Áp dụng phương pháp sắc ký lỏng cao áp xác định một số carotenoids quan trọng trong thực phẩm

Phương pháp sắc ký lỏng cao áp (HPLC) đã được ứng dụng để xác định một số carotenoid quan trọng trong rau quả như lutein, zeaxanthin, lycopene, a-carotene và b-carotene. Hai phương pháp chính được khảo sát là phương pháp của Hart và Scott (1995) và phương pháp theo AOAC (1984). Các carotenoid được định tính và định lượng trên sắc ký lỏng với các detector UV-VIS và PDA. Hàm lượng các carotenoid chính trong một số loại rau, quả đã được xác định như sau: Lutein có nhiều nhất trong rau ngót và rau muống (5419,3 mg% và 867,9...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Áp dụng phương pháp sắc ký lỏng cao áp xác định một số carotenoids quan trọng trong thực phẩm Bé Y tÕ ViÖn Dinh d−ìng ----o0o---- B¸o c¸o nghiÖm thu ®Ò tµi nghiªn cøu cÊp ViÖn¸p dông ph−¬ng ph¸p s¾c ký láng cao ¸p x¸c ®Þnhmét sè carotenoids quan träng trong thùc phÈm CÊp qu¶n lý: CÊp c¬ së Chñ nhiÖm ®Ò tµi: Ths. Lª Hång Dòng Nêi thùc hiÖn: Khoa Hãa - ATVSTP Thêi gian thùc hiÖn: 9/2003 ®Õn 9/2004 Hµ Néi, th¸ng 12 - 2004 B¸o c¸o nghiÖm thu ®Ò tµi nghiªn cøu khoa häc cÊp ViÖn ¸p dông ph−¬ng ph¸p s¾c ký láng cao ¸p x¸c ®Þnh mét sè carotenoids quan träng trong thùc phÈm1. §Æt vÊn ®Ò Carotenoid lµ mét nhãm c¸c s¾c tè ®−îc tæng hîp trong thùc vËt vµ mét sèlo¹i vi sinh vËt. C¸c carotenoid ®−îc chia thµnh hai nhãm chÝnh: c¸c carotenoidnhãm hydrocarbon (carotene) vµ c¸c carotenoid chøa oxy (cßn gäi lµoxocarotenoid hay xanthophyll). C¸c xanthophyll cã nhãm hydroxyl (-OH) cãthÓ kÕt hîp víi acid bÐo thµnh carotenol ester [1]. Tíi nay ®· cã h¬n 700 lo¹icarotenoid ®−îc biÕt ®Õn trong tù nhiªn, trong ®ã kho¶ng 40 lo¹i th−êng cã mÆttrong chÕ ®é ¨n vµ kho¶ng 20 lo¹i lµ cã mét l−îng ®¸ng kÓ trong huyÕt thanh vµm« cña c¬ thÓ ng−êi. Trong sè ®ã, 6 lo¹i carotenoid chÝnh cã mÆt trong huyÕtt−¬ng vµ m« lµ α-carotene, β-carotene, lycopene (c¸c carotenoid nhãmhydrocarbon), β-cryptoxanthin, lutein vµ zeaxanthin (c¸c carotenoid nhãmxanthophyll) [2]. Trong c¬ thÓ ng−êi, c¸c carotenoid ®ãng nhiÒu vai trß quanträng. Ngoµi ho¹t tÝnh tiÒn vitamin A, nhiÒu nghiªn cøu ®· cho thÊy c¸ccarotenoid cã kh¶ n¨ng t¨ng c−êng hÖ thèng miÔn dÞch vµ lµm gi¶m nguy c¬m¾c c¸c bÖnh hiÓm nghÌo nh− ung th−, bÖnh tim m¹ch, tho¸i hãa vâng m¹c dotuæi t¸c vµ bÖnh c−êm [3,4,5,...12]. Nh÷ng t¸c dông sinh häc nµy cña carotenoid®éc lËp víi ho¹t tÝnh tiÒn vitamin A vµ lµ do ®Æc tÝnh chèng oxy hãa cña c¸ccarotenoid, th«ng qua t¸c dông lµm mÊt ho¹t tÝnh c¸c gèc tù do vµ dän dÑp oxynguyªn tö [13, 14, 15]. Vai trß tÝch cùc cña c¸c carotenoid trong chÕ ®é ¨n ®èivíi søc kháe con ng−êi ®· vµ ®ang lµ mèi quan t©m cña nhiÒu nhµ khoa häc, v×vËy ®ßi hái ph¶i cã sè liÖu thµnh phÇn cña tõng lo¹i carotenoid. HiÖn nay, c¸c ph−¬ng ph¸p ph©n tÝch carotenoid trong thùc phÈm ®ang®−îc ph¸t triÓn, bao gåm s¾c ký líp máng vµ s¾c ký láng cao ¸p, ®Ó thay thÕhoÆc bæ sung cho ph−¬ng ph¸p ph©n tÝch cæ ®iÓn (s¾c ký cét më - OCC) [16]. §Ó®Þnh tÝnh vµ ®¸nh gi¸ cÊu tróc carotenoid, c¸c ph−¬ng ph¸p phæ biÕn lµ quangphæ UV-VIS, phæ céng h−ëng tõ h¹t nh©n (NMR) vµ khèi phæ [17,18,19]. Ngoµira, ph−¬ng ph¸p x¸c ®Þnh b»ng ®iÖn hãa (ECD) còng lµ mét c«ng cô rÊt h÷u Ých,thay thÕ cho ph−¬ng ph¸p HPLC (UV-VIS) th«ng th−êng, trong nh÷ng tr−ênghîp ®ßi hái ®é nh¹y cao (cì 10-15) ®èi víi cì mÉu nhá hoÆc ph©n tÝch l−îng vÕt.Ph−¬ng ph¸p ®o quang phæ tö ngo¹i-kh¶ kiÕn (UV-VIS) th−êng ®−îc dïng ®Ó−íc l−îng tæng sè carotenoids, tuy nhiªn, ph−¬ng ph¸p s¾c ký láng cao ¸p (phath−êng vµ pha ng−îc, C18 vµ C30) ®−îc dïng phæ biÕn nhÊt ®Ó x¸c ®Þnh tõngcarotenoid riªng biÖt.Tuy hiÖn nay ch−a cã mét ph−¬ng ph¸p chuÈn ®Ó x¸c ®Þnh tÊt c¶ c¸c carotenoidtrong thùc phÈm nh−ng ph−¬ng ph¸p cña Hart vµ Scott [22], trªn thiÕt bÞ s¾c kýláng cao ¸p ®−îc sö dông réng r·i trong nhiÒu nghiªn cøu thµnh phÇn c¸ccarotenoid còng nh− trong mét sè thö nghiÖm liªn phßng [28].2. Môc tiªu nghiªn cøu 2.1. ¸p dông ph−¬ng ph¸p s¾c ký láng cao ¸p vµ kh¶o s¸t c¸c ®iÒu kiÖn ph©n tÝch c¸c carotenoid. 2.2. X¸c ®Þnh hµm l−îng α-carotene, β-carotene, lycopene, lutein, zeaxanthin trong mét sè rau qu¶ giµu carotenoid.3. Ph−¬ng ph¸p nghiªn cøu 3.1. Hãa chÊt, thuèc thö TÊt c¶ c¸c lo¹i hãa chÊt sö dông ®Òu thuéc lo¹i hãa chÊt tinh khiÕt ph©n tÝch.Methanol, ethanol, acetonitrile, petroleum ether, kali hydroxyt, natri sulfate khancña h·ng Merck (§øc), n-hexane cña h·ng Prolabo (Ph¸p), dichlomethane tõh·ng BHD (Anh). C¸c chÊt chuÈn β-carotene, α-carotene, lutein, zeaxanthin,lycopene ®−îc mua tõ h·ng Sigma (Mü). 3.2. HÖ thèng s¾c ký láng Hai hÖ thèng s¾c ký láng ®−îc sö dông trong nghiªn cøu nµy lµ hÖ thèng s¾cký ion víi c¸c detetor UV-VIS 2487, huúnh quang 2475, b¬m mÉu b»ng tay vµhÖ thèng s¾c ký axit amin víi c¸c detetor PDA 2996, huúnh quang 2475 vµ béb¬m mÉu tù ®éng cña h·ng Water (Mü). Cét s¾c ký sö dông lµ Symmetry C18(150mm x 4.6mm x 5µm) vµ Symmetry Shield RP18 (150mm x 4.6mm x 5µm)cña h·ng Water. Thµnh phÇn pha ®éng gåm acetonitrile : methanol (chøa 50mMammonium acetate) : dichlormethane víi tû lÖ t−¬ng øng lµ 75:15:10 (v/v/v). Tèc®é dßng lµ 1 ml/phót vµ nhiÖt ®é cét lµ 400C. C¸c carotenoid ®−îc ®Þnh l−îng ëb−íc sãng 450nm ®èi víi lutein, zeaxanthin, α-carotene, β-carotene vµ ë 476nm®èi víi lycopene. 3.3. ChuÈn bÞ dung dÞch chuÈn Lutein, α-carotene, β-carotene ®−îc hßa tan trong chloroform vµ thªmhexane (tû lÖ 1:9) ®Õn v¹ch ®Þnh møc. Zeaxanthin vµ l ...