Phát triển phương pháp RT - PCR đa mồi để phát hiện virus gây bệnh dịch tả lợn Châu Phi và virus gây bệnh dịch tả lợn cổ điển

Bài viết đánh giá mReal-time RT-PCR để xét nghiệm phát hiện đồng thời ASFV và CSFV. Kết quả cho thấy giới hạn phát hiện của phương pháp là 12,5×101 copies/µL đối với ASFV và CSFV. Kiểm tra độ lặp lại bằng cách sử dụng mẫu chuẩn (p-ASFV và p-CSFV) cho thấy hệ số biến đổi giữa các lần lặp lại
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Phát triển phương pháp RT - PCR đa mồi để phát hiện virus gây bệnh dịch tả lợn Châu Phi và virus gây bệnh dịch tả lợn cổ điển HUAF JOURNAL OF AGRICULTURAL SCIENCE AND TECHNOLOGY ISSN 2588-1256 Vol. 7(1)-2023: 3396-3406 PHÁT TRIỂN PHƯƠNG PHÁP RT-PCR ĐA MỒI ĐỂ PHÁT HIỆN VIRUS GÂY BỆNH DỊCH TẢ LỢN CHÂU PHI VÀ VIRUS GÂY BỆNH DỊCH TẢ LỢN CỔ ĐIỂN Trần Trọng Vương1, Ngô Hữu Lai1, Lưu Quang Hùng1, Nguyễn Thị Hằng Nga1, Nguyễn Văn Thế1, Võ Thị Bình1, Trần Thị Minh Thư1, Trần Thị Nguyên1, Nguyễn Văn Chào2* 1 Chi cục Thú y vùng IV; 2 Trường Đại học Nông Lâm, Đại học Huế. * Tác giả liên hệ: nguyenvanchao@huaf.edu.vn Nhận bài: 07/10/2022 Hoàn thành phản biện: 14/12/2022 Chấp nhận bài: 20/12/2022 TÓM TẮT Virus dịch tả lợn Châu Phi (ASFV) và virus dịch tả lợn cổ điển (CSFV) đã gây thiệt hại kinh tế rất lớn cho người chăn nuôi lợn. Có nhiều phương pháp xét nghiệm để phát hiện hai virus này như: PCR, Realtime PCR, phân lập virus, ELISA. Bên cạnh đó phương pháp Multiplex Real-time RT-PCR (mReal-time RT-PCR) để phát hiện đồng thời ASFV và CSFV cũng đã được đánh giá ở một số nước trên thế giới nhưng chưa được nghiên cứu nhiều tại Việt Nam. Trong nghiên cứu này chúng tôi đánh giá mReal-time RT-PCR để xét nghiệm phát hiện đồng thời ASFV và CSFV. Kết quả cho thấy giới hạn phát hiện của phương pháp là 12,5×101 copies/µL đối với ASFV và CSFV. Kiểm tra độ lặp lại bằng cách sử dụng mẫu chuẩn (p-ASFV và p-CSFV) cho thấy hệ số biến đổi giữa các lần lặp lại TẠP CHÍ KHOA HỌC VÀ CÔNG NGHỆ NÔNG NGHIỆP ISSN 2588-1256 Tập 7(1)-2023: 3396-3406 1. MỞ ĐẦU giảm thiệt hại về kinh tế là điều quan trọng (Aliro và cs., 2022). Việc chẩn đoán phân Bệnh dịch tả lợn Châu Phi (African biệt trong thực địa là rất khó khăn, bởi vì hai swine fever-ASF) là một bệnh truyền nhiễm bệnh ASF và CSF có nhiều điểm tương nguy hiểm, do African swine fever virus đồng về biểu hiện lâm sàng. Khi bệnh xảy (ASFV) thuộc họ Asfaviridae có nhân là sợi ra ở thể quá cấp và cấp tính các biểu hiện đôi DNA gây ra ở lợn (Mahy, 2008). Khi đặc trưng chưa xuất hiện thì việc chẩn đoán lợn mắc bệnh có khả năng chết lên đến trong phòng thí nghiệm là phương pháp 100%, do đó bệnh gây ảnh hưởng lớn đến chẩn đoán thường được lựa chọn (Gallardo hiệu quả kinh tế của ngành chăn nuôi lợn, và cs., 2021). Một kết quả tối ưu nhất là khi đặc biệt là ở những nước có nền chăn nuôi kết hợp kết quả từ phòng thí nghiệm và dữ phát triển (Blome và cs., 2020; Galindo và liệu từ những yếu tố dịch tễ liên quan (Aliro Alonso, 2017). Bệnh được phát hiện lần đầu và cs., 2022; Penrith và Vosloo, 2009). Hiện tiên vào năm 1921 tại Kenya sau đó lan rộng nay, một số phương pháp thường được sử ra các nước Châu Âu, Nam Mỹ và vùng Ca- dụng để phát hiện virus gồm phân lập virus, ri-bê vào giữa thế kỷ trước (Galindo và miễn dịch huỳnh quang trực tiếp (Direct Alonso, 2017). Tại Châu Á, bệnh được ghi fluorescent antibody test-DIFT), PCR và nhận lần đầu tiên tại Trung Quốc vào tháng Real-time PCR, mỗi phương pháp đều có 8/2018 (Zhou và cs., 2018), tại Việt Nam ưu điểm và nhược điểm riêng (OIE, 2019a; bệnh xảy ra vào đầu năm 2019 (Dixon và b; Oura và cs., 2013). Phương pháp Real- cs., 2019). Đợt bùng phát dịch bệnh ASF ở time PCR là phương pháp có độ nhạy, độ Việt Nam vào năm 2019 đã dẫn tới số lợn đặc hiệu cao, xét nghiệm được trên nhiều chết và tiêu hủy ước tính 6 triệu con chiếm nền mẫu lâm sàng khác nhau (Gallardo và hơn 20% tổng đàn của cả nước (Nguyen và cs., 2021; Oura và cs., 2013). Đây là các cs., 2021). Các đợt bùng phát dịch bệnh phương pháp đang được sử dụng rộng rãi tại ASF đã gây thiệt hại rất lớn đến nền kinh tế. Việt Nam để chẩn đoán bệnh ASF và CSF. Người chăn nuôi là đối tượng bị ảnh hưởng Tuy nhiên, hiện nay các quy trình xét trực tiếp và nó cũng gây ảnh hưởng gián tiếp nghiệm thường chỉ xét nghiệm riêng lẻ từng đến các giai đoạn trong chuỗi cung ứng thịt bệnh điều này dẫn tới tốn kém về mặt thời lợn (Nguyen và cs., 2021; Zhou và cs., gian, nguyên liệu, hóa chất… Phương pháp 2018). Trong khi đó, bệnh dịch tả lợn cổ ...