUDOMONAS STUTZERI TRONG ð T ð NG B NG SÔNG C U LONG VÀ NG D NG X LÝ AMONIUM TRONG NƯ C ðI U KI N PHÒNG THÍ NGHI M Ths. Phan Trư ng Khanh∗ TÓM T T Thu th p 36 m u ñ t ðBSCL ñ phân l p vi khu n (VK) Pseudomonas stutzeri và nh n di n chúng b ng kthu t PCR. K t qu cho th y dòng P8 xác ñ nh là P. stutzeri b ng c p m i ñ c trưng 16S-rDNA và m t dòng P2añư c xác ñ nh có mang gen cd1-nirD. S d ng riêng r dòng P8, P2a, P10, dòng ñ i ch ng dương ATCC 14405 và h n h p 2 dòng ph i tr n P8-P2a,P10-P8 ñ kh ammonia và nitrat dư i m c an toàn t 2 ñ n 4 ngày sau khi cho các dòng VK này vào trong môitrư ng nư c bi n nhân t o hay nư c ao nuôi tôm b nhi m ammonia. K t qu là h u h t các dòng VK ñ u có khnăng kh NH4+ kho ng 80%. Tuy nhiên, hi u su t x lý NH4+ c a dòng ATCC 14405 không cao. ABSTRACT Thirty six soil samples were taken from the Mekong Delta to identify Pseudomonas stutzeri by PCRtechnology. Results indicated that, P8 strain was identified Pseudomonas stutzeri with specific primers 16S-rDNAand that one strain P2a has carried cd1-nirD gene. Using alone bacteria strains P8, P10, P2a, ATCC 14405 and a mixture of P8-P2a, P10-P8 reducedammonia and nitrate concentration to below safety level from 2 to 4 days after inoculating this bacteria intoammonia-wastewater of artificial seawater and shrimp-pond water. As a result, most of bacteria strains reducedabout 80% ammonia and nitrate. However, ammonia reducible efficiency of ATCC 14405 was not high.Key words: Pseudomonas stutzeri1. ð T V N ð V n ñ ô nhi m các h p ch t nitơ vô cơ trong nư c có th gây nên m t s b nh nguy hi m cho ngư is d ng, nitrat t o ra ch ng thi u vitamin và có th k t h p v i các amin ñ t o nên nitrosamin là nguyênnhân gây ung thư ngư i, n ng ñ NH4+ cao gây ra hi n tư ng phú dư ng làm cho môi trư ng nư c b ônhi m n ng. Nitơ amon có m t trong nư c cũng làm gi m hi u qu c a khâu kh trùng b ng clo, ngay ctrong môi trư ng ñ t khi lư ng nitơ vô cơ quá nhi u ñ t s b chay c ng… Vì v y, vi c nghiên c u, tìmki m và phân l p dòng VK Pseudomonas stutzeri ñ x lý nitơ vô cơ trong nư c là r t c n thi t.2. PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN C U - Phân l p VK này trên môi trư ng Pseudomonas isolation agar. Sau ñó xác ñ nh các dòng VK khñ m b ng môi trư ng SW-LB, môi trư ng Minimal. - Quan sát hình d ng và ño kích thư c t bào VK P. Stutzeri dư i kính hi n vi v i ñ phóng ñ i 400l n. - Ly trích DNA và ki m tra các dòng P. Stutzeri ñã phân l p b ng k thu t PCR - Ch y ñi n di trên Gel Agarose - Xác ñ nh kh năng kh nitơ vô cơ c a vi khu n Pseudomonas stutzeri - Xác ñ nh lư ng NH4+ và NO3- ñư c x lý b i VK P.stutzeri trong nư c ao nuôi tôm.3. K T QU TH O LU N 3.1 Hình thái, màu s c, kích thư c dòng Pseudomonas K t qu phân l p ñư c 20 dòng VK Pseudomonas, trong ñó có 5 dòng VK ñư c phân l p t nhóm ñ tnhi m m n, 5 dòng t nhóm ñ t phèn, 10 dòng ñư c phân l p t nhóm ñ t phù sa. Trong s 20 dòng VKPseudomonas ch có 1 dòng P. stutzeri là P8. Dòng P8 ñư c phân l p t m u ñ t phù sa xã An Th nhTrung, huy n Ch M i, An Giang. H u h t các khu n l c ñ u có hình que, màu tr ng ñ c, tr ng s a haymàu vàng, b m t khu n l c mô ho c trơn, có chi u dài t 0,4 m–2,5 m; chi u ngang t 0,5 m–0,8 m.B ng 1. K t qu phân l p các dòng vi khu n t ñ t ð a ñi m thu m u Lo i ñ t S m u S dòng phân l p Ch M i Phù sa 6 6 Ô môn Phù sa 6 4∗ Gi ng viên BM. Môi trư ng - PTBV. Email: ptkhanh@agu.edu.vnBáo cáo Khoa h c S 32, 05/2008 27 Vĩnh L i ð tm n 6 2 Vĩnh Châu ð tm n 6 3 Tam Nông ð t phèn 6 2 Th nh Hoá ð t phèn 6 3 3.2 Ki m tra các dòng vi khu n b ng k thu t PCR S n ph m ADN sau khi ki m tra ñư c khu ch ñ i b ng k thu t PCR, ti p t c ki m tra b ng phươngpháp ñi n di trên gel agarose 1,2% và ñư c ch p hình dư i tia UV. K t qu ñi n di v i c p m i F (5’AGT CAC ACT GGA ACT GAG ACA -3’); R (5’-TGT CAG TAT TAG CCC AGG TG-3’), chúng tôiphát hi n ñư c m t loài VK cho band ADN v trí 625bp là ch ng P. stutzeri P8 (Hình 1) phù h p ...