Giá trị chẩn đoán của xét nghiệm định lượng gen BCR-ABL trong huyết tương bệnh nhân bạch cầu mạn dòng tủy

Bài viết nhằm làm rõ vai trò của huyết tương bệnh nhân CML trong xét nghiệm xác định tổ hợp gen BCR-ABL. Phương pháp: mô tả cắt ngang; Thực hiện trên 69 trường hợp CML đang điều trị TKI. Mẫu máu ngoại vi được thu thập và làm xét nghiệm BCR-ABL phục vụ cho nghiên cứu cùng lúc với xét nghiệm thường quy trên mẫu tủy xương.
Nội dung trích xuất từ tài liệu:
Giá trị chẩn đoán của xét nghiệm định lượng gen BCR-ABL trong huyết tương bệnh nhân bạch cầu mạn dòng tủy Y HỌC VIỆT NAM TẬP 496 - THÁNG 11 - SỐ ĐẶC BIỆT - 2020 GIÁ TRỊ CHẨN ĐOÁN CỦA XÉT NGHIỆM ĐỊNH LƯỢNG GEN BCR-ABL TRONG HUYẾT TƯƠNG BỆNH NHÂN BẠCH CẦU MẠN DÒNG TỦY Vy Thế Hà2, Nguyễn Trường Sơn1, Phạm Văn Lợi2, Thái Minh Trung2, Lê Hùng Phong2, Phan Công Hoàng2, Hoàng Thị Thúy Hà2, Nguyễn Tự2 ,Trần Thanh Tùng2, Nguyễn Thị Bé Út2, Huỳnh Hồng Hoa2, Huỳnh Anh Dũng2TÓM TẮT 12 tương chưa thể thay thế cho mẫu tuỷ xương trong Mục tiêu: nhằm làm rõ vai trò của huyết việc chẩn đoán và theo dõi điều trị.tương bệnh nhân CML trong xét nghiệm xác Từ khóa: BCR-ABL, CML, huyết tươngđịnh tổ hợp gen BCR-ABL. Phương pháp: mô tả cắt ngang; thực hiện SUMMARYtrên 69 trường hợp CML đang điều trị TKI. Mẫu Purpose: to clarify the role of plasma samplemáu ngoại vi được thu thập và làm xét nghiệm of CML patients in detecting BCR-ABL fusionBCR-ABL phục vụ cho nghiên cứu cùng lúc với gene.xét nghiệm thường quy trên mẫu tủy xương. Methods: total of 69 CML patients wereThống kê Kappa được sử dụng để tính độ đồng selected for this cross-sectional study. Thethuận kết quả BCR-ABL định tính, trong khi hồi matched plasma samples were used to test thequy tuyến tính được sử dụng để ước lượng hệ số appearance of BCR-ABL fusion gene paralleltương quan định lượng gen giữa hai loại mẫu. with the routine test in bone-marrow. The kappa Kết quả: BCR-ABL xuất hiện trong cả hai statistical analysis was used to estimate theloại mẫu của 69 trường hợp; dương tính trong tủy concordance rate of qualitative result while thexương nhưng âm tính trong huyết tương là 26 linear regression was used to test the correlationtrường hợp; và âm tính trong cả hai loại mẫu là 8 of quantitative BCR-ABL transcript betweentrường hợp. Độ đồng thuận kết quả trong huyết samples.tương so với trong tủy xương đạt 60,9% Results: BCR-ABL fusion gene was detected(Kappa=0,2, P KỶ YẾU CÁC CÔNG TRÌNH NGHIÊN CỨU KHOA HỌC CHUYÊN NGÀNH HUYẾT HỌC - TRUYỀN MÁUI. ĐẶT VẤN ĐỀ tại chỗ phát huỳnh quang (FISH: flourescent Bệnh bạch cầu mạn dòng tủy là bệnh in situ hybridization). Đồng thời, xét nghiệmthuộc hội chứng tăng sinh tủy mạn ác tính, xác định kiểu gen và định lượng bản phiênđặc trưng bởi sự tăng các tế bào dòng bạch mã BCR-ABL được khuyến cáo thực hiệncầu hạt có biệt hóa trưởng thành, hậu quả là bằng kỹ thuật RT-PCR, đánh giá kết quảsố lượng bạch cầu tăng cao ở máu ngoại vi theo thang chuẩn quốc tế (IS-NCN:với đủ các tuổi của dòng bạch cầu hạt [2]. Tổ international scale normalize copy number)hợp gen BCR-ABL, gây ra do sự đứt gãy và [19]. Trong quá trình điều trị với TKI, chỉ sốtrao đổi giữa 2 nhiễm sắc thể số 9 và số 22 định lượng BCR-ABL bằng kỹ thuật RT-tạo chuyển đoạn t(9;22)(q34;q11) (hay PCR được khuyến cáo theo dõi liên tục. Xétnhiễm sắc thể Phi) [6,19]. Tổ hợp gen này nghiệm này được thực hiện trên tế bào máuxuất hiện trên 95% trường hợp CML, gồm ngoại vi rất gần đây nhằm giảm thiểu nguynhiều kiểu gen khác nhau phụ thuộc vị trí đứt cơ biến chứng do thủ thuật chọc hút tủygãy và bắt cặp giữa 2 nhiễm sắc thể, trong đó xương. Tuy nhiên, một vài nghiên cứu cho2 kiểu gen thường gặp nhất là P210 (b2a2 và thấy ở những trường đáp ứng sâu về mặt sinhb3a2) và P190 (e1a2). Kiểu gen P230 học phân tử, số lượng bạch cầu trong máu(e19a2) và một số kiểu gen khác của BCR- ngoại vi ở mức thấp có thể ảnh hưởng tới sốABL rất hiếm gặp ( Y HỌC VIỆT NAM TẬP 496 - THÁNG 11 - SỐ ĐẶC BIỆT - 2020nhiễm sắc thể Phi+ trong tủy xương bằng kỹ dịch AVE, sau đó loại bỏ hạt từ để thu 60µlthuật FISH; chưa hoặc đang được điều trị dung dịch chứa RNA tổng số. RNA sau táchbằng TKI tại khoa Huyết học từ 12/2018 đến chiết được lưu trữ ở -80oC khi chưa chạy07/2020. Theo thiết kế ban đầu, nghiên cứu PCR liền.cần ít nhất 70 bệnh nhân CML. Bên cạnh Phản ứng phiên mã ngược tạo cDNAviệc chọc hút tủy xương để làm xét nghiệm Phản ứng PCR phiên mã ngược được thựcdi truyền theo yêu cầu của bác sĩ lâm sàng hiện bằng bộ kit RT, theo hướng dẫn của nhà(nghiên cứu không can thiệp vào bệnh nhân sản xuất (Qiagen, Hilden, Đức). Chuẩn bịvà quy trình khám chữa bệnh thường quy), phản ứng bằng cách trộn 5μl RT buffer + 2μlbệnh nhân được tư vấn tham gia vào nghiên dNTP + 5,25μl Random nanomer + 0,5μlcứu, trước k ...