Báo cáo nghiên cứu khoa học: Sử dụng kỹ thuật PCR-RFLP trong nghiên cứu đa hình gen liên quan đến chất lượng thịt lợn

Gen, gien, ren hay di tố là một đoạn DNA mang một chức năng nhất định trong quá trình truyền thông tin di truyền. Trên nhiễm sắc thể, một gen thường có một vị trí xác định và liên kết với các vùng điều hòa phiên mã và các vùng chức năng khác [1] để bảo đảm và điều khiển hoạt động của gen.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Báo cáo nghiên cứu khoa học: "Sử dụng kỹ thuật PCR-RFLP trong nghiên cứu đa hình gen liên quan đến chất lượng thịt lợn"T P CHÍ KHOA H C, ð i h c Hu , S 64, 2011 S D NG K THU T PCR-RFLP TRONG NGHIÊN C U ðA HÌNH GEN LIÊN QUAN ð N CH T LƯ NG TH T L N H Trung Thông, H Lê Quỳnh Châu Trư ng ð i h c Nông Lâm, ð i h c Hu TÓM T T Nghiên c u này ñã ñư c th c hi n nh m xác ñ nh ña hình các ki u gen PSS và leptinliên quan ñ n ch t lư ng th t l n. Chín m u DNA t ng s c a l n Ki ng S t ñã ñư c nh n d ngki u gen b ng k thu t RFLP-PCR v i các c p primer ñ c hi u. K t qu nghiên c u ña hìnhgen leptin cho th y, t n s ki u gen AA chi m t l cao nh t (77,78%), ki u gen GA và GG chi mt l th p (11,11%). Ngoài ra, phân tích ña hình gen PSS cũng ch ra r ng h u h t các m unghiên c u ñ u có ki u gen ñ ng h p t NN, ch có 1 m u có ki u gen d h p t Nn. K t qunghiên c u này là d li u quan tr ng trong công tác phát tri n gi ng l n Ki ng S t theo ñ nhhư ng cho ch t lư ng th t cao, ñ ng th i là cơ s ñ ñưa ra các phương án b o t n ngu n genquý gi ng l n b n ñ a này. T khóa: ch t lư ng th t l n, ña hình gen, PCR-RFLP.1. ð t v n ñ Theo Sellier (1998), ch t lư ng th t ch u s tác ñ ng c a nhi u nhân t như ñ cñi m c a cơ (lo i và kích thư c s i cơ, m và mô liên k t), ñi u ki n s n xu t và môitrư ng (t c ñ sinh trư ng, dinh dư ng, tu i, các ñi u ki n trư c khi gi t m , quá trìnhchín sau khi m th t) và di truy n ñ ng v t (gi ng, ki u gen). Vi c nh n bi t các genñi u khi n ch t lư ng là hư ng ti p c n có nhi u tri n v ng trong nghiên c u c i thi ncác tính tr ng ch t lư ng th t (Fávero 2002, trích d n theo Band và cs 2005). ð n nay,nhi u gen nh hư ng ñ n ch t lư ng th t ñã ñư c xác ñ nh. Gen PSS (porcine stresssyndrome) hay ryr1 là m t trong nh ng v trí tính tr ng ñ u tiên l n ñư c mô tm c ñ phân t . Fujii và cs (1991) ñã ñ xu t m t test quan tr ng giúp sàng l c ch tlư ng th t l n d a vào vi c xác ñ nh ñ t bi n gây b nh trên gen PSS. Test này giúp cácnhà ch n gi ng tách chính xác ba ki u gen PSS (NN, Nn và nn) và cho phép nghiên c uchi ti t hơn v tác ñ ng c a ñ t bi n gen PSS lên ch t lư ng th t. Bên c nh ñó, m i liênquan gi a ña hình gen leptin v i các tính tr ng v t c ñ sinh trư ng, t l n c và m ctiêu th th c ăn trong qu n th l n cũng ñã ñư c phát hi n (Hardge và cs 1998). K tqu phân tích m i tương quan gi a ña hình gen leptin v i tính tr ng ch t lư ng th t t249 m u c a nhi u gi ng l n khác nhau c a Kuryl và cs (2003) cũng ñã cho th y genleptin liên quan ñ n tính tr ng ch t lư ng th t l n và kh năng tăng tr ng. S d ng kthu t PCR-RFLP có th giúp nh n bi t chính xác các cá th mang ki u gen khác nhau 167trong th i gian ng n. Vì v y, nghiên c u này ñã ñư c th c hi n nh m xác ñ nh ña hìnhcác ki u gen PSS và leptin trên gi ng l n Ki ng S t, làm cơ s cho vi c ch n gi ngchính xác hơn theo ñ nh hư ng nâng cao ch t lư ng th t gi ng l n b n ñ a sau này.2. V t li u và phương pháp nghiên c u 2.1. Thu m u máu l n M u máu c a 9 con l n Ki ng S t ñư c s d ng ñ nghiên c u ña hình hai genleptin và PSS. B m t da vùng tai l n ñư c sát trùng b ng dung d ch alcohol 70%. Sauñó, dùng kim tiêm vô trùng l y 1 ml máu tĩnh m ch tai l n cho vào ng EDTA n pxanh (HEMATOLOGIE: NFS-FLAQ), ñ o ng vài l n ñ tr n ñ u m u máu và dungd ch ch ng ñông. M u máu ñư c gi nhi t ñ phòng trong 24 gi trư c khi ñư c sd ng ñ tách chi t DNA t ng s ho c -20oC n u chưa dùng ngay. 2.2. Tách chi t DNA t ng s DNA t ng s ñư c tách chi t t các m u máu toàn ph n b ng EzWayTMGenomic DNA kit (Koma Biotech). N ng ñ dung d ch DNA t ng s ñư c xác ñ nhtrên máy quang ph (SmartSpecTM300, Biorad) bư c sóng λ260/280nm. Ch t lư ngDNA ñư c ki m tra thông qua ñi n di trên agarose gel 0,8% 100V. 2.3. Phân tích ña hình gen leptin l n Ki ng S t ðo n gen leptin (LEP) mã hóa hormone Leptin liên quan ñ n kh năng tích lũym và ch t lư ng th t l n ñư c ti n hành phân tích ña hình gen b ng k thu t PCR-RFLP. Ph n ng khu ch ñ i DNA ñư c th c hi n d a trên c p primer ñ c hi u LEP1: 5’CCCTGCTTGCAGTTGGTAGC 3’và LEP2: 5’ CTGCCACACAAGTCTTGCTC 3’(Lê Th Thúy và cs, 2004), s n ph m khu ch ñ i có kích thư c 658 bp. PCR ñư c th chi n trong 25 l g m 1,25 ñơn v Taq DNA polymerase, 10 pmol m i lo i primer, 1×ñ m PCR, 200 M dNTPs, 2 mM MgCl2 và 200 ng DNA t ng s . ði u ki n PCR:94oC/4 phút; ti p theo là 30 chu kỳ: 94oC/1 phút, 68oC/1 phút và 72oC/1 phút; cu i cùng72oC/10 phút. S n ph m PCR ñư c ki m tra b ng ñi n di trên agarose gel 1% 100V. S n ph m PCR c a gen leptin ñư c phân tích ña hình b ng k thu t RFLP v iHind III (Lê Th Thúy và cs, 2004). Ph n ng ñư c th c hi n trong 25 l bao g m 1×ñ m, 5 ñơn v Hind III, 20 µl s n ph m PCR và ñư c qua ñêm 37oC, sau ñó ñi n di ...