Báo cáo Vi sinh ứng dụng

Nhận dạng Vibrio spp thu được trên môi trường CPC agar từ mẫu nước biển tự nhiên.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Báo cáo Vi sinh ứng dụng TRƯỜNG ĐẠI HỌC NHA TRANG KHOA NUÔI TRỒNG Báo cáo Vi sinh ứng dụngChủ đề 4: Nhận dạng Vibrio spp thu được trên môi trường CPC agar từ mẫu nước biển tự nhiên 1.Mở đầu Như đã biết thì vi khuẩn (chẳng hạn như Vibrio spp) là một trong những nguyên nhân gây bệnh nguy hiểm cho các đối tượng nuôi trồng thủy sản cũng như những tác hại của chúng với sức khỏe con người. Song những hiểu biết và những nghiên cứu về chúng đến thời điểm hiện tại cũng đang còn nhiều hạn chế. Do đó việc nghiên cứu, phân lập, nhận dạng chúng để có những hiểu biết sâu sắc từ đó làm cơ sở cho việc chẩn đoán và phòng trị bệnh có vai trò to lớn trong nuôi trồng thủy sản cũng như trong việc bảo vệ sức khỏe con 2. Nội dung Trong quá trình nghiên cứu, phân lập để xác định các loài vi sinh vật các nhà khoa học đã sử dụng các môi trường khác nhau để tiến hành phân lập. Từ đó tiến hành nhận diện và tìm hiểu kĩ hơn về các Vi sinh vật bằng các phương pháp nghiên cứu khác. Môi trường CPC (cellobiose-polymixin B-colistin agar) được sử dụng để thử nghiệm phân lập xác định Vibrio vulnificus từ những mẫu nước trong môi trường tự nhiên. Ngoài ra từ môi trường này có thể tạo ra các môi trường phân lập khác bằng cách : +Pha trộn tỉ lệ môi trường của CPC khác nhau +Giảm nông độ Colistin trong môi trường nuôi cấy +Loại bỏ một thành phần nào đó của CPC agar CPC agarMẫu nước tự nhiên/mẫu ĐVTS Phương pháp cấy vạch ước lượng mật độ của Vibrio vulnificus. Những cuộc điều tra gần đây về V. vulnificus như của Arias và cộng sự đã tiến hành nghiên cứu mẫu nước biển và mẫu động vật thủy sản tại khu vực ven bờ biển Tây Ban Nha thuộc biển Địa Trung Hải: CPC agarMẫu nước tự nhiên/mẫu ĐVTS TCBS agar các khuẩn lạc Đặ c điểm hình thái Kiểm tra PCR Giả định đó là V. vulnificus (các đoạn mồi đặc biệt) Kết luận ? (nhanh, chính xác)Các khuẩn lạc của Vibrio vulnificustrên các môi trường TCBS và CPCV. vulnificus Trong quá trình nghiên cứu đó, V. vulnificus đã được phát hiệnđầu tiên ở vùng biển Tây Ban Nha thuộc biển Địa Trung Hải. Nhưngchỉ có 7.6% khuẩn lạc phát triển và nhận dạng được thông quanhững đặc điểm về hình thái của V. vulnificus (đã kiểm chứng bằngPCR). Những khuẩn lạc không thể kiểm chứng được bằng PCR thìsẽ không được nhận dạng. Người ta đã tiến hành việc xác định một số dòng tiêu biểu thuđược trên môi trường CPC agar. Trong những nghiên cứu đó đã thấysự xuất hiện của các loài tương tự như V. vulnificus nhưng chưađược kiểm chứng một cách chắc chắn Kết quả thu được nếu sai lệch thì do : +Sự thiếu chính xác của phương pháp PCR +sự có mặt của vi khuẩn cạnh tranh khác (chúng có đặc điểm hình thái tương tự như V. vulnificus). Bảng : đặc điểm sinh hóa một số loài VibrioĐặc điểm sinh hóa V. parahaemolyticus V. harveyi V. alginolyticus V. anguillarum V. vulnificus Nhuộm Gr - - - - - Di động + + + + + Phản ứng Oxydase + + + + + Phát triển ở 370C + + + + + Màu kh lạc / TCBS Xanh Xanh Vàng Vàng XanhArginine dyhidrolase - - - - -Lysine decarboxylase + + + - + Khử Nitrat + + + + +Phát triển ở 0%NaCl - - - - -Phát triển ở 3%NaCl + + + + +Phát triển ở 7%NaCl + + + - - Để nhận diện những loài không phải Vibrio các nhà nghiên cứuđã chọn ra 284 chủng mà đã xác định không phải là V. vulnificus đểphân lập trên CPC agar Trong 284 chủng được phân lập thì có 57 thể phân lập là nhữngloài thuộc Vibrio không được nhận dạng. Những chủng này có kếtquả dương tính với Arginine dehidrolase và chỉ một số chúng âm tínhvới Decacboxylase. ...