Thí nghiệm Sinh học phân tử - Bài 1

CÁC THIẾT BỊ CƠ BẢN CỦA MỘT PH BÀO THỰC VẬT a. Phòng rửa và cất nước - Máy cất nước 1 lần - Máy cất nước 2 lần b. Phòng hấp – sấy - Autoclave - Tủ sấy 60 – 200oC c. Phòng chuẩn bị môi trường - Cân phân tích (chính xác đến 0,0001 g)
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Thí nghiệm Sinh học phân tử - Bài 1Thí nghiệm Sinh học phân tử -1 B MỞ ^ 1.CÁC THIẾT BỊ CƠ BẢN CỦA MỘT PHBÀO THỰC VẬT a. Phòng rửa và cất nước - Máy cất nước 1 lần - Máy cất nước 2 lần b. Phòng hấp – sấy - Autoclave - Tủ sấy 60 – 200oC c. Phòng chuẩn bị môi trường - Cân phân tích (chính xác đến 0,0001 g) - Cân kỹ thuật (chính xác đến 0,01 g) - pH kế - Máy khuấy từ - Tủ lạnh - Lò vi sóng (microwave) d. Phòng thao tác nuôi cấy - Tủ cấy vô trùng (laminar) - Quạt thông gióThí nghiệm Sinh học phân tử -2 2.CÁC NHÂN TỐ ĐẢM BẢO THÀNH CÔVẬT Có 3 nhân tố chính: - Bảo đảm điều kiện vô trùng - Chọn đúng môi trường và chuẩn bị môi trư - Chọn mô cấy và xử lý mô cấy thích hợp tr 2.1. Ý nghĩa của vô trùng trong nuôi cấy m Môi trường để nuôi cấy mô và tế bào thực vthích hợp cho các loại nấm và vi khuẩn phát trlớn hơn rất nhiều so với tế bào thực vật, nếu trtử nấm hoặc vi khuẩn thì chỉ sau vài ngày đến một tuần, toàn bộ bề mặt mnhiều loại nấm và vi khuẩn. Thí nghiệm phải bkhông phát triển và chết dần. 2.2 Nguồn tạp nhiễm Có 3 nguồn tạp nhiễm chính: - Dụng cụ thuỷ tinh, môi trường nuôi cấy và trùng tuyệt đối - Trên bề mặt hoặc bên trong mô cấy tồn tại hoặc vi khuẩn - Trong quá trình thao tác làm rơi nấm hoặc mặt môi trườngThí nghiệm Sinh học phân tử -3 b. Nút đậy Thường dùng nhất là các nút đậy làm bằng bchặt để đảm bảo bụi không đi qua được, đồngdễ dàng trong quá trình nuôi cấy. Bông khôngcác nhược điểm sau: - Nếu khi hấp nút bông bị ướt hoặc dính môlà với những thí nghiệm tiến hành trong một th - Thao tác làm nút bông chậm, không thuận mô lớn - Chỉ dùng được vài lần là phải bỏ Hiện nay người ta sử dụng nhiều loại nắp đậdụng cụ nuôi cấy mô cung cấp loại nắp ống ngthể hấp vô trùng ở nhiệt độ 1210C mà không bống nghiệm bằng inox hoặc cao su rất thuận tiện cho việc vô tnhôm để làm nắp đậy… c. Môi trường Môi trường nuôi cấy thường được hấp khử táp suất hơi nước bão hòa. Thời gian hấp từ 15-kPa (1atm) tương đương với nhiệt độ 1210C. Ởmôi trường đều bị tiêu diệt, kể cả ở dạng bào tnghiệm hoặc nút bông để tránh bị nhiễm trở lạThí nghiệm Sinh học phân tử -4 2.3.2 Khử trùng mô thực vật Mô cấy có thể là hầu hết các bộ phận khác nhoa, lá, đầu rễ, thân củ…tuỳ theo sự tiếp xúc vnhiều hay ít vi khuẩn và nấm. Đòng lúa non khít bị nhiễm vi sinh vật; ngược lại, lá, thân đặc bcủ… có lượng nấm, khuẩn tạp rất cao. Hầu nhkhuẩn nằm sâu ở các tế bào bên trong mô chứvô trùng dễ dàng trong mùa khô nhưng khôngtrùng mô cấy thông dụng nhất hiện nay là dùngHiệu lực diệt nấm khuẩn của các chất này phụxâm nhập của chúng vào các kẽ ngách lồi lõmkhí bám trên bề mặt mô cấy. Để tăng tính linhkhuẩn, thông thường người ta xử lý mô cấy troxử lý dung dịch diệt khuẩn. Đồng thời người taTween 80, Fotoflo, Teepol vào dung dịch diệtgian sử dụng các chất diệt nấm khuẩn để xử lý(1974) ở bảng sau: Tác nhân vô trùng Nồng độ % Calci hypochlorit 9 – 10hân tử Biên soạn : -5- Khả năng hoạt độngại kháng sinh Ức chế sự sinh tổng h tác động lên các ribosom Gây trở ngại cho quá bằng cách ức chế enzym Ức chế sự tổng hợp v Ức chế sinh tổng hợp tác động lên ribosome 3 Ức chế sự sinh tổng hà sulphonamide Ức chế sự sinh tổng hl tác động lên Rbx 50S