ĐỊNH LƯỢNG TANINOID TRONG DƯỢC LIỆU

Có thể sử dụng 1 trong 2 phương pháp sau: PHƯƠNG PHÁP 1 Cân chính xác một khối lượng bột dược liệu đã rây qua rây số 355 (kích thước mắt rây 0,355 mm) và chứa khoảng 1 g taninoid, cho vào một bình nón, thêm 150 ml nước và đun trên cách thủy trong 30 phút. Để nguội, chuyển hỗn hợp vào bình định mức 250 ml. Thêm nước vừa đủ tới ngấn, lọc. Dịch lọc này dùng làm dung dịch thử. Xác định chất chiết được trong nước toàn phần Lấy chính xác 25 ml dung dịch...
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
ĐỊNH LƯỢNG TANINOID TRONG DƯỢC LIỆU ĐỊNH LƯỢNG TANINOID TRONG DƯỢC LIỆUCó thể sử dụng 1 trong 2 phương pháp sau:PHƯƠNG PHÁP 1Cân chính xác một khối lượng bột dược liệu đã rây qua rây số 355 (kích thước mắtrây 0,355 mm) và chứa khoảng 1 g taninoid, cho vào một bình nón, thêm 150 mlnước và đun trên cách thủy trong 30 phút. Để nguội, chuyển hỗn hợp vào bìnhđịnh mức 250 ml. Thêm nước vừa đủ tới ngấn, lọc. Dịch lọc này dùng làm dungdịch thử.Xác định chất chiết được trong nước toàn phầnLấy chính xác 25 ml dung dịch thử đem bốc h ơi đến khô, sấy cắn ở 105 0 C trong 3giờ. Cân, được khối lượng T1 (g).Xác định chất chiết được trong nước không liên kết với bột daLấy chính xác 100 ml dung dịch thử, thêm 6 g bột da khô (TT). Lắc đều trong 15phút và lọc. Lấy chính xác 25 ml dịch lọc đem bốc hơi đến khô, sấy cắn ở 105 0Ctrong 3 giờ. Cân, được khối lượng T2 (g).Xác định bột da tan trong nướcLấy chính xác 100 ml nước cất, thêm 6 g bột da khô (TT). Lắc đều trong 15 phútvà lọc. Lấy chính xác 25 ml dịch lọc bốc hơi đến khô, sấy cắn ở 105 0C trong 3giờ. Cân, được khối lượng TO (g).Hàm lượng phần trăm (%) taninoid trong dược liệu tính theo công thức:(T1  T2  To )  10  100 aa: Khối lượng dược liệu khô kiệt (g).PHƯƠNG PHÁP 2Tiến hành trong điều kiện tránh ánh sáng.Chuẩn bị thuốc thửThuốc thử Folin-Ciocalteu (1N): Pha loãng dung dịch thuốc thử Folin-Ciocalteu2N (TT) với nước cất trong bình định mức. Bảo quản thuốc thử ở 4 ºC. Thao táctrong điều kiện tránh ánh sáng. Thuốc thử có màu vàng sáng. Không sử dụng khithuốc thử chuyển xang màu xanh rêu.Dung dịch acid tannic chuẩn 0,1 mg/ml: Hòa tan 25 mg acid tannic (TT) (Merck)trong 25 ml nước rồi pha loãng tiếp với nước thành dung dịch 1:10. Thực hiệntrong điều kiện tránh ánh sáng. Dung dịch chỉ pha khi dùng.Polyvinyl polypyrrolidon không tan: Dạng bột, tiêu chuẩn thuốc thử (Sigma, P6755).Dung dịch thửCân chính xác một lượng bột dược liệu (theo quy định của từng chuyên luận) chovào một bình định mức 250 ml. Thêm 200 ml nước, lắc đếu, đậy kín và để yên 12giờ nơi tối. Sau đó lắc đều và để trong bể siêu âm trong 10 phút, để nguội và bổsung nước tới vạch. Lắc đều và để yên cho bã dược liệu lắng xuống. Lọc, bỏ 50 mldịch lọc đầu. Lấy chính xác 20 ml dịch lọc sau cho vào bình định mức 100 ml. Bổsung nước tới vạch.Xây dựng đường chuẩnĐường chuẩn định lượng được thực hiện theo bảng sau: Dung dịch acid Dung dịch natriỐng Nước Thuốc thử Folin- tannic (0,1 carbonat 20%nghiệm c ất Ciocalteu mg/ml) (TT) (ml) (ml) (ml) (ml)Chứng 0,00 2,50 1,25 6,251 0,10 2,40 1,25 6,252 0,20 2,30 1,25 6,253 0,30 2,20 1,25 6,254 0,40 2,10 1,25 6,255 0,50 2,00 1,25 6,25Đo độ hấp thu của các dung dịch so với ống chứng ở bước sóng 725 nm. Vẽđường biểu diễn sự tương quan giữa nồng độ và độ hấp thu (đường chuẩn).Đường chuẩn được xác định theo từng lần định lượng.Định lượng polyphenol toàn phầnLấy chính xác 0,5 ml dung dịch thử cho vào bình định mức 10 ml. Thêm 2 mlnước cất, 1,25 ml thuốc thử Folin-Ciocalteu và 6,25 ml dung dịch natri carbonat20 % (TT). Thêm nước đến vạch, lắc đều và để yên 40 phút. Đo độ hấp thu củadung dịch so với ống chứng ở bước sóng 725 nm.Tính lượng polyphenol toàn phần trong dung dịch thử theo acid tannic dựa vàođường chuẩn.Lượng dung dịch thử có thể thay đổi sao cho độ hấp thụ của dung dịch nằm trongkhoảng 0,15 – 0,5.Định lượng polyphenol đã loại tanninLấy 500 mg polyvinyl polypyrolidon vào bình định mức 10 ml. Thêm vào 4 mlnước cất và chính xác 5 ml dung dịch thử. Bổ sung nước tới vạch và lắc đều. Giữbình ở 4 ºC trong 15 phút. Lắc đều và đem ly tâm 3000 vòng/phút trong 10 phút.Lấy dịch ly tâm.Lấy chính xác 1,0 ml dung dịch thử cho vào bình định mức 10 ml. Thêm 1 mlnước cất, 1,25 ml thuốc thử Folin-Ciocalteu và 6,25 ml natri carbonat 20 % (TT).Thêm nước đến vạch, lắc đều và để yên 40 phút. Đo độ hấp thu của dung dịch sovới ống chứng ở bước sóng 725 nm.Tính toán lượng polyphenol đã loại tannin trong dung dịch thử theo acid tannicdựa vào đường chuẩn.Lượng dung dịch thử tác dụng với polyvinyl polypyrolidon có thể giảm nếu lượngpolyphenol toàn phần trong dung dịch vượt quá 10 mg.Lượng dịch ly tâm đem định lượng có thể thay đổi sao cho độ hấp thu của dungdịch nằm trong khoảng 0,15 – 0,5.Tính kết quảLượng tannin tính theo acid tannic có trong dung dịch thử được ...