Bước đầu áp dụng phương pháp PCR-SSO để xác định kháng nguyên bạch cầu ở người (HLA) tại Bệnh viện Chợ Rẫy

Hiện nay có nhiều phương pháp để xác định HLA, nhưng phương pháp dựa trên sinh học phân tử là hiện đại, chính xác. Và nghiên cứu tiến hành từ 9/2010 Trung tâm truyền máu Bệnh viện Chợ Rẫy triển khai kỹ thuật HLA (Human Leucocyte Antigen) bằng phương pháp PCR-SSO (Polymerase Chain Reaction – Sequence-specific Oligonucleotide Probes).
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Bước đầu áp dụng phương pháp PCR-SSO để xác định kháng nguyên bạch cầu ở người (HLA) tại Bệnh viện Chợ RẫyNghiên cứu Y họcY Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 4 * 2011BƯỚC ĐẦU ÁP DỤNG PHƯƠNG PHÁP PCR-SSO ĐỂ XÁC ĐỊNHKHÁNG NGUYÊN BẠCH CẦU Ở NGƯỜI (HLA) TẠI BỆNH VIỆN CHỢ RẪYNguyễn Trường Sơn*, Trần Văn Bảo**, Phạm Thị Hồng Ngọc**, Huỳnh thị Thanh Hà**,Đỗ Thị Ngọc Thảo**, Trần Thị Mỹ Duyên**, Phạm Lê Nhật Minh**TÓM TẮTMở đầu: Hiện nay có nhiều phương pháp để xác định HLA, nhưng phương pháp dựa trên sinh học phân tửlà hiện đại, chính xác.Phương pháp: Từ 9/2010 Trung tâm truyền máu Bệnh viện Chợ Rẫy triển khai kỹ thuật HLA (HumanLeucocyte Antigen) bằng phương pháp PCR-SSO (Polymerase Chain Reaction – Sequence-specificOligonucleotide Probes).Kết quả: Kết quả khảo sát trên 24 người, xác định có 49 kiểu hình HLA-A, 38 kiểu hình HLA-B, 45 kiểuhình HLA –DRB1, 45 kiểu hình HLA –DQA1 và 47 kiểu hình HLA –DQB1. Chiếm tỷ lệ cao trong số các kiểuhình HLA lần lượt như sau: HLA-A*11 với 27,27 %, HLA-A*2 với 22,72 %, HLA-A*24 với 11,36 %, HLAB*07, HLA-B*15 với 18,43%, HLA-DRB1*12 với 28,89%, HLA-DRB1*15 với 17,78%, HLA-DRB1*04 vàHLA-DRB1*14 cùng 13,34%, HLA-DQA1*01 với 46,66%, HLA-DQA1*06 với 26,67%, HLA-DQB1*03 với51,06% và HLA-DQB1*05 với 38,30%.Kết luận: Việc triển khai kỹ thuật xác định HLA bằng phương pháp SSO có nhiều tiện ích trong công tácchẩn đoán trước ghép tạng, chọn lựa người cho tổ chức, đặc biệt đây là phương pháp nhanh chóng, chính xác vàđặc hiệu cho các kiểu hình HLA.ABSTRACTINITIAL APPLYING PCR-SSP METHOD TO IDENTIFY HUMAN LEUCOCYTE ANTIGEN (HLA) INCHỢ RẪY HOSPITALNguyen Truong Son, Tran Van Bao, Pham Thi Hong Ngoc, Huynh Thi Thanh Ha,Do Thi Ngoc Thao, Tran Thi My Duyen, Pham Le Nhat Minh* Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 15 - Supplement of No 4 - 2011: 378 - 381Background & Methods: Since September 2010, in Chợ rẫy Blood Tranfusion Center, we have performedHLA (Human Leucocyte Antigen) phenotyping techniques by PCR-SSO (Polymerase Chain Reaction –Sequence- specific Oligonucleotide Probes).Results: Collected are that 49 phenotyping of HLA-A, 38 phenotyping of HLA-B, 45 phenotyping of HLA –DRB1, 45 phenotyping of HLA –DQA1 and 47 