Ức chế biểu hiện DTX3L làm giảm khả năng hình thành khối u của tế bào ung thư Melanoma B16F10 ở mô hình in vitro

Bài viết Ức chế biểu hiện DTX3L làm giảm khả năng hình thành khối u của tế bào ung thư Melanoma B16F10 ở mô hình in vitro đánh giá tác động của sự ức chế biểu hiện DTX3L lên khả năng hình thành khối u của tế bào B16F10 thông qua kĩ thuật làm tắt biểu hiện gen DTX3L bằng shRNA.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Ức chế biểu hiện DTX3L làm giảm khả năng hình thành khối u của tế bào ung thư Melanoma B16F10 ở mô hình in vitroBÁO CÁO KHOA HỌC VỀ NGHIÊN CỨU VÀ GIẢNG DẠY SINH HỌC Ở VIỆT NAM - HỘI NGHỊ KHOA HỌC QUỐC GIA LẦN THỨ 5DOI: 10.15625/vap.2022.0096ỨC CHẾ BIỂU HIỆN DTX3L LÀM GIẢM KHẢ NĂNG HÌNH THÀNH KHỐIU CỦA TẾ BÀO UNG THƯ MELANOMA B16F10 Ở MÔ HÌNH IN VITRO Nguyễn Đình Thắng1,*, Ichiro Yajima2 Tóm tắt. Deltex-3-like (DTX3L) là một enzyme ligase, thuộc họ Deltex (DTX), có liên quan quan đến một số bệnh ung thư, đặc biệt là lymphoma. Trong nghiên cứu trước, chúng tôi cũng đã phần nào chứng minh vai trò của DTX3L đến khả năng di căn của tế bào ung thư melanoma. Ở nghiên cứu này, chúng tôi tiếp tục đánh giá ảnh hưởng của DTX3L đối với khả năng hình thành khối u của dòng tế bào ung thư melanoma B16F10 suy giảm biểu hiện protein DTX3L (được gọi là cB16F10) trên mô hình in vitro. Kết quả nghiên cứu cho thấy tế bào cB16F10 có những sự thay đổi về hình thái tế bào, và quan trọng hơn là có sự giảm mạnh về khả năng hình thành khối u (khối 3-D) trong thí nghiệm in vitro so với tế bào đối chứng B16F10. Cụ thể, năng lực hình thành khối 3-D của cB16F10 chỉ còn 1/8 lần so với dòng tế bào B16F10. Kết quả nghiên cứu này khẳng định vai trò của protein DTX3L trong sự hình thành và phát triển của ung thư melanoma, và cho thấy tiềm năng sử dụng DTX3L như là một đích tác dụng trong điều trị melanoma. Từ khóa: Deltex-3-like, melanoma, sự sinh khối u.1. ĐẶT VẤN ĐỀ Melanoma là một trong những loại ung thư có đặc tính di căn rất cao và là nguyênnhân chính gây tử vong cho các trường hợp bệnh nhân ung thư da (Miller và cs., 2006).Deltex-3-like (DTX3L) là một ubiquitin E3 ligase có ở người. DTX3L có khả năng gắnkết với phân tử BAL1 (B Aggressive Lymphoma L) và tham gia vào sự phát sinh và tiếntriển của ung thư lymphoma tế bào B (Aguiar và cs., 2000; Takeyama và cs., 2003). Mứcđộ biểu hiện cao của gen DTX3L được tìm thấy trong nhiều mô khác nhau của chuột,trong đó cao nhất là ở tuyến ức (Hakme và cs., 2008). Các kết quả nghiên cứu cho thấyenzyme DTX3L có hoạt tính monoubiquitin hóa phân tử Histone H4 và thông qua đó thamgia điều hòa có chọn lọc trong đáp ứng với sự hư hỏng DNA. Vì vậy, sự tăng mức độ biểuhiện của DTX3L trong ung thư lymphoma là một trong những nguyên nhân gây ra sựkháng thuốc/tác nhân hóa trị liệu hướng mục tiêu diệt tế bào ung thư thông qua phá hủyDNA (Yan và cs., 2009; Yan và cs., 2013). DTX3L hình thành một phức hợp với ARTD8và ARTD9 và tham gia điều hòa biểu hiện của phân tử ức chế khối u IRF-1 ở tế bào ungthư tuyến tiền liệt mPCa (Bachmann và cs., 2014). Ngoài ra, trong nghiên cứu trước đây,chúng tôi thấy rằng sự ức chế biểu hiện DTX3L ở dòng tế bào ung thư melanoma B16F10làm giảm khả năng di căn của tế bào ở trên hai mô hình in vitro và in vivo (Thang và cs.,2015). Tuy nhiên, chưa có đánh giá về vai trò của DTX3L trong sự phát triển của khối unói chung cũng như trong ung thư da nói riêng. Vì vậy, trong nghiên cứu này, chúng tôihướng đến việc đánh giá tác động của sự ức chế biểu hiện DTX3L lên khả năng hình1 Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, Đại học Quốc gia Hà Nội2 Học viện Kỹ thuật Shibaura, Nhật Bản* Email: ndthang@hus.edu.vnPHẦN 2. NGHIÊN CỨU ỨNG DỤNG SINH HỌC PHỤC VỤ ĐỜI SỐNG VÀ PHÁT TRIỂN XÃ HỘI 857thành khối u của tế bào B16F10 thông qua kĩ thuật làm tắt biểu hiện gen DTX3L bằng sh-RNA.2. VẬT LIỆU VÀ PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨU2.1. Các dòng tế bào và chuột Tế bào B16F10 và chuột nude (sạch miễn dịch) được cung cấp từ Trung tâm Tàinguyên sinh học Riken (Riken Bio Resource Center). Tế bào B16F10 được nuôi trong môitrường RPMI-1640 có bổ sung 10 % huyết thanh thai bò (FBS) và 1 %penicillin/streptomycin trong tủ ổn nhiệt 37 oC và được cung cấp khí chứa 5 % CO2.2.2. Tạo dòng tế bào suy giảm biểu hiện DTX3L Silencing vector pRNAT-U6-1-Neo (Invitrogen) được sử dụng để tạo DTX3L-silencing vector, có mang gen mã hóa protein phát tín hiệu huỳnh quang (GFP). ĐoạnDNA mạch đôi chứa trình tự knockdown gen DTX3L được chèn vào giữa các vùng củaBamHI và HindIII. Vector đối chứng và DTX3L-silencing vector được chuyển nạp vàotrong các tế bào B16F10. Trình tự oligonucleotide của đoạn DNA: 5’-GATCCGCATGGAGGGTAGTGATGGAATTAATTCAAGAGATTAATTCCATCACTACCCTCCATGCTTTTTTA -3’; và 5’-AGCTTAAAAAAGCATGGAGGGTAGTGATGGAATTAATCTCTTGAATTAATTCCATCACTACCCTCCATGCG -3’. Các dòng tế bào với gen DTX3L bị làm câm được chọnlọc bằng cách nuôi trong môi trường có bổ sung 1 mg/ml neomycin (Wako).2.3. Phân tích biểu hiện protein Tế bào được phá vỡ bằng sóng siêu âm, tiến hành ly tâm ở tốc độ 1500 vòng/phúttrong 5 phút. Dịch nổi chứa protein tổng số được thu nhận. Protein đích cũng được thửnghiệm tách và tinh sạch bằng sắc kí cột với chất nền sắc kí ...