Cấy tủy xương để đánh giá số lượng tế bào gốc trung mô thông qua các đơn vị tạo khúm nguyên bào sợi (CFU-FS)

Ở Việt Nam chưa thấy có một nghiên cứu nào xác định đặc điểm của tủy xương liên quan đến khả năng tạo xương của tủy xương. Khả năng tạo xương của tủy xương là nhờ các tế bào gốc trung mô,được đánh giá thông qua số lượng CFU-Fs. Vì vậy đề tài thực hiện nghiên cứu nuôi cấy tế bào tủy và đếm số lượng CFU-Fs của tủy xương người Việt Nam.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Cấy tủy xương để đánh giá số lượng tế bào gốc trung mô thông qua các đơn vị tạo khúm nguyên bào sợi (CFU-FS)Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 13 * Phụ bản của Số 1 * 2009Nghiên cứu Y họcCẤY TỦY XƯƠNG ĐỂ ĐÁNH GIÁ SỐ LƯỢNG TẾ BÀO GỐC TRUNG MÔTHÔNG QUA CÁC ĐƠN VỊ TẠO KHÚM NGUYÊN BÀO SỢI (CFU-FS)Trần Công Toại*, Cao Thỉ**TÓM TẮTĐặt vấn đề: Ở Việt Nam chưa thấy có một nghiên cứu nào xác định đặc điểm của tủy xương liên quanđến khả năng tạo xương của tủy xương. Khả năng tạo xương của tủy xương là nhờ các tế bào gốc trung mô,được đánh giá thông qua số lượng CFU-Fs.Vì vậy chúng tôi thực hiện nghiên cứu nuôi cấy tế bào tủy vàđếm số lượng CFU-Fs của tủy xương người Việt Nam.Phương pháp Khoảng 2.0 ml tủy xương được lấy vô trùng pha với 0.1 ml heparin (5000IU/ml). Tủyđược cấy vào môi trường IMDM, 15% FBS, kháng sinh. Mẫu được nhuộm Giemsa để quan sát và đếmkhúm tế bào CFU-Fs sau 7 ngày nuôi cấy. Có 20 mẩu tủy được cấy và đếm CFU-Fs.Kết quả: Nồng độ tế bào đơn nhân sau khi phân lập: 43,9x106/ml, Số CFU-Fs trung bình đếm được sau7 ngày nuôi: 79,95.ABSTRACTCULTURE BONE MARROW TO EVALUATE MESENCHYMAL STEM CELLS BY MEANSOF COUNT OF CFU-FS.Tran Cong Toai, Cao Thi * Y Hoc TP. Ho Chi Minh * Vol. 12 - Supplement of No 4 - 2008: 488 – 490Introduction: There aren’t studies about osteogenic potential of bone marrow in Viet Nam. Mesenchymalstem cells (MSCs) are responsible for osteogenic capacity of bone marrow. So, to assess quantity of VietnameseMSCs, we culture bone marrow and count fibroblast colony forming units (CFU-Fs).Material and results: Average 2ml of non-infected bone marrow is mixed with 500IU heparin andcultured in medium IMDM, 15% FBS and antibiotic. Giemsa stain is used and CFU-Fs is counted after 7days. Twenty individuals are enrolled in this study. After isolated, average concentration of nucleated cells is43.9x106/ml. After 7 days of culture, average of CFU-Fs reaches 79.95.số lượng của tế bào gốc trung mô trong tủy,ĐẶT VẤNĐỀcần phải cấy tủy và đếm số lượng các đơn vịKhả năng tạo xương của tủy xương đãtạo khúm nguyên bào sợi (CFU-Fs) sau khiđược Goujon nêu lên từ năm 1869[2]. Các thựcnuôi cấy. Và do đó số lượng CFU-Fs đặc trưngnghiệm tế bào – sinh hóa, thực nghiệm ứngcho khả năng tạo xương của tủy. Ở Việt Nam,dụng của tủy xương trên động vật thí nghiệm,chưa thấy một báo cáo nào nghiên cứu đặccũng như một số các nghiên cứu trên tủyđiểm của tủy xương liên quan đến tính chấtngười cho thấy tủy xương có tính chất tạotạo xương của tủy, cụ thể là đếm số lượngxương. Tủy xương bao gồm nhiều loại tế bào,CFU-Fs. Nhằm rút ra đặc điểm tủy xương liêntrong đó có tế bào gốc dòng tạo máu và tế bàoquan đến tính chất tạo xương ứng dụng tronggốc trung mô. Các tế bào gốc trung mô là cácngành chấn thương chỉnh hình, so sánh vớitế bào trong thành phần mô đệm của tủymột số y văn thế giới, chúng tôi tiến hànhxương. Các tế bào này biệt hóa thành nhiềunghiên cứu nuôi cấy tủy xương và đếm sốkiểu hình tế bào khác nhau, trong đó có cáclượng CFU-Fs.tiền tế bào tạo xương. Nhờ các tế bào này màtủy xương có tính chất tạo xương. Để đánh giá* Đại học Y khoa Phạm Ngọc Thạch ** Đại Học Y Dược TP. HCMChuyên Đề Nội Khoa487Y Học TP. Hồ Chí Minh * Tập 13 * Phụ bản của Số 1 * 2009PHƯƠNGPHÁP NGHIÊNCỨUCó 20 bệnh nhân tham gia vào nghiên cứu.Các bệnh nhân này là các bệnh nhân chấnthương cơ quan vận động có phẫu thuật vàđược chọn ngẫu nhiên trong số các bệnh nhâncủa Khoa Chấn Thương Chỉnh Hình bệnh việnChợ Rẫy. Trong lúc bệnh nhân đang được mổ,2ml tủy xương được lấy từ mào chậu trước.Dùng kim chọc tủy chọc vào mào chậu hút ra 1ml tủy, thay đổi vị trí đầu kim đến nơi kháctrong mào chậu và hút thêm 1ml tủy. Cả 2mltủy được cho vào ống nghiệm vô trùng có phasẵn 500IU heparin để chống đông. Sau đó tủyđược đưa về phòng thí nghiệm và xử lý trongvòng 4 giờ sau khi lấy. Tại đây, tủy được lytâm tách và đếm tế bào có nhân. Thành phầntế bào được cấy vào môi trường IMDM, 15%FBS, có pha kháng sinh để chống nhiễmkhuẩn. Sau 7 ngày, khi các khúm tế bào mọcthấy rõ, mẩu cấy sẽ được nhuộm giemsa đểquan sát và đếm khúm tế bào. Mỗi khúm tếbào được xem là một CFU-F khi khúm pháttriển được nhiều hơn 50 tế bào.KẾT QUẢ VÀ BÀNLUẬNKết quả phân lập tế bào và đếm CFU-Fsđược cho trong bảng 1Kết quả phân lập tế bàoNồng độ tế bào có nhân biến thiên rất lớntừ 10x106 đến 160x106 tế bào trên mỗi ml tủy.Nồng độ tế bào trung bình trong mỗi ml tủybằng 43,9X106 với độ lệch chuẩn là 41,2X106.Theo nghiên cứu của Major và cộng sự thìtrung bình mỗi ml tủy hút ra từ mào chậungười khỏe mạnh có chứa 46 ± 32,5x106 tế bàocó nhân[3]. So sánh hai giá trị trung bình chothấy kết quả của chúng tôi không khác biệt vớikết quả của Major (p ...