BƢỚC ĐẦU XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHUỘM NHIỄM SẮC THỂ TRÊN TẾ BÀO MÁU THỎ

Tế bào là đơn vị tổ chức cơ bản của cơ thể sống. Trong tế bào có chứa các bào quan và nhân. Nhân tế bào là cấu thành bắt buộc của tế bào eukaryote, vì trong nhân có chứa nhiễm sắc thể (NST), là cấu trúc mang vật chất di truyền ADN (acid deoxyribonucleotide) của tế bào và cơ thể. Nhiễm sắc thể được quan sát đầu tiên bởi Nageli năm 1842, nhưng đến năm 1888, NST mới được Waldeyer đặt tên là “chromosome” (“chromo” có nghĩa bắt màu nhuộm và “some” nghĩa là một thể) (Eldridge, 1985). Nhiễm...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
BƢỚC ĐẦU XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHUỘM NHIỄM SẮC THỂ TRÊN TẾ BÀO MÁU THỎ BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠOTRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC  KHÓA LUẬN TỐT NGHIỆP BƢỚC ĐẦU XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHUỘM NHIỄM SẮC THỂ TRÊN TẾ BÀO MÁU THỎ Ngành học: CÔNG NGHỆ SINH HỌC Niên khóa : 2003 - 2007 Sinh viên thực hiện: MAI MINH MẪN Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 09/2007 BỘ GIÁO DỤC VÀ ĐÀO TẠO TRƢỜNG ĐẠI HỌC NÔNG LÂM THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH BỘ MÔN CÔNG NGHỆ SINH HỌC  BƢỚC ĐẦU XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHUỘM NHIỄM SẮC THỂ TRÊN TẾ BÀO MÁU THỎGiáo viên hướng dẫn Sinh viên thực hiệnTHS. HỒ THỊ NGA MAI MINH MẪNBSTY. NGUYỄN KIÊN CƢỜNG Thành phố Hồ Chí Minh Tháng 09/2007 LỜI CẢM TẠ Con xin gửi đến Ba Má lòng thành kính ghi ơn. Con kính chúc Ba Má sứckhỏe, con sẽ luôn phấn đấu để trở thành người có ích cho xã hội để không phụ côngdưỡng dục của Ba Má. Tôi xin chân thành gửi lời cảm ơn đến: * Ban giám hiệu Trường Đại Học Nông Lâm Tp. Hồ Chí Minh, Ban Chủ Nhiệm Bộ Môn Công Nghệ Sinh Học cùng tất cả các quý thầy cô đã tận tụy truyền đạt những kiến thức quý báu cho tôi trong suốt thời gian học tập tại trường. * ThS. Hồ Thị Nga, BSTY. Nguyễn Kiên Cường, đã trực tiếp hướng dẫn và giúp đỡ tôi trong suốt thời gian thực hiện đề tài tốt nghiệp. * PGS.TS. Trần Thị Dân, KS. Nguyễn Văn Út đã giúp đỡ cũng như động viên lúc tôi gặp khó khăn. * TS. Dương Nguyên Khang cùng các thầy cô Khoa Chăn Nuôi Thú Y đã tạo mọi điều kiện để tôi hoàn thành tốt đề tài. * Thầy Đinh Xuân Phát, Cô Quách Tuyết Anh đã dành thời gian quý báu để cung cấp cho tôi những tài liệu, kinh nghiệm quý báu. * Cùng toàn thể lớp CNSH29 đã hỗ trợ, giúp đỡ và động viên tôi trong suốt thời gian học tập tại trường. Sinh viên thực hiện MAI MINH MẪN iii TÓM TẮT MAI MINH MẪN, Đại học Nông Lâm Tp. Hồ Chí Minh. Tháng 8/2007. “BƢỚC ĐẦU XÂY DỰNG QUY TRÌNH NHUỘM NHIỄM SẮC THỂTRÊN TẾ BÀO MÁU THỎ” Giáo viên hướng dẫn: ThS. Hồ Thị Nga BSTY. Nguyễn Kiên Cường Đề tài được thực hiện tại Phòng thí nghiệm Sinh lý Khoa Chăn Nuôi Thú Y,Đại Học Nông Lâm Tp Hồ Chí Minh trên đối tượng thỏ. Nhiễm sắc thể là yếu tố ảnh hưởng đến sự di truyền của một giống loài. Xâydựng được kiểu nhân của một loài là bước đầu cho việc nghiên cứu sâu hơn về cơchế di truyền của loài đó. Phương pháp hiệu quả nhất trong nghiên cứu kiểu nhân lànuôi cấy tế bào bạch cầu của máu và nhuộm. Máu thỏ nuôi cấy với hai liều lượng là 0,4 ml và 1 ml trong môi trườngRPMI 1640 có bổ sung một số chất giúp cho sự sinh trưởng và phát triển tế bào nhưhuyết thanh phôi bò (FBS), Pokeweed (lectin), kháng sinh antimycotic – antibiotic.Mẫu máu được nuôi cấy chủ yếu bằng chai Rough trong 72 giờ ở 37 0C trong tủ ấmCO2. Sau 72 giờ, cho thêm 40 µl colcemid vào môi trường và ủ theo ba mức thờigian 20 phút, 40 phút và 60 phút trước khi xử lý để nhuộm. Bên cạnh đó ốngnghiệm 15 ml cũng được sử dụng để nuôi cấy thử nghiệm. Kết quả cho thấy khi nuôi cấy 1ml máu thỏ với môi trường RPMI 1640trong 72 giờ ở 37 0C và ủ với colcemid trong thời gian 60 phút thì thu được tế bào ởgiai đoạn trung kỳ nhiều nhất. Ngoài ra, khi nuôi cấy máu thỏ với ống nghiệm 15 mlvẫn thu được các tế bào ở giai đoạn trung kỳ. Mặc dù vậy, chúng tôi vẫn chưa xâydựng được kiểu nhân (karyotype) của bộ nhiễm sắc thể thỏ do nhiễm sắc thể chưatrãi đều khi nhuộm. iv SUMMARY MAI MINH MAN, Nong Lam University, August 2007. “THE INITIAL STEP OF SETTING UP STAINING RABBITPERIPHERAL BLOOD CHROMOSOME PROCESS” Supervisors HO THI NGA, MSc NGUYEN KIEN CUONG, DMV A study was carried out on rabbit chromosome at physiology laboratory ofFaculty of Animal Science and Veterinary Medicine, Nong Lam University Ho ChiMinh City. Chromosome is an element which affects the species genetics. Setting upkaryotype of species is the initial step of researching extendedly into species’genetic mechanism. The most effective researching karyotype method is thatculturing and staining lymphocyte. Rabbit peripheral blood (anticoagulated by heparin) was cultured with twodosages, 0,4 ml and 1 ml. It was cultured in RPMI 1640 medium whichsupplements some mitogenic agents: fetal bovine serum (FBS), pokeweed (lectin),antimycotic – antibi ...