Đề tài: Kĩ thuật điện di

Điện di là kĩ thuật dùng để phân tách và tinh sạch các đại phân tửđặc biệt là protein và các nucleic acid trên cơ sở kích thướt, khối lượng, điện tích vàcấu hình của chúng.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Đề tài: Kĩ thuật điện diKĨ THUẬT ĐIỆN DI Trần Hồng Bảo Quyên TRƯỜNG ĐẠI HỌC CÔNG NGHIỆP THÀNH PHỐ HỒ CHÍ MINH VIỆN CÔNG NGHỆ SINH HỌC VÀ THỰC PHẨM ----------  --------- ĐỀ TÀI: KĨ THUẬT ĐIỆN DI TP. HỒ CHÍ MINH Ngày 15 tháng 6 năm 2011 GVHD: Trần Hồng Bảo QuyênNhóm 9 Page 1KĨ THUẬT ĐIỆN DI Trần Hồng Bảo Quyên DANH SÁCH NHÓM 9 1. Phạm Ngọc Hà..................................................................09077661 2. Huỳnh Cao Khuyên............................................................09090051 3. Nguyễn Thị Ngọc Lan...................................................... 09083301 4. Dương Ngọc Linh.............................................................09089801 5. Đoàn Thị Rin......................................................................09086241 6. Trương Hữu Thắng...........................................................09231621 7. Lương Thị Cẩm Thi..........................................................09080641 8. Nguyễn Thị Thuý Vân.......................................................09217611 9. Đào Văn Xinh.................................................................... 09216721Nhóm 9 Page 2KĨ THUẬT ĐIỆN DI Trần Hồng Bảo Quyên MỤC LỤCLỜI MỞ ĐẦU....................................................................................................................41.GIỚI THIỆU CHUNG....................................................................................................5 1.1. Định nghĩa.............................................................................................................5 1.2.Mục đích.................................................................................................................5 1.3. Nguyên tắc.............................................................................................................52.CÁC BƯỚC THỰC HIỆN ĐIỆN DI GEL...........................................................5 2.1.Chế tác gel agarose....................................................................................... 5 2.2.Điện di gel agarose........................................................................................5 2.3. Kiểm tra băng DNA......................................................................................63. ỨNG DỤNG.......................................................................................................... 64. KẾT LUẬN............................................................................................................ 7 Tài liệu tham khảo............................................................................................. 8Nhóm 9 Page 3KĨ THUẬT ĐIỆN DI Trần Hồng Bảo QuyênNhóm 9 Page 4KĨ THUẬT ĐIỆN DI Trần Hồng Bảo Quyên KĨ THUẬT ĐIỆN DI1.GIỚI THIỆU CHUNG: 1.1. Định nghĩa: Điện di là kĩ thuật dùng để phân tách và tinh sạch các đ ại phân t ử đặc biệt là protein và các nucleic acid trên cơ sở kích thướt, khối lượng, điện tích và cấu hình của chúng. 1.2.Mục đích: Phân li DNA, RNA, oligonucleotide, protein. Giám biệt (đồng định) và tinh chế các chất đó. Gel agarose cho phép phân li nucleic acid lớn hơn 1 kb. 1.3. Nguyên tắc: Dựa vào sự tích điện nhất định và khối lượng khác nhau của các phân tử protein hay nucleic acid nên khi đặt chúng trong một điện trường chúng sẽ di chuyển. Các phân tử có kích thước lớn sẽ di chuyển chậm, các phân tử có kích thước nhỏ sẽ di chuyển nhanh hơn. Nhờ có chất nhuộm thích hợp như Ethidium bromide và quan sát dưới tia UV mà có thể biết được vị trí các phân tử trên gel. Có nhiều phương pháp khác nhau có thể được sử dụng để phân tích ADN và ARN như: phương pháp ly tâm, phương pháp sắc ký, phương pháp đo bằng quang phổ kế. phương pháp điện di: agarose gel, polyacrylamid gel, điện di trong trường xung điện. Nhưng cho đến nay điện di agarose gel là phương pháp được sử dụng phổ biến hơn cả nhờ ưu điểm nhanh và tương đối đơn giản.2.CÁC BƯỚC THỰC HIỆN ĐIỆN DI GEL: 2.1.Chế tác gel agarose: Chuẩn bị lượng agarose và dung dịch điện đệm thích hợp  Gia nhiệt cho đến khi agarose tan hoàn toàn  Để nguội tự nhiên đến khoảng 50 - 60 °C rồi cho dung dịch ethidium bromide  Rót gel vào khuôn đã cài sẵn lược (không để có bọt khí)  Chờ đến khi gel rắn hoàn toàn thì tháo lược ra khỏi gel (cẩn thận bể gel). 2.2.Điện di gel agarose: Đặt khuôn gel trong chậu điện di, rót dung dịch điện đệm vào cho ngập gel, đầu có lỗ lược nằm ở phía cathode  Pha nucleic acid cần điện di với dung dịch màu tải mẫu  Hút mẫu nucleic acid nhỏ vào lỗ răng lược  Bật điện một chiều 50-150V để thực hiện điện di.Nhóm 9 Page 5KĨ THUẬT ĐIỆN DI Trần Hồng Bảo Quyên 2.3. Kiểm tra băng DNA: Bật UV và kiểm tra vệt sáng, dựa vào khoảng cách 2 vệt sáng ước tính được khối lượng, độ tinh sạch……Hình:Tóm tắt các bước chuẩn bị điện di3. ỨNG DỤNG: Ứng dụng của điện di gel là cô lập và tinh sạch các mảnh khác nhau có chứa các gen quan tâm, có thể được thu hồi từ các gel có hoạt tính sinh học đầy đủ. Đi ...