Thí nghiệm trích ly DNA từ đậu hạt

Chuẩn bị nguyên liệu: Cho vào máy xay các nguyên liệu sau: - Nguồn nguyên liệu tươi chứa DNA (khoảng 100 ml hoặc nửa tách đậu hạt đã tách vỏ) - Một ít muối ăn (
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Thí nghiệm trích ly DNA từ đậu hạt Thí nghiệm trích ly DNA từ đậu hạtChuẩn bị nguyên liệu:Cho vào máy xay các nguyên liệu sau:- Nguồn nguyên liệu tươi chứa DNA (khoảng 100 mlhoặc nửa tách đậu hạt đã tách vỏ)- Một ít muối ăn (< 1 ml hoặc 1/8 muỗng cà phê)- Lượng nước đá lạnh gấp đôi lượng nguyên liệu (ở đâydùng khoảng 200 ml hoặc 1 tách nước)Xay tốc độ lớn trong 15 giây, máy xay sẽ tách các tế bàora.Cách làm:Sau khi có hỗn hợp nguyên liệu tế bào, tiến hành theo 3bước sau:1. Lọc dung dịch vừa xay, đo thể tích dịch và cho nướctẩy theo tỷ lệ 1/6 dịch xay (khoảng 30 ml hoặc 2 muỗngcanh) và khuấy đều, để ổn định hỗn hợp trong khoảng 5-10 phút. Sau đó, cho dung dịch vào đầy khoảng 1/3 ốngnghiệm hoặc cốc nhỏ. Bạn có thể thử dùng các loại nướctẩy có sẵn.2. Cho một ít enzyme vào mỗi ống nghiệm và khuấy đềunhẹ nhàng, lưu ý không khuấy quá mạnh sẽ làm vỡ DNAlàm cho khó nhìn thấy phát hiện ra DNA.Hãy sử dụng enzyme làm mềm thịt hoặc nước ép dứa haydung dịch làm sạch kính áp tròng.3. Nghiêng ống nghiệm và từ từ cho dung dịch cồn tiêuchuẩn vào (chứa 70-95% isopropyl or ethyl alcohol) hìnhthành một lớp váng mỏng trên mặt dung dịch đậu. Cholượng cồn vào ống nghiệm vừa bằng lượng hỗn hợp đậutrong ống nghiệm và DNA sẽ nổi lên đi vào pha rượu, cóthể dùng que để lấy DNA ra khỏi dung dịch.Rượu nhẹ hơn nước nên sẽ nổi lên trên hình thành 2 pharượu – nước trong hỗn hợp, protein và chất dầu mỡ sẽ đivào pha nước nằm ở phía dưới đáy, còn DNA ở phía lớptrên bề mặt pha rượu. Bạn sẽ thấy DNA là một phân tửchuỗi dài quấn rối với nhau.Bàn luận:Ngoài ra, bạn có thể thử thí nghiệm với các nguồn nguyênliệu khác nhau, bất kỳ nguyên liệu tươi nào cũng chứaDNA và tiến hành so sánh các loại DNA.Bạn cũng có thể sử dụng các loại xà phòng bột giặt. Hãyso sánh xem xà phòng bột và nước tẩy xem loại nào chothí nghiệm tốt hơn? Hãy thử với dầu gội đầu hoặc dungdịch xà phòng tắm xem thế nào?Hãy thử thay đổi các bước thí nghiệm trên hoặc bỏ khônglàm bước thí nghiệm nào đó, bạn có thể thay đổi thànhphần nguyên liệu sử dụng và quan sát thí nghiệm xảy ranhư thế nào?Hãy thử sử dụng những loại nguyên liệu khác mà bạn chorằng không chứa DNA?Nếu không thấy DNA, trước tiên hãy quan sát thật kỹ lớprượu xem có bong bóng nổi lên hay không, vì DNA có thểnằm trong bong bóng. Nếu không thấy nữa, hãy đảm bảonguồn nguyên liệu sử dụng chứa nhiều DNA như nho,hoặc nếu hỗn hợp chứa nhiều nước hay mờ đục sẽ khiếnkhó quan sát, hãy dùng ít nước trong giai đoạn đầu thínghiệm. Một nguyên nhân khác nữa có thể do thời gian,bảo đảm giai đoạn khuấy nước giặt ít nhất 5 phút, nếukhông tế bào vẫn dính vào màng hạt nhân sẽ lắng ở phầnđáy nước. Tương tự, để ổn định ống nghiệm chứa dungdịch đậu và rượu khoảng 30-60 phút, DNA sẽ kết tủa ởlớp rượu.DNA là những chuỗi xoắn nằm trong tế bào, kể cả khitrích ly, nó vẫn xoắn và kết bó với nhau.Đây là hỗn hợp DNA và RNA, đây thực sự là quá trìnhtrích ly acid nucleic, tuy nhiên hầu hết RNA bị cắt mạchbởi enzyme ribonucleases được hoạt hóa khi phá vỡ tếbào.Nếu quan sát sản phẩm qua kính hiển vi thì chỉ thấy 1chùm sợi DNA rối, do kích cỡ chiều rộng của 1 sợi DNArất nhỏ chỉ khoảng một phần tỷ mét, kể cả kính hiển viđiện tử cũng không thể quan sát được, người ta dùng kỹthuật tinh thể học X-quang để chụp hình phân tử DNA