Tách các neurotoxin từ nọc rắn hổ đất (Naja kaouthia)

Tiếp theo việc khảo sát các thành phần của nọc rắn hổ đất trong bài báo này chúng tôi xin trình bày việc tách các neurotoxin từ nọc rắn hổ đất Việt Nam (N. kaouthia) với mục đích tìm kiếm các toxin mới để ứng dụng vào điều trị các bệnh về thần kinh.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Tách các neurotoxin từ nọc rắn hổ đất (Naja kaouthia) T¹p chÝ Hãa häc, T. 45 (§B), Tr. 21 - 24, 2007 T¸ch c¸c neurotoxin tõ näc r¾n hæ ®Êt (Naja kaouthia) §Õn Tßa so¹n 15-11-2007 TrÇn Ngäc T©n , Tr ¬ng Nam H¶i1, Ho ng Ngäc Anh2 1 1 ViÖn C«ng nghÖ Sinh häc, ViÖn Khoa häc v( C«ng nghÖ ViÖt Nam 2 ViÖn Khoa häc VËt liÖu øng dông, ViÖn Khoa häc v( C«ng nghÖ ViÖt Nam Summary The first time, two neurotoxins were isolated and characterized from Vietnamese N. kaouthia snake venom. These neurotoxins were isolated using a reverse-phase HPLC on semipreparative column Supelcosil C18 and on analytic column Kromasil C18. The toxicity of isolated toxins was determined by injection it on the C57BL/6 mice. These isolated toxins have the masses of peak 4.6 and 4.7 are related to 6448 and 6129 Da neurotoxins. I - më ®Çu xin tr×nh b y viÖc t¸ch c¸c neurotoxin tõ näc r¾n hæ ®Êt ViÖt Nam (N. kaouthia) víi môc ®Ých t×m R¾n hæ ®Êt (N. kaouthia) l lo¹i r¾n ®éc phæ kiÕm c¸c toxin míi ®Ó øng dông v o ®iÒu trÞ c¸c biÕn nhiÒu ë Ch©u ¸ [1]. Tõ näc r¾n hæ ®Êt bÖnh vÒ thÇn kinh. Trung Quèc ng%êi ta ®( t¸ch c¸c cobrotoxin b v cobrotoxin c, ®ã l c¸c neurotoxin ng¾n cã II – nguyªn liÖu v ph ¬ng ph¸p kÝch th%íc ph©n tö l 62 gèc axit amin [2]. Cßn nghiªn cøu tõ näc r¾n hæ ®Êt Th¸i Lan ng%êi ta ®( t¸ch ra ®%îc c¸c toxin, cÊu t¹o tõ 65 gèc axit amin víi 1. Nguyªn liÖu cÊu tróc bËc mét cña toxin n y t%¬ng tù nh% c¸c Näc ®%îc thu tõ r¾n N. kaouthia nu«i ë tr¹i muscarinic toxin t¸ch tõ näc r¾n lôc Ch©u Phi r¾n §ång T©m, TiÒn Giang. Näc ®%îc tiÕt ra [3]. C¸c muscarinic toxin n y lÇn ®Çu tiªn ®%îc b»ng c¸ch xoa bãp r¾n b»ng tay, sau ®ã ®em t¸ch ra tõ näc r¾n lôc Ch©u Phi (Denroapis ®«ng kh« v gi÷ ë 4oC ®Õn khi dïng. M¸y HPLC angusticeps), chóng gåm 65 hoÆc 66 gèc axit cña h(ng Shimazu (NhËt B¶n) ®%îc sö dông ®Ó amin [4]. VÒ cÊu tróc, c¸c muscarinic toxin cã