Phát hiện đồng thời virus cúm A và Human Metapneumovirus (hMPV) trên mẫu phết ở họng mũi bằng kỹ thuật Multiplex RT-PCR

Virus cúm A và human Metapneumovirus (hMPV) là hai trong số các virus gây ra bệnh nhiễm trùng cấp tính đường hô hấp phổ biến nhất. Bệnh do 2 loại virus này có triệu chứng tương tự nhau như ho, hắt hơi, sốt cao kéo dài, mệt mỏi, thường không gây nguy hiểm nhưng trong một số trường hợp phát hiện và điều trị muộn vẫn có thể gây tử vong ở người, như virus cúm A/H5. Chúng tôi thực hiện đề tài này nhằm mục đích xây dựng quy trình chẩn đoán đồng thời hai loại virus nói trên trong cùng một phản ứng PCR.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Phát hiện đồng thời virus cúm A và Human Metapneumovirus (hMPV) trên mẫu phết ở họng mũi bằng kỹ thuật Multiplex RT-PCRY Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số 5 * 2019 Nghiên cứu Y học PHÁT HIỆN ĐỒNG THỜI VIRUS CÚM A VÀ HUMAN METAPNEUMOVIRUS (hMPV) TRÊN MẪU PHẾT Ở HỌNG MŨI BẰNG KỸ THUẬT MULTIPLEX RT-PCR Nguyễn Đại Thức*, Dương Ngọc Anh Trang**, Nguyễn Ngọc Tấn**, Nguyễn Thu Ngọc***TÓM TẮT Đặt vấn đề: Virus cúm A và human Metapneumovirus (hMPV) là hai trong số các virus gây ra bệnh nhiễmtrùng cấp tính đường hô hấp phổ biến nhất. Bệnh do 2 loại virus này có triệu chứng tương tự nhau như ho, hắthơi, sốt cao kéo dài, mệt mỏi, thường không gây nguy hiểm nhưng trong một số trường hợp phát hiện và điều trịmuộn vẫn có thể gây tử vong ở người, như virus cúm A/H5. Chúng tôi thực hiện đề tài này nhằm mục đích xâydựng quy trình chẩn đoán đồng thời hai loại virus nói trên trong cùng một phản ứng PCR. Phương pháp: Khảo sát hoạt động của primer trên phản ứng RT – PCR làm tiền đề xây dựng và tối ưu hóaquy trình multiplex RT - PCR phát hiện đồng thời virus cúm A và hMPV từ dịch phết họng mũi bệnh nhân.Khảo sát trên mẫu dịch phết họng mũi lâm sàng của bệnh nhân ghi ngờ nhiễm bệnh. Kết quả: Chọn được nhiệt độ bắt cặp tối ưu của hệ primer là 55oC; nồng độ tối ưu cả hệ primer lần lượt chovirus cúm A và hMPV là 0,48 µM và 0,56 µM. Sự đặc hiệu của hệ primer được khẳng định khi kết quả phảnứng PCR chỉ cho kết quả dương tính với RNA khuôn mẫu của hai virus nói trên trong khi âm tính với các viruscúm B, Respiratory syncytial virus (RSV), Adeno virus, Rhino virus, Parainfluenza virus (PIV) cũng gây bệnhvề đường hô hấp có các triệu chứng tương tự hai loại virus mục tiêu. Quy trình multiplex RT - PCR có độ đặchiệu cao và độ nhạy đạt 0,002 pg/µl. Kết quả kiểm tra thực nghiệm trên 14 mẫu thu từ bệnh nhân cho thấy có 3mẫu phết họng-mũi cho kết quả dương tính với virus cúm A, 1 mẫu phết họng-mũi dương tính với virus hMPV,nhưng chưa phát hiện thấy mẫu đồng nhiễm cả hai loại virus. Kết luận: Đã xây dựng và tối ưu hóa thành công quy trình multiplex RT-PCR phát hiện đồng thời hai loạivirus hô hấp đang lưu hành. Từ khóa: virus cúm A, human metapneumovirus (hMPV)ABSTRACT DETECTION INFLUENZA A VIRUS AND HUMAN PNEUMOVIRUS (hMPV) ON NASOPHARYNGEAL SPECIMEN BY USING MUTIPLEX RT-PCR Nguyen Dai Thuc,Duong Ngoc Anh Trang, Nguyen Ngoc Tan, Nguyen Thu Ngoc * Ho Chi Minh City Journal of Medicine * Supplement of Vol. 23 – No. 5 - 2019: 251 – 258 Background: Influenza A virus and human Metapneumovirus (hMPV) are two of the most common acuterespiratory infections. Diseases caused by these two viruses have similar symptoms such as coughing, sneezing,prolonged high fever, fatigue, in most case, they do not cause serious illness but sometime ca cause death, such asinfluenza A/H5 virus. We carried out this project with the aim of building a concurrent diagnostic procedure forthe two viruses mentioned in the same PCR reaction. Methods: Investigation of primers activity on RT-PCR reaction is a premise to build and optimize multiplexRT - PCR process to simultaneously detect influenza A virus and hMPV from patients nasal throat swab.Experimental results on 14 samples from patients showed that 3 clinical specimens tested positive for influenza Avirus and only one clinical specimen tested positive for hMPV, no co - infected specimens were found.*Đại học Y Dược TP. Hồ Chí Minh **Đại học Nông Lâm ***Viện Pasteur TP.Hồ Chí MinhTác giả liên lạc: ThS. Nguyễn Đại Thức ĐT: 0916347616 Email: nguyendaithuctb@gmail.comChuyên Đề Điều Dưỡng Kỹ Thuật Y Học 251Nghiên cứu Y học Y Học TP. Hồ Chí Minh * Phụ Bản Tập 23 * Số 5 * 2019 Results: In order to determine the PCR conditions, the results showed that the optimal pairing temperatureof the primer set was at 55°C; the optimal primers concentration of influenza A virus and hMPV were 0.48 µMand 0.56 µM, respectively. Specificity of the primer system was confirmed when the PCR results were positive forthe RNA template of the two viruses while negative for the other viruses, which also causes respiratory illnesseswith similar symptoms to the two target viruses, such as influenza B virus, Respiratory syncytial virus (RSV),Adeno virus, Rhino virus, Parainfluenza virus (PIV). The multiplex RT - PCR has high specificity andsensitivity at 0.002 pg/µl. Experimental results on 14 samples from patients showed that 3 clinical specimenstested positive for influenza A virus and only one clinical specimen tested positive for hMPV, no co - infectedspecimens were found. Conclusion: Successfully developed and optimized multiplex RT-PCR process for simultan ...