BÀI GIẢNG NUÔI CẤY MÔ THỰC VẬTnfnfnf

Nghiên cứu nuôi cấy mô Invitro là một thành tựu khoa học lớn của loài người. Ứng dụng công nghệ này trong việc nuôi cấy mô một số loại cây trồng đặc sản đã và đang đem lại nhiều hứa hẹn để Bắc Kạn phát triển kinh tế nông- lâm nghiệp.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
BÀI GIẢNG NUÔI CẤY MÔ THỰC VẬTnfnfnf BÀI GIẢNGNUÔI CẤY MÔ THỰC VẬT 1 MỤC LỤCBài 1. Phương pháp pha ch ế môi trư ờng nuôi cấy mô thực vật ................................ ............. 2Bài 2. Phương pháp khử trùng mô thực vật .......................................................................... 8Bài 3. Khử trùng nuôi cấy chồi ngủ cúc và hạt cam ........................................................... 12Bài 4. Vi nhân giống dứa bằng nuôi cấy chồi ngủ .............................................................. 15Bài 5. Phương pháp nuôi cấy tạo mô sẹo ở thực vật ........................................................... 20Bài 6. Kỹ thuật tạo áo bao hạt giống nhân tạo ................................ ................................ .... 25Bài 7. Phương pháp tách và nuôi cấy đỉnh sinh trưởng................................ ....................... 30Bài 8. Phương pháp vi ghép ở thực vật............................................................................... 34Bài 9. Phương pháp thuần hoá cây ra vư ờn ươm ................................................................ 38TÀI LIỆU THAM KHẢO .................................................................................................. 42 2 BÀI I PHƯƠNG PHÁP PHA CHẾ MÔI TRƯỜNG NUÔI CẤY MÔ THỰC VẬT1 - NGUYÊN TẮC 1.1 - Nguyên tắc pha chế môi trường Môi trường nuôi cấy mô thực vật khác với các loại môi trường nuôi cấy vi sinh làcó thành phần rất phức tạp, sự hiện diện của rất nhiều loại hoá ch ất với hàm lượng rấtnhỏ. Do vậy, để thuận tiện cho việc pha các môi trư ờng nuôi cấy (môi trường làm việc),người ta không cân hoá chất mỗi lần pha môi trường m à chu ẩn bị trước dưới dạng nhiềuloại dung dịch với độ đậm đặc từ X10 – X100, ch ỉ cần pha với nước cất hai lần hay n ướcvô khoáng khi sử dụng. Các dung dịch này gọi là dung dịch mẹ (stock). Dung dịch mẹđược bảo quản dài ngày trong tủ lạnh thường hoặc tủ lạnh sâu. Thông thường pha cácdung d ịch mẹ: stock đa lượng, stock vi lượng, Fe – EDTA, stock vitamin, stock ch ất sinhtrưởng, và các stock cần thiết khác. 1.2 - Phân loại môi trường nuôi cấy mô thực vật Tùy theo thành ph ần các chất có trong môi trường, có thể phân th ành 3 loại môitrường: - Môi trường nghèo chất dinh dưỡng: như môi trường White, Knop. Môi trường nàythích h ợp vào các giai đo ạn cuối của quy trình nuôi cấy mô thực vật khi chuẩn bị chuyểncây từ ống nghiệm ra vườn ươm. Môi trường nghèo chất dinh dưỡng cũng có thể sử dụngtrong các sinh trắc nghiệm để kiểm tra đặc tính biến d ưỡng của mô thực vật. - Môi trường có hàm lượng chất dinh dưỡng trung bình: môi trường B5, Gamborg.Loại môi trường n ày được sử dụng đối với một số loại cây có nhu cầu các chất dinhdưỡng trong môi trường vừa phải hoặc cũng có thể sử dụng khi nuôi cấy mô thực vật dàingày. - Môi trường giàu chất dinh dường: môi trường MS (Murashige – Skoog). Đây làmôi trường khởi đầu cho mọi quá trình nuôi cấy mô đối với mọi đối tượng nuôi cấy. Môitrường MS là một môi trường thích hợp với nhiều loại cây, do giàu và cân bằng về chấtdinh dưỡng.2 - NGUYÊN LIỆU - HOÁ CH ẤT - DỤNG CỤ 2.1 - Hoá chất - Saccharose (sucrose) - Agar - NH4NO3 - KNO3 - MgSO4.7H2O - KH2PO4 - CaCl2.5H2O 3 - KI - Na2MoO4.2H2O - CoCl2.6H2O - H3PO3 - MnSO4.4H2O - ZnSO4.7H2O - CuSO4.5H2O - Thiamine HCl - Myo-inositol - Glycine - NAA - BA (6-Benzyl aminopurin) - Na2-Ethylen diamin tetraacetat (Na2 EDTA -Fe2(SO4)32.2 - Dụng cụ – Thiết bị cần cho 1 nhóm (30 sinh viên) thực hành Số Đơn vịSTT Tên dụng cụ, thiết bị Ghi chú tính lượng - Bình định mức: 100 ml 1 cái 10 - Bình định mức: 500 ml 2 cái 3 - Ống đong: 100 ml 3 cái 12 - Ống đong 500 ml 4 cái 3 - Đũa khuấy 5 cái 15 6 - Bình màu 200 ml cái 5 - Qu ả bóp cao su 7 cái 15 - Bể ổn nhiệt Dùng để pha Fe-EDTA 8 cái 1 - Cốc 100 ml 9 cái 30 - Cốc 200 ml10 ...