phenotyping of HLA –DQB1 among 24 persons..The mostpopular phenotype of HLA-A*11 is 27.27 %, HLA-A*2 is 22.72 %, HLA-A*24 is11.36 %, HLA-B*07, HLAB*15 are 18.43%, HLA-DRB1*12 is 28.89%, HLA-DRB1*15 is 17.78%, HLA-DRB1*04 and HLA-DRB1*14are 13.34%, HLA-DQA1*01 is 46.66%, HLA-DQA1*06 is 26.67%, HLA-DQB1*03 is 51.06% and HLADQB1*05 are 38.30%.Conclusion: The method helps us alots in diagnosis before organic transplantationt, choose donor fortransplantation, especially it is fastest, accurate and specific for HLA phenotyping.* BV. Chợ Rẫy, ** Trung Tâm truyền máu BV Chợ RẫyTác giả liên lạc: DS. Trần Văn BảoĐT: 0903978845 Email: tranvanbao178@yahoo.com378Hội Nghị Khoa Học Kỹ Thuật BV. Chợ Rẫy 2011Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 15 * Phụ bản của Số 4 * 2011Nghiên cứu Y họcĐẶT VẤN ĐỀĐỐI TƯỢNG VÀ PHƯƠNG PHÁPNăm 1936 Peter Gorer khi nghiên cứu về thảiloại ghép trên các dòng chuột thuần chủng đã điđến sự kết luận sự thải ghép là do đáp ứng miễndịch đối với sự khác biệt về kháng nguyên tổ chức.Sau đó, Jaen Dausset khi nghiên cứu về nhóm bạchcầu ở người đã xác định được kháng nguyên bạchcầu có liên quan đến việc thải loại ghép và đặt tênlà nhóm tổ chức mà ngày nay thống nhất là HLA(Human Leucocyte Antigen)(2,3).Đối tượngDo tính đa dạng của phân tử nhóm phù hợpmô nên việc định nhóm không phải đơn giảnnhư định các nhóm máu.. Ngày nay, nhiều kỹthuật định nhóm HLA đã được áp dụng. Với kỹthuậtviđộctếbàolympho(microlymphotoxicity), người ta dùng các khángthể đơn đặc hiệu với nhóm HLA và cho thyêmvào đó bổ thể. Các tế bào có mang khángnguyên HLA tương ứng với kháng thể đặc hiệuvà với sự hiện diện của bổ thể, tế bào sẽ bị gâyđộc và chết. Từ đó, ta có thể suy ra tế bào cómang nhóm kháng nguyên nào. Các kỹ thuậthuyết thanh chỉ dùng tốt cho định nhóm HLAlớp I và dưới nhóm DR của lớp II, còn khó khănhơn với DP và DQ(3,5).Ngày nay, kỹ thuật sinh học phân tử ngàycàng được áp dụng rộng rãi. Phân tích trình tựaxit nhân cuả các kỹ thuật phản ứng chuỗi đặchiệu kháng nguyên phù hợp mô HLA. Kỹthuật thông thường hiện nay là khuếch đạivùng đặc hiệu cho phân tử HLA với kỹ thuậtphản ứng chuỗi polymerase (PCR). Sản phẩmnày sau khi được lai ghép với các cặp mồi đặchiệu sẽ cho các biến thể allele. Các kỹ thuậtnày cho phép phân ra nhiều biến thể hơn là kỹthuật huyết thanh(4).Tất cả người cho cơ quan (thận, tủy…) vàngười bệnh nhận cơ quan đến xét nghiệm tạiBệnh viện Chợ Rẫy.Phương pháp nghiên cứuKỹ thuật PCR-SSO, với kỹ thuật ly tríchDNA bằng QIAamp DNA Mini Kit và kỹ thuậtPCR với Micro SSO HLA ClassI và II ABDR,DQ DNA Typing Tray của công ty OneLambda (Mỹ)(4).Trong kỹ thuật sinh học phân tử này, takhuếch đại vùng đặc hiệu cho phân tử HLA vớikỹ thuật phản ứng chuỗi polymer ...