Bài giảng Công nghệ di truyền: Chương 4 - Nguyễn Vũ Phong

Bài giảng "Công nghệ di truyền - Chương 4: Thư viện DNA bộ gene (DNA genomic library)" cung cấp cho người học các kiến thức: DNA genomic library là gì, thực hiện (phage hoặc cosmid), cDNA library, tổng hợp cDNA đuôi trùng hợp,... Mời các bạn cùng tham khảo nội dung chi tiết.

Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Bài giảng Công nghệ di truyền: Chương 4 - Nguyễn Vũ PhongThư viện DNA bộ gene(DNA genomic library) DNA genomic library là gì?• Tập hợp tất cả các đoạn DNA của bộ gene sinh vật.• Các đoạn DNA được tạo dòng trong các vector• Sử dụng nhằm phân lập một đoạn DNA hoặc xác định vị trí của đoạn DNA trên bộ geneThực hiện (phage hoặc cosmid)RESiêu âm-----------B1. Cắt bộ gene bằng RE• Sử dụng các RE có trình tự nhận biết gồm 4 nu• Cắt từng phần để thu được lượng lớn gene nguyên vẹn.• Sử dụng DNA tách từ các loại mô khác nhau• Cắt vector với cùng RE để tạo đầu cố kết• Có thể sử dụng 2 RE để tránh tự kết nối.B2. Tạo dòng• Plasmid: hạn chế đối với đoạn DNA kích thước lớn, hiệu suất biến nạp tương đối thấp.• Phage : phổ biến nhất, mang DNA ~ 20 kb• Cosmid: mang đoạn DNA ~ 40 – 50 kb• BAC : hữu hiệu nhất – Mang đoạn DNA lớn 100 – 300 kb – Ít hình thành thể khảm – Hiệu quả trong tạo dòng và thu hồi DNA – Duy trì sự ổn định của DNA gắn trong vector• YAC : nhận đoạn DNA lớn, khó thao tác.B3. Chuyển nạp vào tế bào chủ• Hóa biến nạp• Điện biến nạp• Đóng gói DNA tái tổ hợp (phage  hoặc cosmid) và cho xâm nhiễm tế bào vi khuẩn cDNA libraryTại sao cần xây dựng thư viện cDNA ?Tách chiết, tinh sạch và phân tích RNA1) Tách chiết RNA tổng số - Nguyên lý: tách rời RNA ra khỏi hỗn hợp DNA , protein,… - Kiểm soát ribonuclease (RNase) = chất ức chế2) Tách chiết mRNA - Đuôi poly A - Tách bằng sắc ký ái lực oligo dT - Thu nhận bằng ly tâmTổng hợp cDNA theo pp RNaseHTổng hợp cDNA self primingTổng hợp cDNA đuôi trùng hợpTạo dòng cDNA = hệ thống dG:dCTạo dòng cDNA bằng 1 linker