Sinhhọcphântử - Southernblot

Đây là phương pháp cho phép xác định được sự có mặt của những trình tự nucleotide trên một đoạn ADN nào đó, trong hỗn hợp các đoạn ADN khác nhau Do E.M.Southern đề xuất vào năm 1975, tại đại học Edingburd.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Sinhhọcphântử - Southernblot Sinhhọcphântử Southernblot Thựchiện: www.themegallery.com LOGOĐỗĐứcAnhNg.ThịĐiểmNg.PhanThịHoàngKimHồngVĩnhThànhMaiHoàngYếnNội dung seminarI GiớithiệuvềphươngphápSouthernBlot 1 KháiniệmII Laiphântử 2 Cáckiểulaiphântử 3 Cácyếutốảnhhưởng 1 NguyênlívàđiềukiệnIII Southernblot 2 Mẫudò 3 QuitrìnhIV Ứngdụng LOGOSouthernblot I. Giới thiệu chung về phương pháp Southern blot. - Đây là phương pháp cho phép xác định được sự có mặt của những trình tự nucleotide trên một đoạn ADN nào đó, trong hỗn hợp các đoạn ADN khác nhau - Do E.M.Southern đề xuất vào năm 1975, tại đại học Edingburd. - Được triển khai nhờ 1 số kĩ thuật nền tảng của công nghệ sinh học phân tử như: • Tách chiết gen. • PCR • Thẩm tích các phân tử acid nucleotide lên màng lai (blot). • Lai phân tử ( lai với mẫu dò đặc hiệu) • … LOGOII.Laiphântử1. Khái niệm  Là hiện tượng 2 mạch DNA sau khi đã tách rời, sẽ kết hợp lại với nhau ở điều kiện nhiệt độ được làm giảm từ từ, kết hợp với điều kiện thí nghiệm thích hợp.  Đặc điểm: – Đặc hiệu tuyệt đối: sự bắt cặp chỉ xảy ra giữa 2 trình tự hoàn toàn bổ sung cho nhau. – Các trình tự bổ sung có thể là DNA hay RNA  ptử DNA-DNA, RNA-RNA, các phân tử lai DNA-RNA LOGOSouthernblot Cáckiểulai phântử Lai trong Laitạichỗ phalỏng Laitrên pharắn LOGOLAITRÊNPHARẮN Nguyêntắc -1 trìnhtựbổ Sựlaiphântử sung. xảyrado: 1trìnhtựcần Chuyểnđộng biếtđượcgắn nhiệt. trêngíathể Nhiệtđộmôi trườngthấphơn Tmítnhấtvàiđộ LOGOCÁCYẾUTỐKĨTHUẬTTRONGLAITRÊNPHARẮN MàngNitrocellulose: Màng Nitrocellulose: Màngnylonđượcsửdụng đượcsửdụngđầutiên, đượcsửdụngđầutiên, phổbiến: nayítdùng,do: nayítdùng,do: Cóthểtiếpnhận Độbềncơhọc Độbềncơhọc 500µg/cm2. kémkhóthaotác. kémkhóthaotác. Khôngthểtáchrời Khôngthểtáchrời giữDNAchắchơn. cácphântửlaitrên cácphântửlaitrên Ítđứtgãy màngđểlaitrởlai màngđểlaitrởlai vớimộtmẫudò vớimộtmẫudò Chophéplainhiều khác. khác. lầnvớimẫudòkhác nhau LOGOSouthernblot Diagram Lai trênmàng rắn Thuậnlợi: Khókhăn: Dễdàngtrong Địnhlượng thaotác. phântửkém Dễdàngtách chínhxác trìnhtựkhônglai Hiệuquảlai rakhỏiphântửlai. thấp(vậntốc Ngăncảnsựtái laichậmđi10 bắtcặpgiữa2 lầnsovớivận mạchđơncủa tốclaitrênpha cùngmộtphântử. lỏng). LOGOIII.PHƯƠNGPHÁPSOUTHERNBLOT Diagram Nguyênlí Nguyênlí - dựatrênnguyên - Dựavàonguyêntắc tắcbiếntínhvà bổsunggiữacáccặp mucleotide:AT,GC hồitínhcủaphân (cácđoạn tửDNA polynucleotidemạch đơncótrìnhtựbổ sung) LOGOSouthernblot Phảnứnglaicầnnhiệtđộcao hoặchóachấtgâybiếntính DNA(NaOH,Formaldehyt). ĐòihỏimộtđoạnDNA(RNA) đãbiếtđượcsửdụnglàmmồi “Probe”đượcđánhdấu Nguyêntắc Nguyêntắc Cácvậtliệu,trangthiếtbịmáy mócchínhxác:mànglai,máy Blotting,buồnglai,máyPCR LOGOTẠOMẪUDÒ Diagram TạoProbenhờứngdụngPCR TạomẫudònhờPlasmid Thiếtlậpmồivà ...