Phát hiện nhanh Salmonella spp. trong mẫu thực phẩm bẳng PCR kết hợp với nuôi cấy trong môi trường chọn lọc

mục tiêu của bài viết này nhằm tìm ra một qui trình nuôi cấy thích hợp vừa tiết kiệm thời gian vừa nâng cao mật số Salmonella vốn dĩ hiện diện rất giới hạn trong thực phẩm đồng thời loại bớt nguồn vi sinh vật tạp khác để nâng cao hiệu quả phát hiện nhanh chóng sự hiện diện của vi khuẩn này bằng PCR.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Phát hiện nhanh Salmonella spp. trong mẫu thực phẩm bẳng PCR kết hợp với nuôi cấy trong môi trường chọn lọcTgp chi Cong nghe Sinh hoc iO(l): 133-137,2012P H A T H I E N N H A N H SALMONELLASPP. T R O N G M A U T H y C P H A M BANG PCR K E THgrp vofi Nu6i CAY TRONG M6I TRU^OTSG CHQN LQCNguyen Van B i , V6 Thi T h a n h Phuong, T r a n g Minh PhuwnK, Tran Thj Xuan MaiDgi hgc Cdn ThaT6M TATMyc tieu ciia nghien ciiu nay nhJm xay dyng mpt quy Uinh phii hi^n nhanh sy hien di^n cua vi khuinSalmonella spp. bing PCR. Cac mau kiem Ua dugc nuoi cay frong bin moi trudng tang smh: (1) Bufferpeptone water (BPW), (2) Buffer peptone waler va Tetra thionale broth base (BPW+TT), (3) Buffer peptonewater vi Rappon-Vasiliadis RIO Brolh (BPW+RV) va (4) moi irudng chpn Ipc phoi hpp (TT+RV). Hai quytrinh trich DNA (phenol-chloroform vi trich nhanh bing xii IJ nhipt) da dugc sir dyng trong nghien cihi niy.Ket qua khao sit cho th5y kha ning phit ht$n Salmonella spp. trong mfli trudng tang sinh BPW li rat thap(2%) frong khi frong moi frudng BPW+RV cao gip 3 ikn (6%) vi trong BPW+TT cao gap 7 lan (14%) Tuynhien moi trudng chpn Igc phoi hgp (TT+RV) nhay hon va chuyen bi?t hon mdi tnroTig BPW+RV viBPW+TT, gnip phyc hoi su phat irien ciia Salmonella, nhd dd kha nSng phii hien vi khuan Salmonella bangPCR djit d miic 60%. So vdi quy frinh trich DNA bang phenol-chloroform, dp nhay ciia quy trinh trich nhanhbang xii ly nhi|t dugc danh gii la 100%. Tir nhung kel qua d^l dugc. quy frinh nay se rat hiiu dyng diing dkphat hipn nhanh Salmonella spp. hien di^n trong ngudn cac thuc pham tg nhien.Tukhoa:Caiiinoi trudng chon igc, PCR. thuc pham. Salmonella sppMO DAUSalmonella l i mpt frong nhung ngudn benhnguy hiem lay Qaiyen qua thuc an d nhieu nude frenthe gidi. Hang nam cd rat nhieu ngudi nhiem benhniy phii nhap vien v i nhimg trucmg hgp benh ningcd t h i din den bi vong. Do dd kiem soil dugc benhlay nhiem frong thuc pham la dieu r i t can thiet chocac nganh sin xuit th c pham. Vi khuanSalmonella spp. dugc tim thiy frong da d i y v i rudtd phan Idn c i c ddng vat, vi vay tiep xuc vdi dpngvat v i cic thuc pham cd ngudn g6c dpng v^tthudng la nguyen nhan din den bpnh do vi khuanniy gay ra (Fratamico, 2003). Gutierrez et ai(2000) da b i o cao tai Mexico chiing Salmonellaspp. hien dien 51%i frong c i c thfrc an nhanh, 23%.frong cic san phim tir thit (jambon, xiic xich v i thitxdng khdi), 22%i frong cac m i u thit (bd, g i , ca), 3%ifrong c i c sin p h i m tir siia v i 1% frong c i c s i nphim tii trumg. 6 My cd 20%i thit bd, heo, ga tay v i^a bj nhilm Salmonella spp. (Talbot el ai, 2006).Cl Viet Nam, nhidu m i u thit gia sue, gia c i m y itning bj nhilm Salmonella spp., frong dd 49%. m i uthjt g i d H i Ndi (Luu et ai, 2006); 6 1 % mau thittuoi v i gia c i m b i n le d cac chg v i sieu thj Tp HdChi Minh (Van et ai, 2007); 3 4 % m i u tdm, thitheo, thjt bd, thjt ga v i thit vjt ban le d sieu thi vachg Ddng bing song Cuu Long (Tran et ai, 2004).Mgt so phuang phap giup phit hien Salmonellada dugc cdng bd. Phuong phip nudi ciy fruyenthdng thudng m i t nhiiu thdi gian (5-7 ngiy) v i rattin kem frong khi phuong phip PCR mang lai nhanhchdng v i ding tin cay de phat hien s hipn dien ciiaSalmonella frong mdi trudng tu nhien. PCR da v idang dugc sit dung thanh cdng de chin doin sg hiendien cua vi khuin giy benh frong mdi trudng nudev i th c phim (Moganedi et ai, 2007). Tuy nhien dpnhay ciia PCR cQng bi inh hudng rit Idn bdi quyfrmh nudi ciy mau. N6u nudi cay miu frong mditrudng khdng chuyen biet thi cd the cac ngudn visinh v$t khic chiem da sd hon ngudn vi sinh vat muctieu va diiu nay gay inh hudng den lupn^ DNA muctieu dugc phan lap qua thap khdng du de phit hipn.Do do cac mdi trudng chuyen bipt de nudi cay cic vikhuin mgc tieu la rit cin thiet nham giup tdi uu khanang phit hipn.Myc tieu ciia nghien cim niy nham tim ra motquy frinh nudi ciy thich hap vira tiet kipm thiri gianvua nang cao m^t so Salmonella vdn di hipn dien ratgidi h^n frong thgc phim ddng thdi o^ bdt ngudn visinh vat t^p khic d i nang cao hieu q u i phit hiennhanh chdng sf hien dien ciia vi khuan nay bangPCR.Nguyen Van Bi etalVAT LII;.U VA PHUONG PHAPat It^u v i hda chatSu dgng 50 mau thgc pham bao ghm 6 mau chilya. 4 mau ncni chua, 10 mau sd huyet, 10 mau thjlbd, 10 mau thjt ga v i 10 mau tlijl heo tir cic chg l^idja ban Thanh pho Can Tho dugc dimg trong thinghipm nayTaq polymerase. dNTP. BSA dupe iniia lir hangFennenlas. Thang chuan 1(K) bp (Fennentas) dugc sirdung dc udc lui,mg kich thudc sin phim PCR. Cicmdi tnrdng nudi cay Buffer Peplonc Water (BPW),Tctra Thionate Broth Base (TT). Rapport-VasiliadisRIO Brolh (RV) dugc mua tir hang Difco, USA.Nudi cay t i n g sinhTdng sinh Irong mdi trit^g BPW: 25 g mauthgc pham tir cic chg dupe cho vio liii nilon vdtning, them 225 ml mdi truimg khdng chgn IpcBPW, ddng hda mau bang may Stomacher(Laboratory Bl ...