Chế tạo hạt từ gắn kháng thể kháng salmonella spp., dùng để tăng khả năng phát hiện vi khuẩn

Nghiên cứu với mục tiêu nhằm tìm hiểu chế tạo phức hợp hạt từ gắn kháng thể kháng salmonella và tối ưu phương pháp IMS trong việc bắt giữ và cô đặc vi khuẩn. Mời các bạn cùng tham khảo bài viết để nắm rõ nội dung chi tiết của đề tài nghiên cứu này.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Chế tạo hạt từ gắn kháng thể kháng salmonella spp., dùng để tăng khả năng phát hiện vi khuẩnNghiêncứuYhọcYHọcTP.Hồ ChíMinh*Tập18*PhụbảncủaSố 5*2014CHẾTẠOHẠTTỪGẮNKHÁNGTHỂKHÁNGSALMONELLASPP.,DÙNGĐỂTĂNGKHẢNĂNGPHÁTHIỆNVIKHUẨNDươngNgọcDiễm*,ĐỗThịKimYến*,NguyễnThịNguyệtThu*TÓMTẮTĐặtvấnđề:Salmonellaspp.làtácnhânhàngđầugâyngộđộcthựcphẩm.Phântáchmiễndịchtừ(IMS)sửdụngcácvihạttừtính,cóbềmặtgắnkhángthểđặchiệuvớiSalmonellađểtómbắtvàcôđặcvikhuẩntrựctiếptrêncácnềnmẫuphứctạp,giúpgiảmthiểukhảnăngchokếtquảâmtínhgiả.Mục tiêu nghiên cứu: ChếtạophứchợphạttừgắnkhángthểkhángSalmonellavàtốiưuphươngphápIMStrongviệcbắtgiữvàcôđặcvikhuẩn.Phươngphápnghiêncứu:TinhchếkhángthểkhángSalmonellatừkhánghuyếtthanhthươngmạibằngphươngphápsắckíáilựcmiễndịch.Khángthểsautinhchếđượccộnghợpđồngtrịlênhạttừ.KhảosátcácđiềukiệntốiưucủaphươngphápIMStrongtómbắtvàpháthiệnSalmonella.Kếtquảnghiêncứu:PhươngphápIMSsửdụng2μl(9,8x109hạt/ml)phứchợphạttừ1μmgắn200μgkhángthểkhángSalmonellaủvớivikhuẩntrong10phútchokhảnăngpháthiện103tếbàoSalmonella/ml.Kếtluận:KhángthểkhángSalmonellađượctinhchếtừkhánghuyếtthanhthươngmạivàđượcgắnlênhạttừđườngkính1μm.Phứchợphạttừ‐khángthểcókhảnăngbắtđượctấtcảcácnhómvikhuẩnSalmonellagâyngộđộcthựcphẩm(B,D,E,C1,C2‐C3)vànhómA(chỉđượcphânlậptừmẫubệnhphẩm).PhươngphápIMSsửdụngphứchợphạttừ‐khángthểtựchếtạođểtómbắtvàcôđặchiệuquảSalmonellatrựctiếptừtừdungdịchđệmphaloãng.Từkhóa:Salmonella,phântáchmiễndịchtừ,phươngphápcộnghợpABSTRACTPREPARETHECOMPLEXOFIMMUNOMAGNETICBEADWITHCOVALENTLYLINKEDANTI‐SALMONELLAANTIBODIESUSEDTOENHANCETHEABILITYTOISOLATESALMONELLASPP.DuongNgocDiem,DoThiKimYen,NguyenThiNguyetThu*YHocTP.HoChiMinh*Vol.18‐SupplementofNo5‐2014:250‐256Background:Salmonellaisoneofthemostcommoncausesoffoodpoisoninginhumans.Immunomagneticseparation (IMS) using small super‐paramagnetic particles coated with antibodies against Salmonella for theisolationofthispathogendirectlyfromcomplexsamples.Ithelpstoreducefalsenegativeresults.Objectives:Preparethecomplexofimmunomagneticbeadwithcovalentlylinkedanti‐SalmonellaantibodiesandoptimizetheIMSprocedurefortrappingandisolatingSalmonella.Method: Purified antibodies from the commercial Salmonella O Antiserum by immuno‐affinitychromatographyonHitrap‐proteinAcolumn.Theantibodieswereconjugatedontomagneticbeadsby1‐ethyl‐3‐(3‐dimethylaminopropyl)carbodiimide hydrochloride (EDC). Evaluation the activity of antibodies conjugatedbeads by agglutination reaction on glass slide. Determine the optimal conditions of IMS method. Build‐in theculture method for the isolation of Salmonella in food samples using the magnetic bead- antibodiescomplex.Results: Magnetisable beads in 1 μm diameter were coated with 200 μg anti‐Salmonella antibodies. Thesensitive of system in PBS is 103 Salmonella per ml. IMS method is set with the following parameters: 2 μl*ViệnPasteurThànhphốHồChíMinhTácgiảliênlạc:DươngNgọcDiễm ĐT:0909966780250Email:ngocdiem99s@yahoo.comChuyênĐềĐiềuDưỡngKỹThuậtYHọcYHọcTP.HồChíMinh*Tập18*Phụ bảncủaSố 5*2014NghiêncứuYhọccomplexwasincubatedwithbacteriain10minutesandthecomplexaftercatchingbacteriawerewashed3timeswithPBS–0,1%Tween20.Conclusion:Purifiedanti‐Salmonellafromcommercialantiserumandpreparedmagnetic bead-antibodiescomplex.ThiscomplexcanarrestSalmonellagroups:A,B,C1,C2‐C3,DandE.IMStechniqueusingfabricatedcomplextocaptureandconcentrateSalmonelladirectlyfromdilutedbuffersolution.Keywords:Salmonella,immunomagneticseparation,coatingproceduretách khỏi các thành phần khác trong mẫu nhờĐẶTVẤNĐỀvàothanhnamchâmđặtbênngoàiốngnghiệm.Salmonella spp. là một trong các tác nhânVikhuẩnliênkếttrênhạttừvẫngiữđượckhảhàngđầugâyngộđộcthựcphẩm.Năm2012,tạinăng tăng sinh trên các loại môi trường. KỹMỹcó423vụngộđộcthựcphẩmthìngộđộcdothuậtIMSđượcthựchiệntrongkhoảng30phút,Salmonellađứnghàngthứhaivàchiếm25% 4.Ởcó thể thay thế hay làm tăng hiệu quả của cácViệt Nam, mỗi năm có khoảng 120‐250 vụ ngộbướctăngsinhchọnlọc(thôngthườngcần18‐48độcthựcphẩmdonhiễmkhuẩntrongđósốvụgiờ)10.ngộ độc do Salmonella chiếm đến 70%15. Theothống kê, S. enteritidis và S. typhimurium là haikiểu huyết thanh phổ biến nhất được phân lập ...