t¸ch c¸c neurotoxin cña näc r¾n. C¸c hãa chÊt cÊu tróc kh«ng gian gièng cÊu tróc cña c¸c dïng trong ph©n tÝch ®%îc mua tõ h(ng Merck neurotoxin näc r¾n (cÊu tróc ba ngãn tay), (§øc). nh%ng cÊu tróc bËc mét cña chóng th× kh¸c cÊu tróc bËc mét cña c¸c alpha-neurotoxin nªn dÉn 2. Ph ¬ng ph¸p t¸ch c¸c neurotoxin tõ näc ®Õn sù kh¸c biÖt vÒ chøc n¨ng. HiÖn nay c¸c r¾n N. kaouthia muscarinic toxin ®%îc sö dông ®Ó nghiªn cøu C¸c ph©n ®o¹n chøa toxin ®%îc t¸ch tõ näc thô thÓ víi muscarinic v ®Æc biÖt chóng ®%îc th« b»ng ph%¬ng ph¸p s¾c ký láng cao ¸p víi sö dung ®Ó ®iÒu trÞ bÖnh Pakingson [5]. cét b¸n ®iÒu chÕ Supelcosil C18 (10 × 250 mm; TiÕp theo viÖc kh¶o s¸t c¸c th nh phÇn cña 5 µm), tèc ®é ch¹y cét 5 ml/phót. Cét s¾c ký näc r¾n hæ ®Êt [6] trong b i b¸o n y chóng t«i ®%îc ch¹y víi gradient tuyÕn tÝnh cña c¸c dung 21 dÞch sau: A l 0,1% TFA trong n%íc v B l Khèi l%îng ph©n tö cña c¸c toxin ®%îc x¸c 0,1% TFA trong 60% acetonitril trong n%íc. ®Þnh b»ng ph%¬ng ph¸p ®iÖn di theo Osterman Ch%¬ng tr×nh ch¹y cét: 0 - 40% B trong 5 phót [8]. v 40-100% B trong 25 phót. L%îng näc th« ®%a lªn cét mçi lÇn l 6 mg. III - kÕt qu¶ v th¶o luËn C¸c neurotoxin näc r¾n tiÕp tôc ®%îc t¸ch v tinh s¹ch tõ ph©n ®o¹n ®éc b»ng ph%¬ng ph¸p 1. T¸ch c¸c ph©n ®o¹n chøa toxin tõ näc r¾n s¾c ký láng cao ¸p víi cét ph©n tÝch Kromasil hæ ®Êt N. kaouthia C18 (4,6 × 250 mm, 10 µm), tèc ®é röa cét 1 Trong nghiªn cøu näc r¨n hæ ®Êt (N. ml/phót. Cét s¾c ký ®%îc röa b»ng gradient kaothia) chóng t«i ®( sö dông ph%¬ng ph¸p s¾c tuyÕn tÝnh cña c¸c dung dÞch sau: A l 0,1% ký láng cao ¸p ®Ó t¸ch c¸c ph©n ®o¹n chøa toxin TFA trong n%íc v B l 0,1% TFA trong 60% tr%c tiÕp tõ näc th« [6]. axetonitril trong n%íc. Ch%¬ng tr×nh röa cét: 0 - 30% B trong 10 phót, 30% - 100% B trong 60 B»ng ph%¬ng ph¸p n y tõ näc th« chóng t«i phót, v 100% B trong 70 phót. L%îng näc mçi ®( t¸ch ®%îc 8 ph©n ®o¹n (xem h×nh 1). Kh¶o lÇn ®%a lªn cét kho¶ng 50 - 100 µg. Sù cã mÆt s¸t ®éc tÝnh cña c¸c ph©n ®o¹n t¸ch ra trªn cña protein trong c¸c ph©n ®o¹n s¾c ký ®%îc chuét cho thÊy cã 6 ph©n ®o¹n cã ®éc tÝnh. ph¸t hiÖn b»ng quang phæ tö ngo¹i t¹i b%íc sãng Trong sè c¸c ph©n ®o¹n ®éc th× c¸c ph©n ®o¹n 254 nm. 4, 5 v 7 chøa c¸c protein cã khèi l%în ...