Biệt hóa in vitro các tế bào mầm từ mảnh mô tinh hoàn chuột

Nghiên cứu được thực hiện với mục tiêu nhằm xác định sự biệt hóa in vitro các tế bào mầm trong tinh hoàn thành các tế bào tinh trùng trưởng thành. Nghiên cứu thực hiện trên các mẫu mô tinh hoàn chuột trưởng thành được thu nhận để phân lập các tế bào mầm.Các tế bào mầm và các tế bào đã biệt hóa như Sertoli được đồng nuôi cấy trong môi trường GAMETE-100 bổ sung với hormone FSH và testosteron.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Biệt hóa in vitro các tế bào mầm từ mảnh mô tinh hoàn chuộtBIỆT HÓA IN VITRO CÁC TẾ BÀO MẦM TỪ MẢNH MÔ TINH HOÀN CHUỘTPhạm Văn Phúc*, Trương Định*, Huỳnh Thị Lệ Duyên*, Phan Kim Ngọc*TÓMTẮTMục tiêu: Xác định sự biệt hóa in vitro các tế bào mầm trong tinh hoàn thành các tế bào tinh trùngtrưởng thành.Phương pháp: Các mẫu mô tinh hoàn chuột trưởng thành được thu nhận để phân lập các tế bào mầm.Các tế bào mầm và các tế bào đã biệt hóa như Sertoli được đồng nuôi cấy trong môi trường GAMETE-100bổ sung với hormone FSH và testosteron. Các mẫu nuôi cấy được đánh giá sau 24 giờ và 48 giờ. Sự trưởngthành của tế bào mầm được đánh giá thông qua sự hình thành đuôi (tiêm mao).Kết quả: Các tế bào mầm tồn tại trong tinh hoàn có thể thu nhận và nuôi cấy in vitro. Các số liệu thuđược cho thấy với nồng độ FSH là 50 IU/ml và testosteron là 1 µM/ml thì thích hợp cho việc nuôi cấy vàbiệt hóa các tế bào mầm thành tinh trùng.Kết luận: FSH có vai trò quan trọng lên sự trưởng thành của tế bào mầm, trong khi đó testosteron hầunhư không có tác động đó. Tuy nhiên, việc kết hợp FSH và testosteron sẽ cho kết quả cao hơn khi chỉ sửdụng FSH hay testosteron.ABSTRACTIN VITRO GERM CELLS DIFFERENTIATION OF MOUSE TESTICULAR TISSUESPham Van Phuc, Truong Dinh, Huynh Thi Le Duyen, Phan Kim Ngoc* Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 11 - No 4 - 2007: 219 - 223Objective: To identify in vitro germ cells differentiation of mouse testicular tissues to mature sperms.Method: Testis tissues derived from mouse adult testis is used for isolation germ cells. Germ cells andsome of different cells such as Sertoli are co-cultured in vitro in medium GAMETE-100, plus with FSH andTestosterone. After 24 and 48h of culture, progression of spermatogenesis and percentage of matured germcells are evaluated. Maturation of germ cells are evaluated via appearance of tails (flagella).Result: Germ cells of testicular tissues can be is olated and cultured in vitro. Data showed that suitableFSH concentration is 50 IU/L and testosterone is 1 µM/L.Conclusion: FSH has an important role in maturation of germ cells. In contrast with FSH, testosteronedoes not almost stimulate germ cells maturation. However, combination of FSH and testosterone canresulted in maturation of germ cells better than if using only FSH or testosterone.ĐẶTVẤNĐỀTrong quá trình phát triển phôi, tế bào mầm hình thành và di cư vào cơ quan sinh dục. Khácvới các cá thể cái, toàn bộ tế bào mầm đều đi vào quá trình giảm phân và ngừng ở prophase II;trong khi đó các tế bào mầm của cá thể đực lại nguyên phân và đến tuổi dậy thì bắt đầu giảmphân. Do đó, trong cơ thể trưởng thành, ở tinh hoàn vẫn tồn tại một lượng lớn tế bào mầm sinhtinh(2).Trong một số trường hợp vô sinh ở người, sự ngừng phân chia của các tế bào mầm trong cơ thểđực không được kích hoạt thích hợp cho tiếp tục giảm phân bình thường; hậu quả là không có tinhtrùng trưởng thành hình thành. Các nghiên cứu gần đây cho thấy các tế bào mầm trong cơ thểtrưởng thành của cá thể đực có thể tiếp tục quá trình giảm phân tạo tinh trùng trưởng thành in220* Trường Đại học Khoa học Tự nhiên, ĐH Quốc Gia TP. HCMvitro. Trong môi trường nuôi cấy, FSH và testosteron được chứng minh là có vai trò trong sựtrưởng thành của tế bào mầm sinh tinh in vitro(4,5).Với kĩ thuật này, người ta đang hi vọng vào một phương pháp điều trị vô sinh mới kết hợp với kĩthuật ICSI (vi tiêm tinh trùng vào bào tương trứng). Theo phương pháp này: đầu tiên các mảnh sinhthiết tinh hoàn được thu nhận, sau đó chúng được nuôi cấy biệt hóa invitro thành các tinh trùng trưởngthành và cuối cùng sử dụng kĩ thuật ICSI để vi tiêm nó vào trứng(3). Ngoài ý nghĩa điều trị vô sinh, việcnuôi cấy biệt hóa in vitro các tế bào mầm tinh hoàn thành tinh trùng trưởng thành còn ý nghĩa lớntrong bảo tồn giống, bảo tồn nguồn gen.Trong nghiên cứu này, chúng tôi sử dụng các mảnh biểu mô tinh hoàn của chuột trưởng thành đểthu nhận tế bào cho nuôi cấy. Đây xem như là một mô hình cho các nghiên cứu xa hơn.ĐỐITƯỢNGVÀPHƯƠNGPHÁPThu nhận tinh hoànChuột đực trưởng thành bị giết chết bằng kéo dãn khớp cổ. Giải phẫu, kéo tuột lớp da đến hếthai tinh hoàn. Thu nhận hai tinh hoàn, cho vào dung dịch PBSA Thu nhận tế bào đơnCác mảnh mô tinh hoàn được đặt vào trong môi trường GAMETE-100 (Vitrolife). Tiến hành ép cácmảnh mô bằng hai miếng lame sạch. Các mảnh mô này được phân tách một phần bởi lực cơ học. Sauđó, chuyển toàn bộ các mảnh mô sau khi ép vào dung dịch collagenase IV (1000 U/ml, Sigma), ủ ở370C, trong 15-30 phút. Huyền phù tế bào thu nhận được li tâm ở 2500 vòng/phút trong 5 phút, thucặn. Tái huyền phù cặn trong môi trường GAMETE-100 đã được làm ấm ở 300C.Nuôi cấy và biệt hóaNhiều công trình nghiên cứu in vitro và khảo sát in vivo cho thấy, việc trưởng thành của tinh trùng (haysự biệt hóa từ các tế bào mầm sinh dục) được kiểm soát bởi hai hormone là FSH (Puregon, Organon) vàtestosteron (Puregon, Organon). Vì nồng độ FSH trong tác đ ...