Sản xuất protein tái tổ hợp có dược tính sinh học (phần II)

Kiểm tra các điểm mạnh của quy trình Các tế bào là các hệ thống phản ứng sinh học nhỏ sản xuất hiệu quả nhiều hay ít các protein tái tổ hợp dựa vào các yếu tố đã biết hay chưa biết. Sản phẩm quá trình lên men chứa nhiều loại protein, mặc dù quy trình đã đựơc thiết kế tốt trong giai đoạn này. Điều này phụ thuộc rất nhiều vào các bước tinh sạch. Trong một quy trình hiệu quả, các chất nền cột có thể gắn nhiều protein (10-20% nhiều hơn hay ít hơn số lượng mong...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Sản xuất protein tái tổ hợp có dược tính sinh học (phần II) Sản xuất protein tái tổ hợp có dược tính sinh học (phần II)Kiểm tra các điểm mạnh của quytrìnhCác tế bào là các hệ thống phảnứng sinh học nhỏ sản xuất hiệu quảnhiều hay ít các protein tái tổ hợpdựa vào các yếu tố đã biết hay chưabiết. Sản phẩm quá trình lên menchứa nhiều loại protein, mặc dù quytrình đã đựơc thiết kế tốt trong giaiđoạn này. Điều này phụ thuộc rấtnhiều vào các bước tinh sạch.Trong một quy trình hiệu quả, cácchất nền cột có thể gắn nhiềuprotein (10-20% nhiều hơn hay íthơn số lượng mong đợi). Tốc độdòng chảy cột và số lượng mẫu cókhả năng chứa có thể được mấtnhiều trong suốt quá trình chạy cộtvà độ sạch của quá trình phân tách.Các bước kiểm tra cần được thựchiện để tính toán khoảng thời gianhiệu quả của cột và sản phẩm đượctinh sạch để xác định các điều kiệnmà protein vẫn có khả năng hoạtđộng. Cuối cùng, tính hiệu quả củaquy trình phụ thuộc mạnh vào cácthông số như pH, độ dẫn điện vàtính phân cực. Nhìn chung, một cộttinh sạch linh động thì tính hiệuquả của quy trình càng tăng thêm.Tính toán ở quy mô nhỏMột khi tính hiệu quả của quy trìnhđã được kiểm tra, quy trình này cầnlặp lại từ ba đến năm lần để xácđịnh các thông số, bắt đầu từ tế bàonuôi cấy đến sản xuất quy mô lớn.Mục đích là để xác định độ lập lạivà tính hiệu quả của mỗi bước liênquan đến chất lương và đặc tínhcủa các chất trung gian và các chấtthuốc ở nồng độ lớn.Sau khi vận hành thành công ở quymô phòng thí nghiệm, quy trìnhđược nâng cấp từ từ thành quy môpilot lớn hơn gấp 10 lần quy môphòng thí nghiệm và sau đó là sảnxuất ở quy mô lớn. Tất cả cácthông số của các bước đơn rẽ đượckiểm tra tất cả ngay cả khi quytrình đã vận hành ở quy mô lớnthành công, quy trình cần đượckiểm tra ở quy mô nhỏ một lần nữađễ tính toán tổ hợp các thông số kỹthuật trong một hệ thống đầy đủ.Lúc này, khi quy trình nhỏ đượcthẩm định lại. quá trình làm sạchvirus phải được thực hiện.Loại bỏ virusMột thành phần cần thiết của cácnghiên cứu thẩm định quy trình củacác sản phẩm thu nhận từ tề bàoeukaryotic là hiểu được quy trìnhtinh sạch để loại bỏ các các thànhphần virus bất hoạt bị nhiễm. Cácvirus nhiễm vào quy trình sinh họcđược chia thành loại: Các virus nội sinh tồn tại nhưmột phần của tế bào được sử dụngđể biểu hiện sản phẩm protein(retrovirus chuột). Các viruskhông thuộc loại virus nội sinh làcác virus từ các nguồn bên ngoàihiện diện trong các ngân hàng tếbào cao cấp (như Epstein Barrvirus). Các virus ngoại sinh thườngnhiễm vào sản phẩm thông quatrình sản xuất cũng như nhiễm từnguyên liệu thô hay do tạp nhiễm(parvovirus). Ngày hôm nay các sản phẩmcông nghệ sinh học thu nhận từ cácdòng tế bào bắt buộc không cóchứa bất kể thành phần virus nào.Nhưng trong các quy trình sản xuấthiện nay, do thiên nhiên có thể bịnhiễm từ các nguồn virus ngoạisinh. Do đó, để chắc chắn có sảnphẩm an toàn, giám định các bướclàm sạch virus phải trở thành mộtphần của quá trình sản xuất.Loại nhiễm virusCác bước làm virus phải được giámđịnh trứơc giai đoạn I của sản phẩmvà được thực hiện bởi chuyên gia.Phương pháp chung cho các nhàsản xuất là sử dùng các dòng tế bàochuột lang (rodent cell lines) đểgiám sát các bước tinh sạch virusđể loại bỏ hay bất hoạt các virusgây ung thư máu ở chuột (murineleukemia virus), virus này đóng vaitrò như là một mô hình chuyên biệtđối với các tiểu phần giốngretrovirus được sản xuất bởi các hệthống biểu hiện trong dòng tế bàochuột và để thêm vào và giám sátbước tinh sạch parvo virus trongquá trình sản xuất sản phẩm ở giaiđoạn I.Sự bất hoạt virus có thể được thựchiện bằng nhiệt độ, pH, chất tẩyrửa, phóng xạ và các dung môi sựloại bỏ virus có thể được thực hiệnbằng phương pháp lọc và chạy sắcký.Trong một nghiên cứu giám sátvirus , được thực hiện truớc khi sảnxuất các vật liệu cho giai đoạn IIIcủ sản phẩm, các nhà xuất sẽ chọnmột quy trình bao gồm từ hai tớibốn bước kiểm tra bổ sung. Sự lựachọn virus phụ thuộc vào dòng tếbào và nguồn gốc của môi trườngbao gồm vả hai loại virus mô hìnhchuyên biệt và không chuyên biệt.Các dòng virus được lựa chọn đểbất hoạt và loại bỏ nhiều loại virustrong quá trình sản xuất mà vẫn suytrì hoạt tính và chất lượng sảnphẩm.Một virus đáng quan tâm là cũngnhư virus được xác định cũng nhưcác chủng loài virus được biệt cũngnhư nhiễm vào vật liệu trong quátrình sản xuất. Một mô hình viruschuyên biệt cần được chính xácnhất các chủng loại virus (cùngchủng hay họ), có các đặc tính hoáhọc và vật lý tương tự nhau. Cuốicùng, một mô hình virus chuyênbiệt được sự dụng để đặc tính hoákhả năng loại bỏ hay bất hoạt virustổng số… cho thấy tính hiệu quảcủa quy trình tinh sạch.Quan trọng là, virus trong hạn mụclà sự lựa chọn đầu tiên. Nếu sửdụng đã biết chính xác là điềukhông thể. Các nhà sản xuất chọnmột mô hình virus chuyên biệt nhấtđể làm một mô hình virus cần khảosát. Để khảo sá ...