CẤY TỦY XƯƠNG

Đặt vấn đề: Ở Việt Nam chưa thấy có một nghiên cứu nào xác định đặc điểm của tủy xương liên quan đến khả năng tạo xương của tủy xương. Khả năng tạo xương của tủy xương là nhờ các tế bào gốc trung mô, được đánh giá thông qua số lượng CFU-Fs.Vì vậy chúng tôi thực hiện nghiên cứu nuôi cấy tế bào tủy và đếm số lượng CFU-Fs của tủy xương người Việt Nam. Phương pháp Khoảng 2.0 ml tủy xương được lấy vô trùng pha với 0.1 ml heparin (5000IU/ml). Tủy được cấy vào môi trường...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
CẤY TỦY XƯƠNG CẤY TỦY XƯƠNGTÓM TẮTĐặt vấn đề: Ở Việt Nam chưa thấy có một nghiên cứu nào xác định đặc điểm củatủy xương liên quan đến khả năng tạo xương của tủy xương. Khả năng tạo xươngcủa tủy xương là nhờ các tế bào gốc trung mô, được đánh giá thông qua số lượngCFU-Fs.Vì vậy chúng tôi thực hiện nghiên cứu nuôi cấy tế bào tủy và đếm sốlượng CFU-Fs của tủy xương người Việt Nam.Phương pháp Khoảng 2.0 ml tủy xương được lấy vô trùng pha với 0.1 ml heparin(5000IU/ml). Tủy được cấy vào môi trường IMDM, 15% FBS, kháng sinh. Mẫuđược nhuộm Giemsa để quan sát và đếm khúm tế bào CFU-Fs sau 7 ngày nuôicấy. Có 20 mẩu tủy được cấy và đếm CFU-Fs.Kết quả: Nồng độ tế bào đơn nhân sau khi phân lập: 43,9x106/ml, Số CFU-Fstrung bình đếm được sau 7 ngày nuôi: 79,95.ABSTRACTCULTURE BONE MARROW TO EVALUATE MESENCHYMAL STEMCELLS BY MEANSOF COUNT OF CFU-FS.Tran Cong Toai, Cao Thi * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 12 - Supplement of No4 - 2008: 488 – 490Introduction: There aren’t studies about osteogenic potential of bone marrow inViet Nam. Mesenchymal stem cells (MSCs) are responsible for osteogenic capacityof bone marrow. So, to assess quantity of Vietnamese MSCs, we culture bonemarrow and count fibroblast colony forming units (CFU-Fs).Material and results: Average 2ml of non-infected bone marrow is mixed with500IU heparin and cultured in medium IMDM, 15% FBS and antibiotic. Giemsastain is used and CFU-Fs is counted after 7 days. Twenty individuals are enrolledin this study. After isolated, average concentration of nucl eated cells is43.9x106/ml. After 7 days of culture, average of CFU-Fs reaches 79.95.ĐẶT VẤN ĐỀKhả năng tạo xương của tủy xương đã được Goujon nêu lên từ năm 1869[2]. Cácthực nghiệm tế bào – sinh hóa, thực nghiệm ứng dụng của tủy xương trên động vậtthí nghiệm, cũng như một số các nghiên cứu trên tủy người cho thấy tủy xương cótính chất tạo xương. Tủy xương bao gồm nhiều loại tế bào, trong đó có tế bào gốcdòng tạo máu và tế bào gốc trung mô. Các tế bào gốc trung mô là các tế bào trongthành phần mô đệm của tủy xương. Các tế bào này biệt hóa thành nhiều kiểu hìnhtế bào khác nhau, trong đó có các tiền tế bào tạo xương. Nhờ các tế bào này màtủy xương có tính chất tạo xương. Để đánh giá số lượng của tế bào gốc trung môtrong tủy, cần phải cấy tủy và đếm số lượng các đơn vị tạo khúm nguyên bào sợi(CFU-Fs) sau khi nuôi cấy. Và do đó số lượng CFU-Fs đặc trưng cho khả năng tạoxương của tủy. Ở Việt Nam, chưa thấy một báo cáo nào nghiên cứu đặc điểm củatủy xương liên quan đến tính chất tạo xương của tủy, cụ thể là đếm số lượng CFU-Fs. Nhằm rút ra đặc điểm tủy xương liên quan đến tính chất tạo xương ứng dụngtrong ngành chấn thương chỉnh hình, so sánh với một số y văn thế giới, chúng tôitiến hành nghiên cứu nuôi cấy tủy xương và đếm số lượng CFU-Fs.PHƯƠNG PHÁP NGHIÊN CỨUCó 20 bệnh nhân tham gia vào nghiên cứu. Các bệnh nhân này là các bệnh nhânchấn thương cơ quan vận động có phẫu thuật và được chọn ngẫu nhiên trong sốcác bệnh nhân của Khoa Chấn Thương Chỉnh Hình bệnh viện Chợ Rẫy. Trong lúcbệnh nhân đang được mổ, 2ml tủy xương được lấy từ mào chậu trước. Dùng kimchọc tủy chọc vào mào chậu hút ra 1 ml tủy, thay đổi vị trí đầu kim đến nơi kháctrong mào chậu và hút thêm 1ml tủy. Cả 2ml tủy được cho vào ống nghiệm vôtrùng có pha sẵn 500IU heparin để chống đông. Sau đó tủy đ ược đưa về phòng thínghiệm và xử lý trong vòng 4 giờ sau khi lấy. Tại đây, tủy được ly tâm tách vàđếm tế bào có nhân. Thành phần tế bào được cấy vào môi trường IMDM, 15%FBS, có pha kháng sinh để chống nhiễm khuẩn. Sau 7 ngày, khi các khúm tế bàomọc thấy rõ, mẩu cấy sẽ được nhuộm giemsa để quan sát và đếm khúm tế bào.Mỗi khúm tế bào được xem là một CFU-F khi khúm phát triển được nhiều hơn 50tế bào.KẾT QUẢ VÀ BÀN LUẬNKết quả phân lập tế bào và đếm CFU-Fs được cho trong bảng 1Kết quả phân lập tế bàoNồng độ tế bào có nhân biến thiên rất lớn từ 10x106 đến 160x106 tế bào trên mỗiml tủy. Nồng độ tế bào trung bình trong mỗi ml tủy bằng 43,9X106 với độ lệchchuẩn là 41,2X106. Theo nghiên cứu của Major và cộng sự thì trung bình mỗi ml 32,5x106 tế bào có nhân[3].tủy hút ra từ mào chậu người khỏe mạnh có chứa 46So sánh hai giá trị trung bình cho thấy kết quả của chúng tôi không khác biệt vớikết quả của Major (pnhân ít hơn nhưng thu được nhiều CFU-Fs hơn. Điều này cho thấy sự khác biệt làdo môi trường cấy và thời gian cấy, chứ không liên quan đến cách lấy tủy.Liên quan giữa số lượng tế bào có nhân và số CFU-FsDùng bảng ANOVA phân tích phương sai 1 yếu tố thì kết quả của chúng tôikhông thấy có mối liên hệ giữa số lượng tế bào có nhân và số lượng CFU-Fs đếmđược (p=0,11). Hernigou ghi nhận có thể thu được 1 CFU-F trong 3x104 tế bào cónhân của tủy xương, rong khi đó chúng tôi chỉ thu được trung bình là 1 CFU-Ftrong 53, ...