Bài thuyết trình Kỹ thuật PCR và Ứng dụng trong Y học

Nhờ phát minh kĩ thuật PCR màngành sinh học phân tử và nhiều ngànhkhoa học khác có sử dụng kĩ thuật sinh họcphân tử được tiếp cận với một phương phápmới đem lại kết quả có ý nghĩa to lớn, trongđó có các nghiên cứu về các lĩnh vực y tế,khoa học đời sống. PCR là phương phápđơn giản, dễ thực hiện, có độ nhậy và tínhđặc hiệu rất cao; do đó, PCR rất thích hợpcho xét nghiệm chẩn đoán trong lĩnh vực yhọc....
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Bài thuyết trình Kỹ thuật PCR và Ứng dụng trong Y học Dương Văn Tuân Phan Kiều Trang Nguyễn Anh Tuấn Phan Thị Lệ Thuý Phan Văn Tuấn Đặng Thị Hoàng Yến Đặng Xuân Viên Nguyễn Thị Thu Thuỷ Đào Thị Hồng Thu Nguyễn Thị Trang Bùi Thị Nguyên Trâm Hoàng Thị Thuỷ Tiên Đặtvấnđề• NhờphátminhkĩthuậtPCRmà ngànhsinhhọcphântửvànhiềungành khoahọckháccósửdụngkĩthuậtsinhhọc phântửđượctiếpcậnvớimộtphươngpháp mớiđemlạikếtquảcóýnghĩatolớn,trong đócócácnghiêncứuvềcáclĩnhvựcytế, khoahọcđờisống.PCRlàphươngpháp đơngiản,dễthựchiện,cóđộnhậyvàtính đặchiệurấtcao;dođó,PCRrấtthíchhợp choxétnghiệmchẩnđoántronglĩnhvựcy học. • I. Giới thiệu nguyên lý kỹ thuật PCR• II. Nguyên lí hoạt động của PCR• III. Một số ứng dụng của PCR trong y học• Giới thiêu các bước cơ bản của kỹ thuật PCR trong việc lấy mẫu đem phân tích• 1. Xác định quan hệ huyết thống• 2. Xác định bệnh lao nhờ vsv• 3. Xác định bệnh HIV, HBV, HCV, KST, Dengue virus• 4. Ứng dụng kỹ thuật PCR xác định thành phần , cơ cấu ký sinh trùng sốt rét I.GiớithiệunguyênlýkỹthuậtPCR• Dựavàocơchếtổnghợpgenđặchiệutrong tếbào,nhàhóasinhngườiMĩKarryMullis đãphátminhrakĩthuậttổnghợpgentrong ốngnghiệm(PCR)vàonăm1985.PCRlà phươngphápinvitrođểtổnghợpmộtđoạn DNAđặcthùnhờcônghiệucủa2mồi oligonucleotidegắnvào2sợiđôicủađoạn DNAđíchvớisựthamgiacủaDNA polymerase. • PhảnứngPCRđượcthựchiện qua3giaiđoạntrong1chukì: Giaiđoạnbiếntính (denaturation) Giaiđoạnbắtcặp(annealing) Giaiđoạnkéodài(elongaction) Chukìnàyđượclặpđi lặplạitừ2040lầnvàchora cácsảnphẩmcuốicùngcủaPCR làcácđoạnDNAhoặcRNA phiênbản.Sốlượngcácbảnsao nàyđượctínhtheohàmsốmũ. MáyPCR II.NguyênlíhoạtđộngcủaPCR1. Các thành phần tham gia vào phản ứng PCR ( PCR mix):• - DNA khuôn• - Taq. DNA polymerase.• - d NTPs (dATP, dCTP, dGTP, dTTP).• - Primer ( oligonucleotide).• - PCR buffer.2. Ba giai đoạn phản ứng PCR thực hiện trên máy luân nhiệt (Thermalcycles) - Giai đoạn biến tính (denaturation): 92 – 98 độ C- Giai đoạn bắt cặp (annealing) 45 thoi gian 20s-2phut- Giai đoạn kéo dài (elongaction) nhiệt độ 68-72 Giới thiêu các bước cơ bản của kỹ thuật PCR trong việc lấy mẫu đem phân tích Các bệnh phẩm y học ↓ Ly trích pre - nucleic acide ↓ Ly trích acide nucleic tinh khiết ↓ PCR ( RT - PCR) Thực hiện xét nghiệm chẩn ↓ đoán bằng PCR Phân tích phát hiện sản phẩm PCR bằng quang phổ hay điện di Sáu khâu chính của quy trình xét nghiệm bằng kỹ thuật PCR • 1. Lấy mẫu: ADN có thể tách chiết từ những mẫu khác nhau, như máu tươi, máu khô, tế bào niêm mạc, nước xúc miệng, tóc, da, phân, v.v... Mẫu có thể lấy tại chỗ hoặc gửi từ xa hàng nghìn kilômet, mất nhiều Lấy mẫu đem phân tích ngày, trong phong bì bình thường, qua bưu điện, không cần bảo quản lạnh. • 2.TáchchiếtADN:Nhiều quytrìnhtáchchiếtADN khácnhaucủathếgiớiđã đượcnghiêncứu,thửnghiệm vàthíchứngvớiđiềukiện nướcta.Dovậy,gópphần giảmgiáthành,tiếtkiệm kinhphí.Vớimỗiloạimẫucó Tách chiết ADN mộtquytrìnhtáchchiết thíchhợpriêng.Đảmbảo chấtlượngvàsốlượngADN từnhữnglượngmẫunhỏ. • 3. Nhân ADN đặc hiệu: Đây là khâu quan trọng nhất của quy trình. Các hỗn hợp hoá chất khác nhau và các chu trình nhiệt khác nhau đã được thử nghiệm cho từng cặp mồi. Trên cơ sở đó, đã Nhân ADN đặc hiệu tối ưu hoá thành phần của từng hỗn hợp, từng chu trình nhiệt cho từng cặp mồi, dựa vào những hoá chất sẵn có trên thị trường• 4.Điệndi:Điệndiđượcdùng đểtáchbiệtcácđoạnADNcó độdàingắnkhácnhau.Độtách biệtnàyphụthuộcnhiềuyếu tố.Cácyếutốđãđượclựachọn vàtốiưuhoátrêncơsởvậtliệu sẵncó,hạgiáthànhđángkểvà tăngđộphângiảilênhàngtrăm Điện di lần,giúpphânbiệtrõcácđoạn ADNchỉchênhlệchnhaubốn nucleotid. • 5. Nhuộm màu ADN:Chất lượngđiệndivàkếtquảnhân ADNđặchiệuchỉcóthểhiện rõtrênbảngelvớiquytrình nhuộmADNđượctốiưuhoá vàphươngphápnhuộmthích ...