Bước đầu áp dụng kỹ thuật multiplex PCR tìm đột biến mất đoạn trên vùng AZF của nhiễm sắc thể Y ở một số bệnh nhân nam vô sinh vô căn

Nghiên cứu được tiến hành với mục tiêu nhằm đánh giá bước đầu áp dụng kỹ thuật multiplex PCR tìm đột biến mất đoạn trên vùng AZF của nhiễm sắc thể y ở một số bệnh nhân nam vô sinh vô căn. Mời các bạn cùng tham khảo bài viết để nắm rõ nội dung chi tiết.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Bước đầu áp dụng kỹ thuật multiplex PCR tìm đột biến mất đoạn trên vùng AZF của nhiễm sắc thể Y ở một số bệnh nhân nam vô sinh vô cănY Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011Nghiên cứu Y họcBƯỚC ĐẦU ÁP DỤNG KỸ THUẬT MULTIPLEX PCR TÌM ĐỘT BIẾNMẤT ĐOẠN TRÊN VÙNG AZF CỦA NHIỄM SẮC THỂ YỞ MỘT SỐ BỆNH NHÂN NAM VÔ SINH VÔ CĂNNguyễn Minh Hà*TÓM TẮTMở đầu: Đột biến mất đoạn vùng AZF trên nhiễm sắc thể Y là một nguyên nhân gây vô sinh chiếm tỷ lệkhông nhỏ mà hiện nay đã có thể phát hiện được và Phòng xét nghiệm Bộ môn Hóa Sinh – Sinh học phân tửTrường Đại Học Y khoa Phạm Ngọc Thạch đã hoàn thiện được một số điều kiện kỹ thuật của xét nghiệm này.Mục tiêu: Bước đầu áp dụng kỹ thuật Multiplex PCR để tìm đột biến mất đoạn vùng AZF cho một số bệnhnhân nam vô sinh.Đối tượng – Phương pháp nghiên cứu: Bệnh nhân nam vô sinh vô căn, người Việt Nam (hoặc gốc ViệtNam). DNA bộ gen được ly trích từ bạch cầu và được chạy 2 phản ứng Multiplex PCR cùng lúc, mỗi phản ứngkhuếch đại 5 đoạn DNA đích. Các cặp mồi sử dụng phát hiện được 95% trường hợp mất đoạn trên các vùngAZF. Chứng nam, chứng nữ và chứng nước được chạy song song với mỗi mẫu DNA bệnh nhân.Kết quả: Áp dụng kỹ thuật xét nghiệm trên 70 bệnh nhân nam vô sinh thỏa tiêu chuẩn chọn mẫu và tìmđược 9 bệnh nhân nam đột biến (tỷ lệ 12,8%). 8 trường hợp mang đột biến tại vùng AZFc, chỉ có 1 trường hợpđột biến tại AZFb.Kết luận: Đây là một xét nghiệm có độ tin cậy tốt, tính ứng dụng cao, có thể tiến hành làm thường quy ởcác phòng xét nghiệm tại nước ta để chẩn đoán, tiên lượng và phòng ngừa cho bệnh nhân nam vô sinh.Từ khóa : Multiplex PCR, AZF (azoospermia factor)ABSTRACTINITIAL APPLYING OF MULTIPLEX PCR TECHNIQUE TO DETECT AZF MICRODELETIONOF Y CHROMOSOME IN IDIOPATHIC INFERTILE MENNguyen Minh Ha * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 15 - Supplement of No 1 - 2011: 217 - 219Background: The AZF microdeletion of Y chromosome is a frequently infertile cause that can be detectednow. The laboratory of Biochemistry and Molecular biology Department-Pham Ngoc Thach Medical Universityhas optimized some technical conditions of this test.Objectives: Initial applying Multiplex PCR technique to detect AZF microdeletion of Y chromosome insome idiopathic infertile men.Method: Vietnamese idiopathic infertile male patients. Genomic DNA is extracted and purified fromleucocytes and is run two multiplex PCR. Each PCR amplifies five target sequences. The primers detect 95% ofAZF microdeletion cases. Male, female and blank control are run at same time with each DNA sample.Results: Detection of 9 microdeletion cases in 70 idiopathic infertile males (12.8%). 8 patientss have theAZFc microdeletion and only 1 patient has AZFb microdeletion.Conclusion: The test is reliable and high applicable. As the results that we can run it routinely at ourlaboratories for diagnosis, prognosis and prevention for infertile male patients.Keywords: Multiplex PCR, AZF (azoospermia factor)∗Đại học Y Khoa Phạm Ngọc Thạch TP Hồ Chí MinhTác giả liên lạc: ThS. Nguyễn Minh HàĐT: 0989001581.Chuyên Đề Ngoại KhoaEmail: drnguyenminhha@yahoo.com217Nghiên cứu Y họcY Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 1 * 2011ĐẶT VẤN ĐỀĐột biến mất đoạn vùng AZF trên nhiễm sắcthể Y đã được xác định có liên quan đến tìnhtrạng rối loạn sinh tinh và gián đoạn trưởngthành tinh trùng. Trước đây chưa có kỹ thuậtphát hiện thường quy loại đột biến này cho cácbệnh nhân nam đến khám tại các khoa Hiếmmuộn và Nam khoa. Bên cạnh đó, theo một sốnghiên cứu tại Châu Á, tần suất đột biến nàytrong khoảng 8-10% (trong quần thể bệnh nhânnam vô sinh vô căn)(1,2,3,6,7). Vì vậy, đây là mộtnguyên nhân gây vô sinh chiếm tỷ lệ không nhỏmà hiện nay đã có thể phát hiện được. Phòng xétnghiệm Bộ môn Hóa Sinh – Sinh học phân tửTrường Đại Học Y khoa Phạm Ngọc Thạch đãhoàn thiện được một số điều kiện kỹ thuật củaxét nghiệm này. Do đó, trước khi áp dụngthường quy tại các phòng xét nghiệm ở nước ta,chúng tôi tiến hành kỹ thuật Multiplex PCR đểtìm đột biến mất đoạn vùng AZF cho một sốbệnh nhân nam vô sinh.ĐỐI TƯỢNG - PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨUBệnh nhân nam người Việt Nam (hoặc gốcViệt Nam), bị vô sinh vô căn, được chẩn đoán tạikhoa Hiếm Muộn BV. Từ Dũ. Tiêu chuẩn chẩnđoán: bệnh nhân bình thường về lâm sàng vànhiễm sắc thể đồ (46,XX), chẩn đoán vô sinh dựatrên tiền căn (vợ chồng trong độ tuổi sinh sảnsau 1 năm (vợ < 35 tuổi) hoặc 6 tháng (vợ ≥ 35tuổi) chung sống thực sự, không áp dụng biệnpháp tránh thai nào mà vẫn không thể có thai vàsinh con) và tinh dịch đồ (không thỏa tiêu chuẩnbình thường nào của tinh dịch đồ. Tinh dịch đồđược thực hiện hai lần cách nhau 2 tuần với thờigian kiêng xuất tinh trước thử từ 3 đến 5 ngày.Mẫu tinh dịch được hướng dẫn lấy đúng quycách và được tiến hành đánh giá tại Phòng XétNghiệm Tinh Trùng (Khoa Hiếm Muộn BV TừDũ) theo tiêu chuẩn WHO năm 1999.Bệnh nhân được gửi đến Phòng xét nghiệmBộ môn Hóa Sinh – Sinh ...