Bước đầu khảo sát chimerism trên bệnh nhân dị ghép tế bào gốc tạo máu bằng kỹ thuật multiplex PCR STR

Mục tiêu nghiên cứu nhằm xác định tỷ lệ chimerism trên bệnh nhân bạch cầu cấp dòng tủy dị ghép tế bào gốc tạo máu. 20 mẫu tủy xương hoặc máu ngoại vi của bệnh nhân bạch cầu cấp dòng tủy và người cho tế bào gốc tạo máu.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Bước đầu khảo sát chimerism trên bệnh nhân dị ghép tế bào gốc tạo máu bằng kỹ thuật multiplex PCR STRNghiêncứuYhọcYHọcTP.HồChíMinh*Tập17*Số5*2013BƯỚCĐẦUKHẢOSÁTCHIMERISMTRÊNBỆNHNHÂNDỊGHÉPTẾBÀOGỐCTẠOMÁUBẰNGKỸTHUẬTMULTIPLEXPCRSTRCaoSỹLuân*,PhanThịXinh*,**TÓMTẮTMụctiêu:Xácđịnhtỷlệchimerismtrênbệnhnhân(BN)bạchcầucấpdòngtủy(BCCDT)dịghéptếbàogốctạomáu(TBGTM).Đối tượng và phương pháp: 20 mẫu tủy xương hoặc máu ngoại vi của BN BCCDT và người choTBGTM.ThựchiệnphảnứngmultiplexPCRShortTandemReapeat(STR)đểxácđịnhcácdấuấnSTRcógiátrịtheodõiđiềutrịsaughépvàtỷlệchimerismtrênBNBCCDTdịghépTBGTM.Kếtquả:Trong18STRs,chúngtôiđãxácđịnhđược4dấuấnSTRcógiátrịtheodõiđiềutrịsaughéptrêncặpngườicho‐ngườinhậnlàCMR‐04và5dấuấnSTRđốivớicáccặpCMR‐01vàCMR‐02,6dấuấnSTRđốivớicặpCMR‐03.Đồngthời,xácđịnhđượctỷlệchimerismcủacácBNsaughéptạinhiềuthờiđiểmkhácnhau.Ngoàira,kếtquảchimerismtươngđồngvớikếtquảxácđịnhgiớitínhbằngkỹthuậtFISHtrongtrườnghợpngườicho‐ngườinhậnkhácgiớitính.Kết luận:XâydựngthànhcôngquytrìnhxácđịnhchimerismbằngkỹthuậtmultiplexPCRSTR,giúptheodõiviệcmọcmảnhghéptrênBNdịghépTBGTMtạiBệnhviệntruyềnmáuhuyếthọc.Từ khóa: bạch cầu cấp dòng tủy (BCCDT), short tandem repeat (STR), chimerism, tế bào gốc tạo máu(TBGTM).ABSTRACTDETECTIONOFCHIMERISMINALLOGENEICHEMATOPOIETICSTEMCELLTRANSPLANTATIONUSINGMULTIPLEXSTR‐PCRCaoSyLuan,PhanThiXinh*YHocTP.HoChiMinh*Vol.17‐No5‐2013:169‐174Purpose:Todetectchimerisminacutemyeloidleukemia(AML)patientsafterallogeneichematopoieticstemcelltransplantation(HSCT).MaterialandMethods:TwentybonemarroworperipheralbloodsamplesofAMLpatientsanddonorswerecollected.UsingacommercialmultiplexPCRamplificationoffluorescentlabeledshorttandemrepeat(STR)markerstodetectinformativeSTRsandanalyzechimerismafterallogeneicHSTC.Result:Among18STRs, wefound4informativeSTRsinCMR‐04,5informativeSTRsinCMR‐01andCMR‐02,6informativeSTRsinCMR‐03.Simultaneously,patient/donorcellchimerismwasdetectedat several times during the post‐transplant period. Moreover, the result of chimerrism analysis by STR‐PCR‐basedissimilartoresultofFISH‐basedincasessex‐mismatchedtransplantation.Conclusion:WesuccessfullyestablishedtheprocedureofchimerismanalysisbyusingmultiplexSTR‐PCR to help monitoring engraftment in patient after allogeneic HSTC in Blood Transfusion andHematologyhospital. Keywords:acutemyeloidleukemia(AML),shorttandemrepeat(STR),chimerism,hematopoieticstemcelltransplantation(HSCT).BệnhviệnTruyềnmáu‐HuyếthọcTP.HCM **ĐạihọcYDượcTP.HCM.Tácgiảliênlạc:TS.BS.PhanThịXinh ĐT:0932728115Email:phanthixinh@yahoo.com*170ChuyênĐềTruyềnMáu–HuyếtHọcNghiêncứuYhọcĐẶTVẤNĐỀTrongđiềutrịcácbệnhlýáctínhvềmáuthìdị ghép tế bào gốc tạo máu (TBGTM) là mộttrongnhữngphươngpháphiệuquảvàưutiênđượclựachọnchobệnhnhân(BN),đặcbiệtđốivới BN thuộc nhóm tiên lượng trung bình vàxấu hoặc BN tái phát sau điều trị hóa trị liệu.Việcxácđịnhtỷlệtếbàocủangườichotrongcơthểngườinhậnhaycòngọilàchimerismđểquađóđánhgiáviệcmọcmảnhghéplàthànhcônghaythấtbạilàmộttrongnhữngbướccầnthiếtcủa dị ghép tủy. Để đánh giá việc mọc mảnhghépthìcóthểdựatrêncơsởlàsựkhácnhauvềgiớitính,nhómmáu,HLAhaycácdấuấnphântử như Short Tandem Reapeat (STR) và SingleNucleotidePolymorphism(SNP).Hiệnnay,có3kỹ thuật di truyền học phân tử để xác địnhchimerismlàkỹthuậtFISH(yêucầuphảicósựkhác biệt về giới tính giữa người cho và ngườinhận), PCR khuếch đại các đoạn STR và SNP.Trong đó, kỹ thuật PCR khuếch đại các đoạnSTRđểxácđịnhtỷlệchimerismđượcsửdụngngàycàngphổbiếnvớiưuđiểmlàđộnhạycao,khảnăngứngdụngrộngvàchỉcầnmộtlượngmẫunhỏđểphântích(8).STR là những trình tự ngắn DNA trênnhiễmsắcthểvớichiềudàithườngtừ2‐6bpvàcó tính lặp lại. Có nhiều loại STR khác nhau:dinucleotide, trinucleotide, tetranucleotide,pentanucleotide và hexanucleotide. Có hơn20.000 tetranucleotide STR được xác định ởngười(2). STR chiếm khoảng 3% trong tổng bộgenngười(5).CónhiềukiểusắpxếpcácSTRvớinhau, hoặc là lặp lại nhiều STR của cùng mộtkiểu hoặc là lặp lại của nhiều kiểu STR khácnhau. Sự khác nhau về kích thước của các STRtrênmỗicánhânkhácnhaulàdokhácnhauvềsố đơn vị lặp lại. Do đó, các STR có thể đượcxem ...